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专题十八生物技术实践专题 无氧 20 酸性 榨汁 二 果醋制作1 原理 醋酸菌在的条件下进行醋酸发酵 2 反应式 c2h5oh o2ch3cooh h2o 3 发酵条件 最适温度为 适时通气 控制供应 4 制作流程 挑选水果 冲洗 榨汁 醋酸发酵 果醋 一 果酒的制作1 原理 酵母菌在的条件下能进行酒精发酵 2 反应式 c6h12o62c2h5oh 2co2发酵条件 温度控制在18 25 最适为 ph呈 3 制作流程 挑选水果 冲洗 酒精发酵 果酒 有氧 30 35 糖源 酒精发酵 三 腐乳制作1 原理 毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的 脂肪酶可将脂肪水解为 2 制作流程 让豆腐上长出毛霉 加盐腌制 加装瓶 密封腌制 1 原理 利用在无氧条件下将葡萄糖分解成 反应式 c6h12o62c3h6o3 乳酸 2 制作流程1 原理 利用在无氧条件下将葡萄糖分解成 反应式 c6h12o62c3h6o3 乳酸 多肽和氨基酸 甘油和脂肪酸 卤汤 乳酸菌 乳酸 酶 酶 乳酸 乳酸菌 考点一果酒 果醋 腐乳及泡菜的制作原理及过程 1 发酵装置 如右图 1 各部位的作用充气口 在醋酸发酵时连接充气泵进行充气 排气口 排出酒精发酵时产生的co2 出料口 是用来取样的 连接瓶身与排气口的长而弯曲的胶管 防止空气中微生物的污染 2 该装置的使用方法使用该装置制酒时 应该关闭充气口 制醋时 应将充气口连接气泵 输入氧气 2 实验关键 1 材料的选择与处理 选择新鲜的葡萄 榨汁前先冲洗后再去枝梗 以防葡萄汁流失及污染 2 防止发酵液被污染 榨汁机要清洗干净并晾干 发酵瓶要洗净并用70 的酒精消毒 装入葡萄汁后要封闭充气口 3 发酵条件的控制严格控制温度 18 25 利于酵母菌的繁殖和酒精发酵 30 35 利于醋酸菌的繁殖和醋酸发酵 充气 酒精发酵为无氧发酵 需封闭充气口 醋酸发酵为有氧发酵 需经充气口充气 特别提醒 葡萄汁装入发酵瓶时要留约1 3的空间 目的是先让酵母菌进行有氧呼吸 快速繁殖 耗尽o2后再进行酒精发酵 防止发酵过程中产生co2造成发酵液的溢出 果汁发酵后酒精的检验 3 腐乳制作注意事项 1 注意盐用量 以豆腐块与盐的质量比为5 1最合适 豆腐块分层放置 分层加盐 瓶口表层的盐要铺厚一些 盐浓度低 不足以抑制微生物生长 浓度过高 影响口味及品质 表层厚铺盐是为防止杂菌从瓶口进入 2 豆腐含水量以70 为宜 毛霉为异养需氧型真菌 若含水量过高 影响毛霉的有氧呼吸 若含水量过少 则不利于毛霉的生长 毛霉的代谢也离不开水 3 配制卤汤时酒量控制加酒的目的之一是杀死微生物 如果过少 达不到杀死微生物的目的 导致豆腐腐败 若过多 不但杀死了微生物 而且会因酒精度过高抑制了酶的活性 从而影响腐乳的成熟 同时还会因酒精含量过高而影响腐乳的风味 一般应控制在12 左右 4 防止杂菌污染 所用器械要沸水消毒或高压灭菌 加入卤汤和辅料后 将瓶口用酒精灯加热灭菌后再密封 5 控制适宜温度 毛霉的最适生长温度为15 18 保持其适宜温度 可缩短发酵时间 典型示例1 下列关于果酒制作过程中的叙述 正确的是a 应先去除葡萄的枝梗 再进行冲洗 这样洗得彻底b 在变酸的果酒表面观察到的菌膜可能是醋酸菌在液面大量繁殖形成的c 在发酵过程中 需从充气口不断通入空气d 由于酵母菌的繁殖能力很强 不需对所用的装置进行消毒处理 解析本题考查了果酒制作的关键操作步骤 为了防止杂菌污染 应该先用清水冲洗 再去掉枝梗 由于醋酸菌是一种好氧细菌 所以变酸的酒表面的菌膜可能是醋酸菌大量繁殖而形成的 装入葡萄汁后 要密闭充气口 以利于产生酒精 对发酵瓶要清洗干净 并用70 的酒精进行消毒 答案b 典型示例2 制果醋时 要适时通过充气口进行充气是因为a 醋酸菌是好氧菌 将酒精变成醋酸时需要氧气的参与b 酵母菌进行酒精发酵时需要o2c 通气 防止发酵液霉变d 防止发酵时产生的co2气体过多而引起发酵瓶的爆裂 解析醋酸菌是好氧菌 发酵需要氧气的参与 酵母菌是兼性厌氧菌 有氧时大量繁殖 无氧时发酵产生酒精 答案a 典型示例3 2012 南京高三第一次模拟 多选 腐乳制作过程中 豆腐含水量 盐的用量 