浙科版选修1 大肠杆菌的培养和分离 课件（34张）.pptVIP

第1课时大肠杆菌的培养和分离 选考报告 1 培养基 一 微生物培养的基本条件 1 含义 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 2 种类 液体 固体 琼脂 选择 鉴别 3 成分 一般都含有水 氮源和无机盐等最基本的物质 有时还需要加入生长因子 碳源 2 无菌技术 1 含义 无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 保持微生物的纯培养 而且在分离 转接时亦能防止其他微生物污染 2 无菌操作 对实验空间 操作台可用 或酒精消毒 操作者的手用 消毒 实验用的培养器皿和培养基一般用 法灭菌 接种环用灼烧方法灭菌 为避免周围环境中微生物的污染 实验操作应在 附近进行 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 紫外线 酒精 高压蒸汽灭菌 酒精灯火焰 小贴士消毒和灭菌的比较 典例剖析 下列有关微生物培养条件的叙述 不正确的是 a 分离微生物常用固体培养基 扩大培养常用液体培养基b 细菌喜荤 霉菌喜素 培养基中成分的含量和配比因培养物而异c 培养基的灭菌均采用高压蒸汽法 即在121 1kg cm2压力 下灭菌15mind 制作固体培养基时常常加入琼脂 解析培养基的灭菌通常是采用高压蒸汽法 但因培养基的成分而异 如培养基中有葡萄糖 高压蒸汽条件下会导致葡萄糖分解碳化 应该采用500g cm2压力灭菌30min 答案c 1 不同种类微生物需要的培养基不同 但各种培养基配制完成后均需严格灭菌 2 培养基灭菌通常采用高压蒸汽法 但如果培养基中含有葡萄糖 为防止葡萄糖分解碳化 要用500g cm2压力 90 以上 灭菌30min 有些不能加热灭菌的化合物 如尿素等只能用g6玻璃砂漏斗过滤 3 配制固体培养基时 需要添加凝固剂 如琼脂 但凝固剂不止琼脂一种 变式训练 下列关于灭菌和消毒的理解不正确的是 a 灭菌是指杀灭环境中的一切微生物 包括芽孢和孢子b 消毒和灭菌实质上是完全相同的c 接种环用灼烧法灭菌d 常用灭菌方法有灼烧法 干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法解析消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 不包括芽孢和孢子 灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 包括芽孢和孢子 答案b 二 大肠杆菌的培养和分离 1 大肠杆菌 1 性质 大肠杆菌是革兰氏 性 的肠道杆菌 2 用途 大肠杆菌是 技术中被广泛采用的工具 阴 兼性厌氧 基因工程 2 实验原理 1 扩大培养原理 将大肠杆菌接种在lb 培养基中 使其快速分裂繁殖 2 分离纯化原理 将待检测微生物样品通过 或 接种在lb 培养基上 样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落 将单个菌落接种到 培养基上 经培养后 即可得到一个微生物的纯种 液体 划线 涂布 固体 斜面 3 实验步骤 倒平板 接种 高压蒸汽 液体 接种环 划线法 接种环 固体 倒置 小贴士倒平板的具体操作 典例剖析 请结合图示 回答下列有关大肠杆菌分离与纯化的问题 1 稀释用1ml无菌吸管吸取1ml大肠杆菌培养液 加入到盛有9ml 的大试管中 充分混匀 稀释 倍 按照同样的方法依次进行稀释制成10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6系列稀释度的大肠杆菌稀释液 2 划线或涂布 划线分离法a 操作 在 旁 左手拿皿底 右手拿接种环 挑取大肠杆菌培养液在平板上划线 b 划线方法 划线和 划线 c 分区划线时 第一次划线及每次划线之间都要灼烧接种环 划线结束后也要灼烧接种环 目的分别是什么 涂布分离法 a 将 浸在盛有酒精的烧杯中 b 取不超过0 1ml的 滴加到培养基表面 c 将蘸有少量酒精的玻璃刮刀在火焰上引燃 待酒精燃尽后 冷却8 10s d 用玻璃刮刀将菌液均匀地涂布在培养基表面 涂布时可转动培养皿 使菌液分布均匀 3 培养 将接种的平板 于培养箱或温室中37 培养12 24h 答案 1 无菌水10 2 a 酒精灯火焰b 分区 或平行 连续 c a 涂布器b 菌液 3 倒置 1 细菌两种分离方法的比较 2 大肠杆菌的培养和分离应注意的几个问题 倒平板时防止培养基外溅 在倒平板的过程中 不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 划线分离时第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环 灼烧接种环 待其冷却后才能伸入菌液 以免温度太高杀死菌种 划线时最后一区域不要与第一区域相连 划线用力大小要适当 防止用力过大将培养基划破 培养时平板需倒置 平板冷凝后皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 本实验需设置未接种大肠杆菌的lb固体培养基在相同条件下一起培养 以确定是否有杂菌污染 变式训练 下图甲 乙是微生物接种常用的两种方法 请回答相关问题 1 图甲是利用 法进行微生物接种 图乙是利用 法进行微生物接种 这两种方法所用的接种工具分别是 和 对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是 和酒精消毒 2 接种操作为什么一定要在火焰附近进行 3 接种后 在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养 4 如图甲 乙是采用上述接种方法接种后培养的效果图解 其接种方法是 填 图甲 或 图乙 解析图甲和图乙分别是划线分离法和涂布分离法 这两种方法所用的接种工具分别是接种环和玻璃刮刀 由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域 因此接种常在火焰附近进行 在微生物培养过程中须将培养皿倒置 以防止皿盖上的水珠落入培养基中 造成污染 答案 1 划线分离涂布分离接种环玻璃刮刀灼烧灭菌 2 火焰附近存在着无菌区域 3 防止皿盖上的水珠落入培养基中 造成污染 4 图乙 1 本实验用lb液体培养基扩大培养大肠杆菌 在lb固体平面培养基上划线进行分离 2 分离细菌的方法有划线分离法和涂布分离法 其中前者简单 但后者单菌落更易分开 3 灼烧接种环之后 要冷却后才能伸入菌液中 4 进行恒温培养时 须将培养皿倒置 思考与练习 第24页 1 如何操作才可以尽量避免被杂菌污染 1 胆大心细 操作快捷 2 注意灭菌操作原则 灭菌彻底 降低环境污染概率 3 注意微生物生长条件 如ph 渗透压 温度等 细菌喜中偏碱 喜荤 喜蛋白质 喜37 霉菌喜中偏酸 喜素 喜糖 喜25 30 2 在培养后如何判断是否有杂菌污染 1 菌落的形态看 是否湿润 透明 粘稠 颜色等 是区别细菌 酵母菌 放线菌和霉菌关键指标 2 显微镜观察其形态 大小 看是否有菌丝 孢子 芽孢 是区别细菌 酵母菌 放线菌和霉菌关键指标 3 上述方法较难区别同类的不同物种 需借助化学和进一步的形态观察 如用革兰氏染色法等 3 进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较大 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 影响单菌落的形成 达不到分离的目的 4 实验完成后 接种过细