生化技术实习报告.doc

实 习 报 告实习名称 系 别 年级专业 学生姓名 指导老师 一、实习时间、地点、单位1、实习时间：2、地点和实习单位二、实习过程概述（一）实习工作准备1. 时间：1天2. 内容：（1）熟悉实验方案，认真预习仪器的使用。（2）分组和准备所需的仪器。（二）山茱萸有效成分熊果酸的超临界CO2萃取1. 时间：4天2. 内容：（1）模拟操作二氧化碳超临界萃取装置。（2）烘干、粉碎山茱萸。（3）萃取。（三）加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸1. 时间：4天2. 内容：（1）模拟操作二氧化碳超临界萃取装置。（2）烘干、粉碎山茱萸。（3）加携带剂萃取。（四）HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量1. 时间：1天2. 内容：（1）处理萃取物。（2）用HPLC定性和定量分析有效成分。（五）书写实习报告时间：1天三、主要实习岗位和实习内容（一）实习目的1、 掌握超临界CO2萃取的原理；2、 掌握超临界CO2萃取的操作；3、 掌握材料的处理与准备；4、 掌握携带剂对萃取结果的影响；5、 掌握加携带剂CO2超临界萃取的操作；6、 掌握高效液相色谱（HPLC）的原理和操作；7、 掌握用高效液相色谱定性和定量分析有效成分。（二）实习内容 1. 基本原理超临界CO2萃取是利用与分离物质与杂质在超临界CO2中溶解度不同而达到分离的一种萃取技术。超临界流体兼有汽、液两者的特点，密度接近于液体，粘度和扩散系数接近于气体，它不仅具有与液体溶剂相当的溶解能力，而且具有优良的传质性能。超临界CO2萃取技术就是利用这种超临界流体的特殊性质，在高压条件下与待分离的固体或液体混合物接触，有效成分能溶解在超临界流体CO2，通过调节系统的操作压力和温度，可萃取所需要的物质。随后通过降压或升温的方法，降低超临界流体CO2的密度，是萃取物溶解度降低，是目的物和超临界流体分离，萃取得到有效成分即目的物。携带剂是在超临界流体萃取过程中为了提高分离效果，在超临界流体中添加少量的另一种溶剂(如水、乙醇、丙酮等)。 测定萃取物中有效成分熊果酸的含量使用高效液相色谱（HPLC）,高效液相色谱又称高速或高压液相色谱，是在经典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术，特别适用于高沸点，不能气化或者热稳定性差的有机物分离，HPLC在高压条件下，使液体通过色谱柱，在室温条件下分离混合组分，经检测器转变为电信号，有记录器描记数据处理装置显示测定结果。2. 实验材料1、 材料：山茱萸2、 试剂：CO2气体，乙醇（携带剂）3、 仪器：超临界CO2萃取装置、植物样本粉碎机、紫外检测器、示差折光检测器、荧光检测器。3. 操作步骤3.1熟悉方案及领取材料和仪器3.1.1 实验开始前熟悉实验方案和步骤，认真听老师详细讲解仪器的使用和注意事项。3.1.2 领取1千克山茱萸。3.2茱萸有效成分熊果酸的超临界CO2萃取1、材料的准备 选择优质的山茱萸材料，把其中的杂质去掉，称取1山茱萸在70100C烤箱中烘烤34小时至完全干燥为止。用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。 2、萃取称取100 g 粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为40C下萃取34小时。并按CO2超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作：（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况下才正式开机操作。）3、收集萃取物在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml 锥形瓶。每萃取1个小时收集一次，具体操作按说明书。