发酵温度和酒的用量等均会影响腐乳的风味和质量 下列相关叙述正确的是a 豆腐含水量过高 腐乳不易成形b 加盐量过多 腐乳硬度会增大c 前期发酵温度过低 腐乳 皮 不易形成d 酒的用量过多 后期成熟时间延长 解析a项 豆腐应选含水量约70 的 含水量过高 腐乳不易成形 盐能使豆腐中的水分析出 加盐量过多 腐乳硬度会增大 前期发酵温度过低 则毛霉的生长受到影响 腐乳 皮 不易形成 酒的用量过多会抑制蛋白酶的作用 导致后期成熟时间延长 答案abcd 典型示例4 某人利用乳酸菌制作泡菜 因为操作不当 造成泡菜腐烂 下列原因中正确的是a 罐口密闭缺氧 抑制了乳酸菌和需氧腐生细菌的生长繁殖b 罐口密闭不严 氧气使乳酸菌的生长繁殖受到抑制 需氧腐生细菌的生长繁殖加快c 罐口密闭不严 氧气使其他腐生细菌和需氧腐生细菌的生长繁殖减慢d 罐口密闭缺氧 促进了乳酸菌和需氧腐生细菌的生长繁殖 解析本题考查乳酸发酵的原理 乳酸菌是厌氧型细菌 在有氧时它的发酵过程会受到抑制 氧气促进了需氧腐生细菌的生长和繁殖 这时需氧型微生物分解泡菜中的有机物 从而使泡菜腐烂 答案b 典型示例5 在制作泡菜的过程中 不正确的是a 按照清水与盐的质量4 1的比例配制盐水b 按照清水与盐的质量5 1的比例配制盐水c 盐水入坛前要煮沸冷却 以防污染d 在坛盖边沿的水槽中要注满水 以保证坛内的无氧环境 解析泡菜的制作依靠的是乳酸菌的无氧呼吸 制作时要防止污染 以防泡菜腐败变质 清水与盐的质量比例为4 1 若食盐量不足 也易造成细菌大量繁殖 答案b 1 培养基类型 考点二 微生物的实验室培养 特别提醒 加入培养基中的凝固剂 如琼脂 一般不能被微生物利用 只起到凝固作用 选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物 鉴别培养基可以存在其他微生物 而且能鉴别特定的微生物 2 纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 1 原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞 使其长成单个的菌落 这个菌落就是一个纯化的细菌菌落 2 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 平板划线法 平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中 在线的开始部分 微生物往往连在一起生长 随着线的延伸 菌数逐渐减少 最后可能形成纯种的单个菌落 如下图 几种划线方法示意图注意 第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌 灼烧接种环之后 要冷却后才能伸入菌液 以免温度太高杀死菌种 划线时最后一区域不要与第一区域相连 划线用力大小要适当 防止用力过大将培养基划破 稀释涂布平板法 系列稀释操作 图1 a 将分别盛有9ml水的6支试管灭菌 并按101 106的顺序编号 b 用移液管吸取1ml培养的菌液 注入101倍稀释的试管中 用手指轻压移液管上的橡皮头 吹吸3次 使菌液与水充分混匀 c 从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液 注入102倍稀释的试管中 重复b步混匀操作 以此类推 直到完成最后1支试管的稀释 注意移液管需要经过灭菌 操作时 试管口和移液管应在离火焰1 2cm处 涂布平板操作如图2所示 注意稀释涂布平板操作复杂 各个细节均应保证 无菌 具体如下 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围使用 典型示例6 有关培养基配制原则的表述正确的是a 任何培养基都必须含有碳源 氮源 矿质元素 水b 碳源和氮源必须具有一定比例 碳元素的含量最多 其次为氮元素c 微生物的生长除受营养因素影响外 还受到ph 氧 渗透压的影响d 营养物质的浓度越高越好答案c 典型示例7 2012 合肥二模 用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌a b c d 解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基 