薄层色谱法鉴定果汁中的糖-孙文斌-113202F118.doc

薄层色谱法鉴定果汁中的糖 班级：11级应生（1）班 姓名：孙文斌 学号：113202F0118 一实验目的了解薄层色谱法的分离原理，掌握薄层色谱法鉴定果汁中的糖的操作技术。二实验原理对多组分的复杂混合物，无论是有机物或无机物，薄层色谱法是有效的分离手段之一。硅胶是常用的吸附剂，使用与酸性和中性物质的分离，在一定条件下，硅胶对各种糖分的吸附能力不同。同时，选择适当的展开剂，利用各种糖分的分配系数的差异，从而达到分离。显色后得到色谱图，与在相同条件下已知糖分的色谱图比较就能鉴定果汁中的糖分。未知物组分的鉴定是通过在同一块薄层板上分别点上标准样品和未知样品，通过比较斑点的比移值来定性鉴定。其中比移值Rf计算公式为：Rf = 原点至斑点中心的距离/ 原点至展开剂前沿的距离由于在相同条件下，物质的Rf值是一定的，因而比移值Rf可以进行物质的定性分析。分离之后，可以用适当的方法定量测定，如刮下有色斑点。将被测物浸取后用比色法测定其含量，或用薄层扫描仪扫描直接测出被测物的含量。三. 实验器材层析缸（筒）（10cm10cm）；微量注射器，若仅作定性鉴定，则可用玻璃毛细管来替代；薄层板：用1010cm玻璃板制作硅胶板、可剪截型薄层层析板（10 cm 10 cm，0.2-0.25 mm铝基硅胶G板，天津市天河医疗有限公司）；吸附剂：硅胶G（(青岛海洋化工有限公司生产，200260 目，化学纯）展开剂1：正丁醇：丙酮：水4：3：1显色剂1：苯胺二苯胺磷酸（临用时配制：2g二苯胺、2ml苯胺、20ml85磷酸，与200ml丙酮混溶）显色剂2：把10ml硫酸缓慢倒入90rnl乙醇中混合冷却，制得10的硫酸溶液标准糖溶液：麦芽糖、果汁、蜂蜜、果糖、葡萄糖，分别溶于10异丙醇中，使其浓度为100mg/ml新鲜果汁、蜂蜜、无水乙醇四. 实验步骤（1）制作薄层板将玻璃板洗净至不挂水，晾干后置于干燥洁净处备用。将10 g硅胶G加适量的水(约25 mL)，在研钵中用研杵向一个方向研磨制成均匀的有适当粘稠度的胶浆，立即倾倒于玻璃板中央，迅速振荡，使硅胶层厚度均匀。涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干，并在105C温度下活化30 min后，贮于干燥器中备用。硅胶层的厚度约为0.1 mm，使用前用氯仿-甲醇(8:2)预洗，在105C温度下加热干燥1 h。（2）点样在1010cm的硅胶G薄板上离底边2cm处用铅笔划线，用微量注射器或玻璃毛细管点样（新鲜果汁及标准糖液），各斑点之间相距2cm且每个斑点的直径不超过2mm，每个样品点4次，每次点样后用冷风吹干或间隔一定时间使其自然干燥。在板上标出起始线和欲展开的前沿线，一般展开距离为7cm以上。（3）展开把点样后的薄层板在红外灯烘干（若无红外灯，则在空气中晾干），将配好的展开剂倒入展开缸中，使展开剂在缸中的深度至少有1cm深，盖上盖子，混合均匀。等数分钟后让溶剂在展开缸中饱和后，再将已点好样的晾干的薄层板迅速的放入缸内，尽量不破坏缸内的气氛，盖上盖子。让薄层板的下部浸入展开剂溶液中约0.5cm以上（但注意不要让点样的斑点浸入到展开剂的溶液中，以免被溶液浸洗下来）；由于吸附剂的毛细管作用，展开剂和斑点不断向上迁移，直到展开剂前沿到事先预定好的刻度线后（一般完成一次展开过程需要2530分钟），可取出薄层板，。在红外灯下将展开剂蒸发（或在空气中晾干，此过程大约需15分钟）。（4）显色在通风橱中，在薄层板上喷雾显色，随即在100C下烘烤1020min，注意观察各种糖的颜色和计算Rf，并以此鉴定果汁中的糖分。五. 结果与讨论 1. 计算出果汁中所含糖的Rf； 实验结果如下：从左往右样品分别为：麦芽糖、葡萄糖、果糖、果汁、蜂蜜。结果如下表名称麦芽糖葡萄糖果糖果汁蜂蜜原点至斑点中心的距离cm5.05.35.14.35.5原点至展开剂前沿的距离cm7.57.77.97.87.9Rf0.6670.6880.6450.5510.696讨论：从上表可以看出各种物质的Rf