高中生物 6.2基因工程及其应用课件2.ppt

基因工程的基本操作程序 获取目的基因 构建表达载体 导入受体细胞 目的基因检测与鉴定 第一步 第二步 第三步 第四步 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 获取目的基因 第一步 二 通过pcr扩增 一 从基因文库中获取 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 推测 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 推测 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 推测 推测 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 基因dna的核苷酸序列 推测 推测 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 基因dna的核苷酸序列 推测 推测 合成 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 基因dna的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 合成 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 三 通过dna合成仪直接合成目的基因 dna合成仪 蛋白质的氨基酸顺序 mran核苷酸序列 基因dna的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 合成 当基因比较小 蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时 可采用此种方法 二 基因表达载体的构建 二 基因表达载体的构建 用限制酶切割质粒使之出现一个切口 将目的基因插入切口处 让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后 在连接酶的作用下连接形成重组dna分子 即基因表达载体 一 构建目的 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 二 构建零件及其作用 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 二 构建零件及其作用 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 二 构建零件及其作用 1 目的基因 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 二 构建零件及其作用 1 目的基因 2 启动子 3 终止子 一 构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在 并且可遗传给下一代 同时 使目的基因能够表达和发挥作用 二 构建零件及其作用 1 目的基因 2 启动子 3 终止子 4 标记基因 三 将目的基因导入受体细胞 三 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化 三 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌 枯草杆菌 土壤农杆菌和动植物细胞等 导入受体细胞的方法主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 且因受体细胞的不同而不同 一 导入植物细胞 1 农杆菌转化法 一 导入植物细胞 1 农杆菌转化法 一 导入植物细胞 1 农杆菌转化法 一 导入植物细胞 2 其他方法 见教材p12 生物技术资料卡 1 农杆菌转化法 一 导入植物细胞 2 其他方法 见教材p12 生物技术资料卡 1 基因枪法 1 农杆菌转化法 一 导入植物细胞 2 其他方法 见教材p12 生物技术资料卡 1 基因枪法 2 花粉管通道法 二 导入动物细胞 二 导入动物细胞 显微注射技术 二 导入动物细胞 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 显微注射 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 显微注射 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 显微注射 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 显微注射 分裂分化 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 显微注射 分裂分化 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 显微注射 分裂分化 移植 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 显微注射 分裂分化 移植 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 显微注射 分裂分化 移植 发育 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因动物 显微注射 分裂分化 移植 发育 显微注射技术 二 导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 含目的基因的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因动物 显微注射 分裂分化 移植 发育 显微注射技术 为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵 问题 三 导入微生物细胞 三 导入微生物细胞 ca2 处理法 三 导入微生物细胞 1 过程 1 制备感受态细胞 用ca2 cacl2 处理细菌 使细菌易于接受外源dna分子 ca2 处理法 三 导入微生物细胞 1 过程 1 制备感受态细胞 用ca2 cacl2 处理细菌 使细菌易于接受外源dna分子 2 重组dna分子与感受态细胞混合 完成转化 ca2 处理法 三 导入微生物细胞 1 过程 1 制备感受态细胞 用ca2 cacl2 处理细菌 使细菌易于接受外源dna分子 2 重组dna分子与感受态细胞混合 完成转化 ca2 处理法 2 优点繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少 操作简单 价格低廉 三 导入微生物细胞 1 过程 1 制备感受态细胞 用ca2 cacl2 处理细菌 使细菌易于接受外源dna分子 2 重组dna分子与感受态细胞混合 完成转化 ca2 处理法 3 常用受体细胞大肠杆菌 e coli 2 优点繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少 操作简单 价格低廉 四 目的基因的检测与鉴定 四 目的基因的检测与鉴定 目的基因是否真正插入受体细胞的dna中 是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达 只有通过检测 鉴定才能得知 四 目的基因的检测与鉴定 目的基因是否真正插入受体细胞的dna中 是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达 只有通过检测 鉴定才能得知 常用的检测手段主要从分子水平和个体水平进行 一 分子水平 一 分子水平 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 dna片段 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 dna片段 用同位素标记的目的基因片段杂交 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 dna片段 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 dna片段 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 表明目的基因已插入 分子杂交技术 一 分子水平 1 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 提取受体生物全部dna 适当限制酶切割 dna片段 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 表明目的基因已插入 分子杂交技术 2 检测目的基因是否转录出了mrna 2 检测目的基因是否转录出了mrna 提取受体生物的mrna 2 检测目的基因是否转录出了mrna 提取受体生物的mrna 用同位素标记的目的基因片段杂交 2 检测目的基因是否转录出了mrna 提取受体生物的mrna 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 2 检测目的基因是否转录出了mrna 提取受体生物的mrna 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 表明目的基因已转录出了mrna 2 检测目的基因是否转录出了mrna 提取受体生物的mrna 用同位素标记的目的基因片段杂交 显出杂交带 表明目的基因已转录出了mrna 检测dna利用的是dna与dna杂交 检测mrna利用的是dna与mrna杂交 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原 抗体杂交技术 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原 抗体杂交技术 提取受体生物的蛋白质 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原 抗体杂交技术 提取受体生物的蛋白质 与相应抗体杂交 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原 抗体杂交技术 提取受体生物的蛋白质 与相应抗体杂交 显