故 正确 平板划线法采用接种针进行操作 而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作 故 错误 纯化时 要进行无菌操作 需要在火焰旁接种 避免空气中的微生物混入培养基 故 正确 平板划线法一般用于分离而不是计数 故 错误 答案c 考点三微生物培养中几种实验操作的注意事项1 倒平板 1 培养基灭菌后 需冷却至50 左右 2 左手拿培养皿 右手拿锥形瓶 左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 不要完全打开 3 整个操作在酒精灯火焰旁进行 避免杂菌污染 4 平板冷凝后要倒置的原因 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基 造成污染 5 倒平板时 如果培养基溅在皿盖和皿底之间的部位 这个平板应丢弃 2 平板划线 1 第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌 划线操作结束仍需灼烧接种环 每次灼烧目的如下表 2 灼烧接种环之后 要冷却后才能伸入菌液 以免温度太高杀死菌种 3 划线时最后一区域不要与第一区域相连 4 画线用力要大小适当 防止用力过大将培养基划破 3 稀释涂布平板 1 稀释操作时 每支试管及其中9ml水 移液管均需灭菌 操作时 试管口和移液管应在离火焰1 2cm处 2 涂布平板时 将涂布器末端浸在盛有体积分数为70 的酒精的烧杯中 取出时 多余酒精在烧杯中滴尽 然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中 以免引燃其中的酒精 酒精灯与培养皿距离要合适 移液管头不要接触任何物体 典型示例8 2011 新课标卷 39 有些细菌可分解原油 从而消除由原油泄漏造成的土壤污染 某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株 回答问题 1 在筛选过程中 应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上 从功能上讲 该培养基属于 培养基 2 纯化菌种时 为了得到单菌落 常采用的接种方法有两种 即 和 3 为了筛选出高效菌株 可比较单菌落周围分解圈的大小 分解圈大说明该菌株的降解能力 4 通常情况下 在微生物培养过程中 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌 和 无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行 以避免周围环境中微生物的污染 解析 本题主要考查微生物的分离和培养以及培养基对微生物的选择作用等相关知识 要筛选出能分解原油的细菌 可用只以原油为唯一碳源的选择培养基来进行 常用的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法 划线方法一般包括连续划线法和交叉划线法 在以原油为唯一碳源的选择培养基上 单菌落周围形成的分解圈越大 说明该菌分解石油的能力越强 实验室常用的消毒方法主要有煮沸消毒法 巴氏消毒法 酒精 氯气 石碳酸等化学药剂消毒法 实验室常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌 干热灭菌 火焰灼烧灭菌等 无菌技术操作要求实验操作应在酒精灯的火焰旁进行 以避免周围环境中的微生物的污染 答案 1 原油选择 2 平板划线法稀释涂布平板法 3 强 4 干热灭菌高压蒸气灭菌火焰 典型示例9 2010 全国卷 下列是与微生物培养有关的问题 请回答 1 某细菌固体培养基的组成成分是kh2po4 na2hpo4 mgso4 葡萄糖 尿素 琼脂和蒸馏水 其中凝固剂是 碳源是 氮源是 已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长 故该培养基属于 培养基 按照化学成分分类 该培养基属于 培养基 从同化作用类型看 用该培养基培养的细菌属于 2 将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中 