课题2　月季的花药培养.doc

植物的组织培养技术知识梳理中宁一中 徐少君一、菊花的组织培养1.植物组织培养的原理和过程（1）原理：植物细胞的全能性。（2）过程特别提醒：植物细胞具有全能的原因：生物的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成完整个体所必需的全部基因。植物细胞表现出全能性的条件：脱离母体；一定的营养物质和植物激素；无菌和适宜的外界条件。2.影响植物组织培养的主要因素（1）选材：一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。常用MS培养基。主要成分培养基大量元素：N、P、K、Ga、Mg、S。微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co。有机物：甘氨酸、盐酸、肌醇、维生素、蔗糖等。植物激素：细胞分裂素和生长素等。（2）营养供应（3）影响因素培养材料：材料本身的种类、年龄、保存时间长短等。微生物：对材料用具进行消毒和灭菌。pH：一般控制在5.8左右。温度：控制在1822.光照：每日日光灯照射12h。植物激素：使用顺序不同，实验结果不同：用量的比例不同，实验结果不同。特别提醒：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养；同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短对培养也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡，因此在培养过程中要求进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。3.实验操作制备MS固体培养基：配制各种母液配制培养基高压蒸汽灭菌。外植体消毒：70%酒精消毒无菌水清洗0.1%氯化汞溶液消毒无菌水清洗。接种与培养：工作台消毒酒精灯旁打开锥形瓶瓶口旋转通过火焰将菊花茎段插入培养 基中将封口膜扎好在1822的无菌箱中培养，每日日光灯光照12h。移栽与栽培：打开培养瓶封口膜培养试管苗几日流水清洗根部的培养基将幼苗移植到消 过毒的蛭石或珍珠岩环境下生长幼苗长壮后移栽到土壤中。特别提醒：熔化琼脂时要不断搅拌，防止琼脂发生焦糊现象。消毒时既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。接种时要始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用火焰灼烧灭菌。将菊花茎段插入培养基中。时注意不要倒插。二、月季的花药培养1.被子植物的花粉发育过程小孢子母细胞小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期（花粉粒）特别提醒：一个小孢子母细胞形成四个花粉粒。双核期花粉含有一个营养细胞和一个生殖细胞，生殖细胞将再分裂一次形成两个精子。2.产生花粉植株的两条途径特别提醒：两种途径主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。3.影响花药培养的因素（1）材料的选择：从花药来看，应当选择初花期的花药；从花粉来看，应当选择单核期的花粉；从花蕾来看，应当选择完全未开放的花蕾。（2）培养基的组成（3）材料的低温预处理（4）接种密度特别提醒：应选择花粉发育过程中的单核期细胞核移向一侧的时期，单核期以前的花药，质地幼嫩，极易破碎，单核期以后的花药，花瓣已有些松动，给材料的消毒带来困难。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。4.实验操作醋酸洋红溶液染色红色焙花青铬钒溶液染色蓝黑色镜检符合要求的花粉（1）材料的选择Com（2）材料的消毒花蕾70%酒精约20s无菌水清洗无菌吸水纸吸干水分1%氯化汞溶液24min无菌水冲洗（3）接种和培养剥取花药：消毒后的花蕾，要在无菌条件下除去花萼、花瓣。来源:学*科*网Z*X*X*K 接种花药：剥取的花药要立刻接种到培养基上，每个培养瓶接种710个花药。 培养：花药培养利用的培养基是MS培养基，pH为5.8，温度为25，幼苗形成之前不需要 光照。特别提醒：剥取花药时，一是注意不要损伤花药，原因是容易从受伤部位产生愈伤组织；二是要彻底除去花丝，原因是花丝不利于愈伤组织或胚状体的形成。月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比，在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。三、菊花的组织培养与月季的花药离体培养比较项目菊花茎组织培养月季花药离体培养理论依据植物细胞的全能性材料选取未开花植株茎上部新萌生的侧枝完全未开放的花蕾光照状况每日用日光灯照射12 h开始不需要光照，幼小植株形成后需要光照操作流程制备MS培养基外植体