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实验八 豆乳中蛋白质含量的测定1、 实验内容 用凯式定氮法测定豆乳饮料中蛋白质含量。二、实验目的与要求1、理解定氮装置的原理及操作要点。2、掌握凯式定氮法中样品的消化、蒸馏、吸收等基本操作技能。3、进一步熟练掌握滴定操作。三、实验原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。硫酸氨用氢氧化钠中和生成氢氧化铵，加热又分解为氨，用硼酸吸收。吸收氨后的硼酸再以标准盐酸或硫酸溶液滴定，根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。四、试剂（1）硫酸铜（2）硫酸钾（3）浓硫酸 （4）甲基红溴甲酚绿混合指示剂：5份1g/L溴甲酚绿95%乙醇溶液与1份1g/L甲基红乙醇溶液混合。 （5）400g/L氢氧化钠溶液（6）20g/L硼酸吸收液：20g硼酸（化学纯）溶解于1000 mL热水中，摇匀备用。（7）0.0500 mol/L盐酸标准溶液五、仪器 凯式烧瓶、凯式（常量或微量）定氮装置，如下图所示。凯氏定氮蒸馏装置六、实验步骤 准确吸取10.00 mL豆乳样品（豆粉准确称取0.50 g，可用滤纸包好），小心移入干燥洁净的100 mL凯氏烧瓶中，然后加入研细的硫酸铜0.2g、硫酸钾6g和浓硫酸20mL，轻轻摇匀后，用电炉以小火加热，待泡沫停止产生后，加大火力，至液体变蓝绿色透明后，再继续加热微沸30 min。消化液待冷却后用水移入100mL容量瓶中，加水至刻度。按图装好凯氏定氮装置，准确移取消化液l0mL于反应管内，再加入10mL氢氧化钠溶液使呈强碱性，用少量蒸馏水洗漏斗数次，夹好漏斗夹，进行水蒸汽蒸馏。冷凝管下端预先插入盛有10mL 20g/L硼酸吸收液（加有混合指示剂）锥形瓶的液面下。蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始计时，继续蒸馏5min，将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。馏出液立即用0.0500 mol/L盐酸标准溶液滴定至灰红色为终点，记录盐酸溶液用量。同时作一空白试验（除不加样品外，从消化开始操作完全相同），记录空白实验盐酸溶液用量。七、结果处理式中： c盐酸标准溶液的浓度，mol/L； V1滴定样液时消耗盐酸标准溶液体积，mL； V2滴定空白时消耗盐酸标准溶液体积，mL； m样品质量，g； M氮氮的摩尔质量，14.01g/mol； F氮换算为蛋白质的系数。八、说明 1、消化过程中应不时转动凯式烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下来并促进消化。 2、蒸馏前给水蒸汽发生器内装水至2/3容积处，加数毫升稀硫酸及数滴甲基橙指示剂以使其始终保持酸性，水应呈橙红色,如变黄色时,要补加酸,这样可以避免在碱性时水中的游离氨被蒸出而影响测定结果。 3、在蒸馏时，蒸汽发
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