适宜条件下培养 定时取样测定菌体数目 以时间为横坐标 以菌体数目的对数为纵坐标 可以得到细菌的 曲线 该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是 实验室中 为了获得形态和生理特征一致的菌体 一般应在 期取材 在生产中 常收集培养至 期的细菌用于次级代谢产物的提取 解析 本题考查了培养基的配制 微生物培养及生长规律 培养基提供微生物生长 繁殖 代谢的混合养料 由于微生物具有不同的营养类型 对营养物质的要求也各不相同 加之实验和研究的目的不同 所以培养基的种类很多 使用的原料也各有差异 但从营养角度分析 培养基中一般含有微生物所必需的碳源 氮源 无机盐 生长素以及水分等 另外 培养基还应具有适宜的ph值 一定的缓冲能力 一定的氧化还原性及合适的渗透压 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质 是应用最广的凝固剂 本题中的培养基能培养特定的生物 为人工合成 应属于选择性培养基 加入了葡萄糖作为能源物质 说明该细菌为异养型 以时间为横坐标 以活菌数的对数为纵坐标 可得出一条生长曲线 曲线显示了细菌的生长繁殖的4个时期 调整期 对数期 稳定期 衰亡期 说明微生物生长曲线以菌体数目的对数作为纵坐标的原因 如果平时只是死记住了课本上的图解 不明白绘图的思维过程及方法 这道题答起来就会很困难 细菌呈现指数增长 取它对数 这样可以把曲线压缩在一个相对小的面积内 便于观察变化趋势 若直接以数量为纵坐标 则因数据过大难以绘制 答案 1 琼脂葡萄糖尿素选择合成异养型 2 生长培养中的细菌以指数形式增殖 取对数便于反映细菌群体的生长规律 其他合理答案也给分 对数稳定 1 筛选原理配制选择培养基 把尿素作为培养基中的惟一氮源 原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长 其他微生物则不能在此培养基上生长 考点四 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 2 统计菌落数目 1 理论依据 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 2 计算方法 每克样品中的菌株数 c v m其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v代表涂布平板时所用稀释液的体积 ml m代表稀释倍数 典型示例11 下列关于微生物分离和培养的有关叙述 错误的是a 微生物培养前 需对培养基进行消毒b 测定土壤样品中的细菌数目 常用菌落计数法c 分离土壤中不同的微生物 要采用不同的稀释度d 分离能分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析微生物培养前 需对培养基进行灭菌处理 答案a 典型示例12 2012 北京海淀期中 通过实验测定土壤中的细菌数量 下列与此操作有关的叙述中 不正确的是a 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板b 取104 105 106倍的土壤稀释液0 1ml 分别涂布于各组平板上c 将培养皿倒置 37 恒温培养24 48小时d 选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 解析检测土壤中细菌总数 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板 取104 105 106倍的土壤稀释液和无菌水各0 1ml 分别涂布于各组平板上 将实验组和对照组平板倒置 37 恒温培养24 48小时 在确定对照组无菌后 选择菌落数在30 300的平板进行计数 答案d 1 筛选原理即 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 考点五 分解纤维素的微生物的分离 2 实验流程土壤取样 富含纤维素的环境 选择培养 用选择培养基培养 以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 涂布平板 