血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳_第1页
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳_第2页
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳_第3页
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳_第4页
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 目的了解电泳技术的一般原理 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作 实验原理带电粒子 为胶体粒子 在电场中向与自身带相反电荷的电极移动 称为电泳 不同物质由于带电性质不同 因而在一定的电场强度下移动的速度不同 以氨基酸为例 qU mv2 12 在某种pH下 某一AA可显电中性 即带着相等的正负离子 呈兼性离子 此时若在电场中 这一AA既不向正极移动 也不向负极移动 这一pH值被称为这一AA的等电点 以PI表示 AA是一种典型的两性电解质 一个混合的蛋白质样品由于各蛋白质的等电点不同 在相同的pH溶液中所带的电荷性质不同 电荷的数目不同 在电场中各种蛋白质泳动的速度和方向也不相同 从而使蛋白质混合样分离开来 溶液的pH值 溶液的pH值决定了带电颗粒的解离程度 也决定了物质所带净电的多少 对蛋白质和氨基酸等两性电解质而言 pH值离等电点越远 颗粒所带净电荷越多 泳动速度也越快 反之越慢 因此 分离某一蛋白质混合物时 应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH值 以利于各种蛋白质的分离 为使电泳过程中溶液的pH值恒定 必须使用缓冲溶液 本次实验使用的是巴比妥 巴比妥钠缓冲溶液 pH为8 6 醋酸纤维电泳的特点 优点 简单 快速 定量等 区带清晰 灵敏感度高 便于保存和照相 缺点 较聚丙烯酰胺电泳分辨率低 聚丙烯酰胺电泳有两重效用 电泳和分子筛 实验步骤 1 平衡选择质地均匀的膜条浸透在缓冲液中10分钟左右 取出用滤纸吸干多余的水份 2 点样识别出光泽面与无光泽面 平放于滤纸上 在无光泽面距膜一端2cm处用点样器点样 点样一定要均匀 这是实验成败最关键的一步 电泳点样一面朝上 放入电泳槽中 点样端放在阴极 调节电流 电泳时间约1小时左右或在点样处点一点溴酚兰作为指示 电流强度为 0 7mA cm膜宽 每片膜宽约2cm左右 每个电泳槽大概放十片膜 因此电流开始时预电流为10mA左右 十分钟后调到18mA 染色电泳完毕后将膜条取下放在染色液中染色10分钟 染色液为氨基黑10B 漂洗将膜条从染色液中取出放置漂洗液中 漂洗数次至条带清晰为止 结果分析 各蛋白质pI如下 白蛋白 A 4 88 1球蛋白5 06 2 球蛋白5 12 球蛋白6 85 7 3 1 定量测定 可将膜条用滤纸压平吸干 按区带分段剪开 分别浸在浓度0 4mol L氢氨化钠溶液中 并剪取相同大小的无色带膜条作空白对照 进行比色 或者将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡2
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 技术指导

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论