最后收集完后，用封口膜封好锥形瓶，贴好标签并标好组号，时间等。保存好以备后面实验。4、记录应认真记好实验数据，包括实验的条件（如萃取温度、压力、萃取时间等），实验结果和实验现象等。5、仪器清理做完实验后，应依次用自来水，蒸馏水和无水乙醇清洗萃取缸和分离缸。清理打扫实验现场，包括实验台卫生，实验室卫生。特别提醒注意关掉萃取装置总电源。3.3加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸1、材料的准备选择好山茱萸材料，把其中的杂质去掉，称取1公斤山茱萸在701000C烤箱中烘烤34小时至完全干燥为止。用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。 2、加携带剂萃取称取100 g 粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为400C下、按说明书操作加入100ml无水乙醇携带剂。并按CO2超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作，萃取34小时。（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况下才正式开机操作。）3、收集萃取物在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml 锥形瓶。每萃取1个小时收集一次，具体操作按说明书。最后收集完后，用封口膜封好锥形瓶，贴好标签并标好组号，时间等。要保存好以备后面实验。4、记录应认真记好实验数据，包括实验的条件（如萃取温度、压力、萃取时间和加入携带剂的种类和数量等），实验结果和实验现象等。5、仪器清理做完实验后，应依次用自来水，蒸馏水和无水乙醇清洗萃取缸和分离缸。清理打扫实验现场，包括实验台卫生，实验室卫生。特别提醒注意关掉萃取装置总电源。3.4HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量1、标准样器的配制用电子天平精确称取熊果酸标准样品1.5mg置于2mlEP管中，用移液器精确量取1ml无水甲醇（色谱纯）加入EP管中，使熊果酸充分溶解于甲醇中，即得1.5mg/ml的标准液。2、样品的制备将前面得到的超临界CO2萃取物分别先用色谱纯甲醇充分溶解，再定容至50ml、过滤，取滤液2ml置于2ml离心管中，离心5min（10000r/min），取上清液放于2ml离心管中用于HPLC定性定量分析。3、上样层析色谱条件：色谱柱YWG-C18（250mm4.5mm, 10m）流动相：甲醇，流速：1.0ml/min;紫外检测器波长215nm；柱压：030Mpa;进样量20l；柱温，室温。准备好HPLC装置，分别用标样和样品层析，采集数据，并打印好色谱图。4、计算用面积归一法通过标准样品峰面积和含量与样品峰面积与含量的关系算出样品的含量。（三）数据处理和结果分析从色谱图中读取数据： 峰面积 时间/min 浓度mg/ml未加携带剂： 13060 6.688 C1加携带剂： 7000 6.854 C2标准样品： 2456143 6.612 9.513060 /C1=2456143/9.5 C1=0.0505mg/ml 7000 /C2=2456143/9.5 C2=0.0271mg/ml结果分析：加携带剂的熊果酸含量比未加携带剂含量低，与理论相反。原因：（1）携带剂乙醇所加的量太少纯度没有达到要求； （2）仪器分辨效率不高。四、实习收获和重要心得为期二周的生化技术课程实习结束了，在这次的实习中我收获了许多，也学到了很多。不仅是学习方面的，更重要的是自己的动手实践能力也得到了很大的提高。让我了解到学习不能仅限于书本，纸上谈兵，应该是从实践中巩固和灵活运用所学到的知识，才能做到学以致用，为以后的工作和考研打下坚实基础。这次的实习是熊果酸的超临界二氧化碳萃取及高效液相色谱法测定熊果酸的含量。开始实习时，通过预习实习指导书上的内容，对整个实习有了大致的了解。