将样品涂布于鉴别培养基上 挑选产生透明圈的菌落 3 刚果红染色的两种方法的比较 特别提醒 为确定得到的是纤维素分解菌 还需进行发酵产纤维素酶的实验 纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种 纤维素酶的测定方法 一般是对纤维素酶的分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定 流程中的 选择培养 是否需要 应根据样品中目的菌株数量的多少来确定 典型示例13 分离土壤中纤维素分解菌用到的方法是 稀释倒平板法 涂布平板法 单细胞挑取法 选择培养分离a b c d 解析稀释倒平板法是先进行梯度稀释 然后分别取不同稀释度的菌悬液少许 与已溶化并冷却至50 左右的琼脂培养基混合 摇匀后 倒入已灭菌的培养皿中 制成可能含菌的琼脂平板 培养一定时间后即可出现菌落 涂布平板法是先将溶化的培养基倒入无菌培养皿中 制成无菌平板 冷却凝固后 将一定量的某一稀释度的菌悬液涂布在整个平板表面 经培养后形成单个菌落 答案b 典型示例14 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是a 经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上b 富集培养这一步可省略 但培养纤维素分解菌少c 经稀释培养后 用刚果红染色d 对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上 解析经选择培养后 再经稀释 才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 富集培养可省略 经稀释培养后 用刚果红染色 设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物 答案a 1 菊花组织培养与月季花培养的比较 考点六 植物组织培养技术 2 植物激素在组织培养过程中的重要作用生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂 脱分化和再分化的关键性激素 其作用及特点为 3 ms培养基的成分及各成分作用 特别提醒 ms培养基与微生物培养基的区别 微生物培养基包括水 无机盐 碳源 氮源和生长因子 以有机营养为主 ms培养基则需提供大量的无机营养 尤其是植物生长所必需的大量元素和微量元素 典型示例15 月季的花药培养过程的难点之一是材料的选择 下列有关材料选择的叙述中正确的是a 从花药来看 应当选择盛花期的花药b 从花粉来看 应当选择小孢子四分体时期的花粉c 从花蕾来看 应当选择略微开放的花蕾d 从检测花粉的实验方法看 应该用显微镜观察已染色的花粉样品临时装片 解析本题考查了花药培养中有关材料的选取方法 从花药来看 应当选择初花期的花药 从花粉来看 应当选择单核期的花粉 从花蕾来看 应当选择完全未开放的花蕾 用已染色的花粉样品制作临时装片 才能观察到细胞核的位置 以确定花粉发育的时期 答案d 典型示例16 2012 东城区检测 下图表示四倍体兰花叶片通过植物组织培养形成植株的过程 相关叙述正确的是a 和 过程会发生减数分裂b 过程需生长素而 过程需细胞分裂素c 过程有细胞增殖但无细胞分化d 此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体 解析 是脱分化 是再分化 过程均发生的是有丝分裂 过程需要生长素和细胞分裂素的共同调节 过程有细胞增殖 但没有发生细胞分化 花药离体培养后得到的植株为单倍体 答案c 考点七酶的研究与应用1 关于酶的探究实验 1 实验设计时要遵循单一变量和对照两大原则 严格控制无关变量 2 探究不同温度 或ph 对酶活性的影响时 温度 或ph 作为自变量 通常通过设置合理的梯度来确定最适值 最适值是通过比较相同时间内获得的产量或效果来确定的 典型示例17 1 探究温度对果胶酶活性的影响 ph对酶活性的影响 果胶酶的用量三个实验中 实验变量依次为a 温度 酶活性 酶用量b 苹果泥用量 ph 果汁量c 反应时间 酶活性 酶用量d 温度 ph 果胶酶用量 解析首先要明确实验变量 反应变量等基本概念 在此基础上 针对三个探究实验进行分析 