但是一直对实习中用到的仪器装置的使用很畏惧。进是实验室后，看着实验室里的二氧化碳超临界萃取装置，更加畏难。那么多的控制开关，还用许多注意事项更是晕头转向。但在老师的详细的讲解和悉心的指导下，基本掌握了仪器的使用。同时老师还教导我们一定要动手实践，不要担心用坏仪器，一定要放手大胆地动手。只有自己动手才能发现自己在操作中存在的问题和不足，才能解决问题，不断提升自己的理论水平，不断提高自己的动手实践能力。随后在组长的标准示范下，我们一个一个的操作。开始因为不熟练，有些手忙脚乱，有些地方还出了错，在组长和同学耐心的指导下改正，经过不断地动手操作，能熟练使用二氧化碳超临界萃取装置。同时熟悉了在萃取过程中的物料流程，和超临界萃取装置使用中应该注意的问题。从中我也领悟到，做事情不能畏难，一定要认真脚踏实地做好每一步。这次实验不仅仅是一次学习与实践，更重要的是学到了一种方法，一种应对问题的经验，一种面临难题的解决思路，同时也注意到了一些自身的问题，遇到问题不应有畏难情绪，要坚持下来了。学习就是不断获得新的知识，运用知识，发现问题，解决问题，不断提高、进步的过程。在超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸的过程中，我们也遇到了许多问题。开始山茱萸的粉碎用的是那台大的粉碎机，虽然粉碎效果较好，但是实验室到处是山茱萸的尘粒。后面大家一起讨论，最后决定用小粉碎机，只是需要经过二次粉碎。第一次粉碎只能达到粗碎的目的，第二次粉碎后的山茱萸才符合要求。从中我学到团队精神的重要性，遇到问题大家要一起讨论，一起寻找原因，最后解决问题。在实验的同时我们必须认真如实地做好实习笔记，要把每天的实验流程和实验现象记录下来，这些是我们寻找实验失败原因的重要依据。实习不仅让我在思想上有了深刻认识，更加完善了自己的知识理论体系。同时自己的操作技能也提高了很多。从仪器达的模拟操作到实际操作，从理论到实践，都在老师的细心指导和同学的帮助下掌握并能独立操作。学会了CO2超临界萃取仪和高效液相色谱仪的使用。尤其是CO2超临界萃取仪开关不能混用，一定要掌握什么时候开哪些开关，哪些开关在哪些时间关闭。收集萃取液的时候要操作得当，否则会冻坏手指。进行高效液相色谱时也有许多要注意的问题。这次实习，我们用到了许多专业知识，主要是生化技术包括理论和实验技能部分，如超临界萃取，高效液相色谱法及仪器的操作。通过这次实习，达到了理论与实践的结合的目的，使我所学的专业知识得到融会贯通，知识体系更加完整。尽管在许多具体实验操作中出现错误，但通过老师的指导、仔细查阅相关资料、队友们的一起讨论和自己不断地思考琢磨，不断地改正错误，总结经验，最终从失败中走了出来，成功完成了这次实习的实验部分。成功与大家的共同努力和汗水是分不开的。更重要的是，我更加明白了，不能抱着修学分，走过场的态度任务式的完成实习。实习不仅是一次锻炼了机会，也是对我们所学知识的一种检验。注重的不是结果，而是在实习中锻炼自己的各方面的能力，包括用理论知识解决学习、生活和工作中遇到的问题，实战经验的积累。为以后考研深造、步入社会工作积累了一笔宝贵的财富。总之，通过这次实习，不仅使我在思想上和行为上成熟了许多，巩固了我的知识体系，更重要的是增强了动手操作能力，为以后的学习工作积累丰富的经验。使我的学科素养得到提升，为今后的学习工作中获得了不少宝贵的经验。我也认识到自己理论知识的局限和动手操作方面的不足，应该更加认真地对待专业知识的学习，真正做到融会贯通，学以致用。最重要的是应该更加认真的对待平时实验，不断加强自己的动手能力，把理论与实践紧密联系起来。为以后考研或是找工作做好充分准备。五、存在的不足和建议 学校可以适当的增加实验的机会，让我们熟练掌握实验的理论及操作。提供一个平台，让我们更好地掌握而且能够熟练、安全地操作。 实习前一定要认真预习实验和熟悉操作，遇到不懂的地方应查资料或是请教老师或同学，直到自己真正理解。 作为学生，我们不仅要虚心向老师请教，而且应该加强自己的专业素养和实验操作素养，熟练掌