实验一为探究果胶酶的最适温度 实验二为探究果胶酶的最适ph 实验三为探究果胶酶的最适用量 从而选出正确答案d 答案d 典型示例18 2012 温州五校联考 在 探究不同温度条件下加酶洗衣粉的洗涤效果 的实验中 变量控制方法正确的是a 实验材料的污染程度属于本研究的无关变量 实验过程中不必考虑b 若采用手洗法进行去污操作 需尽可能保证各组洗涤用力程度 时间等基本相同c 水温属于本研究的变量 实验过程中必须保证各组实验温度相同且恒定d 水的用量和布料的大小是成正比的 实验用的布料越大 水量越多实验效果越好 解析根据实验的对照原则和单因子变量原则 水温是本研究的变量 要有温度梯度 各组实验温度不能相同 其他的无关变量要保持适宜且相同 该实验用的布料 水量要适中 不是布料越大 水量越多实验效果越好 答案b 2 直接使用酶 固定化酶固定化细胞的比较 典型示例19 2010 江苏卷改编 下图1表示制备固定化酵母细胞的有关操作 图2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意图 下列叙述不正确的是 a 刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制备混合液b 图1中x溶液为cacl2溶液 其作用是使海藻酸钠形成凝胶珠c 图2发酵过程中搅拌的目的是为了使培养液与酵母菌充分接触d 图1中制备的凝胶珠用蒸馏水洗涤后再转移到图2装置中 解析 在酵母细胞的固定化过程中 刚溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温才能加入已活化的酵母细胞 否则会影响酵母细胞的活性 a项错 将海藻酸钠慢慢滴加到配制好的cacl2溶液中 液滴在cacl2溶液中形成凝胶珠 b项正确 在发酵过程中 搅拌的目的是使培养液与酵母菌更充分地接触 c项正确 将固定好的酵母细胞用蒸馏水冲洗2 3次后 再将葡萄糖溶液转入锥形瓶 加入固定好的酵母细胞 置于适宜条件下发酵 d项正确 答案 a 典型示例20 下列有关固定化酶和固定化细胞的说法正确的是 a 某种固定化酶的优势在于能催化一系列生化反应b 固定化细胞技术一次只能固定一种酶c 固定化酶和固定化细胞的共同点是所固定的酶都可以反复使用d 固定化酶和固定化细胞都能反复使用 但酶的活性迅速下降 答案 c 解析 某种固定化酶只能催化一种生化反应 其优势是酶可以反复使用 固定化细胞技术一次能固定多种酶 固定化酶和固定化细胞都能反复使用 而且酶的活性不变 考点八1 dna的粗提取与鉴定 2 pcr技术 1 pcr一般要经历三十多次循环 每次循环都包括变性 复性 延伸三步 2 两个引物之间的固定长度的dna序列呈指数扩增 3 血红蛋白的提取和分离方法及原理 基本步骤 1 样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定 2 血红蛋白释放过程中 蒸馏水的作用是涨破红细胞 甲苯作用主要是溶解细胞膜 3 为了加快干凝胶的膨胀 可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热 通常只需1 2h 还可除去凝胶中可能带有的微生物 排除胶粒内的空气 4 在色谱柱中填凝胶的时候要尽量紧密 以降低凝胶颗粒之间的空隙 在装填凝胶柱时 不得有气泡存在 因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序 降低分离效果 在凝胶色谱操作过程中 不能发生洗脱液流干 露出凝胶颗粒的现象 一旦发生上述两种情况 凝胶色谱柱需要重新装填 5 滴加样品时 吸管管口贴着管壁环绕移动加样 不要破坏凝胶面 6 根据红色区带的移动状况判断收集流出液时间 典型示例21 在 dna的粗提取与鉴定 实验中 将提取获得的dna的黏稠物 还含有许多杂质 分别处理如下 第一 放入0 14mol l的nacl溶液中 搅拌后过滤 得滤液a和黏稠物a 第二 放入2mol l的nacl溶液中 搅拌后过滤 得滤液b和黏稠物b 第三 放入冷却的95 的酒精溶液中 搅拌后过滤 得滤液c和黏稠物c 以上过程获得的滤液和黏稠物中 因含dna少而可以丢弃的是 解析在不同浓度的nacl溶液中 dna的溶解度不同在0 14mol l的nacl溶液中dna溶解度最小 dna析出 呈丝状物 过滤后存在于黏稠物a中 在2mol l的nacl溶液中dna溶解度最大 所以dna溶解 过滤后存在于滤液b中 酒精可使dna分子凝集 因此 在冷却的95 的酒精溶液中dna凝集 呈丝状物 过滤后存在于黏稠物c中 答案a b c 典型示例22 pcr利用了dna热变性的原理 pcr仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器 对pcr过程中 温度的控制 的下列说法错误的是a 酶促反应需要高的温度 是为了确保模板的单链b 延伸的温度必须大于复性温度 而小于变性温度c dna聚合酶不能热变性 要用耐高温的聚合酶d dna解旋酶不能热变性 为了确保模板是单链 解析pcr是一种体外dna扩增技术 dna双链的解开不需要解旋酶 靠高温使其变性 双螺旋结构解体 双链分开 复性前 在耐高温的dna聚合酶的作用下根据碱基互补配对原则合成新的dna 因此延伸的温度要大于复性温度 小于变性温度 答案d 典型示例23 宁夏理综 已知蛋白质混合液中硫酸铵浓度的不同可以使不同种类的蛋白质析出 或沉淀 随着硫酸铵浓度增加 混合液中蛋白质析出的种类和总量增加 下表是某蛋白质混合液中的不同蛋白质从开始析出到完全析出所需要的蛋白质混合液中的硫酸铵浓度范围 请据表回答 1 若只完全析出甲蛋白 混合液中最合适的硫酸铵浓度应为 2 向该蛋白质混合液中加入硫酸铵溶液 或硫酸铵 使混合液中的硫酸铵浓度达到30 会析出若干种蛋白质 它们分别是 3 通过改变混合液中的硫酸铵浓度 能 不能 从混合液中得到所有的 不含有其他蛋白质的乙蛋白 原因是 4 简要写出从该蛋白质混合液中分离出全部丁蛋白的实验设计思路 5 如果蛋白质析出物中还含有一定量的硫酸铵 可用半透膜除去析出物中的硫酸铵 用半透膜能除去析出物中硫酸铵的原理是 解析 1 从表中可以看出 只完全析出甲蛋白 混合液中最合适的硫酸铵浓度为20 2 表中信息反映混合液中的硫酸铵浓度达到30 会析出甲蛋白 乙蛋白 丙蛋白三种蛋白质 3 由于乙蛋白和丙蛋白析出所需的硫酸铵浓度范围有重叠 因此改变混合液中的硫酸铵浓度 不能只得到乙蛋白 答案 1 20 2 甲蛋白 乙蛋白 丙蛋白 3 不能乙蛋白和丙蛋白析出所需的硫酸铵浓度范围有重叠 4 向该蛋白质混合液中加入硫酸铵溶液 或硫酸铵 使其浓度达到35 或35 硫酸铵浓度 38 范围内的任意一个浓度 分离析出物与溶液 保留溶液 取保留溶液 再加入硫酸铵溶液 或硫酸铵 使硫酸铵在溶液中的浓度达到40 或40 以上 分离析出物与溶液 析出物即为丁蛋白 5 半透膜是一种选择性透过膜 只允许小分子的硫酸铵通过 不允许大分子蛋白质通过 考点九植物有效成分的提取1 植物芳香油的提取方法的比较 典型示例24 2012 吉林模拟 近几年我国柑橘大丰收 提取橘皮精油是提高其经济价值的重要途径 请分析回答提取过程的有关问题 1 提取橘皮精油 常采用 法而不用蒸馏法 原因是 2 提取橘皮精油时 为了提高出油率 首先将橘皮 并用石灰水浸泡 石灰水的作用是 3 压榨过程 为了使橘皮油易与水分离 常加入 4 得到压榨液后 过滤除去固体物和残渣 然后 进一步除去质量较小的残留固体物 再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮精油分离出来 此时 橘皮油中含有少量的水和果醋 需在5 10 下 使杂质沉淀 用吸管吸出上层澄清橘皮油 其余部分过滤 合并 成为最终的橘皮精油 解析 1 提取橘皮精油 常采用压榨法 水蒸气蒸馏会使部分有效成分水解 水中蒸馏会导致原料焦糊 2 新鲜的柑橘皮中含有大量的果蜡 果胶和水分 直接压榨出油率低 3 为了使橘皮油易与水分离 常加入相当于橘皮质量0 25 的nahco3和5 的na2so4 4 过滤掉固体物和残渣后 再离心除去质量较小的残留固体物 橘皮精油分离出来含有少量的水和果醋 需在5 10 下静置5 7天 使杂质沉淀 用吸管吸出上层澄清橘皮油 其余部分过滤 滤液与吸出的上层橘油混合合并后成为最终的橘皮精油 答案 1 压榨水中蒸馏会导致原料焦糊 水蒸气蒸馏会使有效成分部分水解等 2 干燥去水破坏细胞结构 分解果胶 防止橘皮压榨时滑脱 提高出油率 3 相当于橘皮质量0 25 的nahco3和5 的na2s