WST 353-2011 天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定（无磷酸吡哆醛）参考方法

1 020C 50  35320 11天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸吡哆醛)参考方法of o 01 10120401实施中华人民共和国卫生部 发布353201范围2规范性引用文件3术语和缩略语4参考方法描述目次41测定原理和方法42检查列表43试剂44仪器一45采样和样本46测定系统和分析部分的准备47酶催化活性浓度测定48测定结果处理49分析可靠性410通过实验室间比对进行确认41412报。旨413质量保证附录A(规范性附录)附录B(规范性附录)附录C(资料性附录)附录D(规范性附录)附录E(资料性附录)浏定储存酶溶液中测定储存酶溶液中试剂原料详细信息不同温度下溶液1、溶液2的考方法与30参考方法的比较参考文献0"柚砧弛“刖昌35320本标准按照9给出的规则起草。本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(准的催化活性浓度测定原级参考方法第5部分：天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定参考方法，将原参考方法试剂中磷酸吡哆醛去掉，重新建立依据本标准的参考区间，并参考009体外诊断器具生物源样品中量的测定参考测定程序的表述适当增加内容。本标准的附录A、附录B、附录录c、附录标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位：北京航天总医院。本标准主要起草人；陈宝荣、邵燕、孙慧颖、胡滨、陈琦。范围天门冬氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸吡哆醛)参考方法本标准规定了在临床医学应用中，测定天门冬氨酸氨基转移酶(化括性浓度(无磷酸毗哆醛)的参考方法。本标准主要适用于参考实验室，作为天门冬氢酸氨基转移酶催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)测定的溯源，也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源，可供有美认可单位及质量管理部门应用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。09体外诊断器具生物源样本中量的铡定参考测定程序的表述3术语和缩略语31术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3I1原始样本在提供该系统的信息或作为对该系统做出决定的基础。注：在某些情况下，所提供的信息可以适用于一十较大的系统或一组系统，此时取样系统是这些系统的组成部分。3I2实验室样本13分析样本从中取出分析部分的样本。注：在取出分析部分之前，分析样本可经过各种处理。314分析部分：如果不需预处理，分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出。某些情况下，需将分析部分溶解成分析溶液再上机涮定。315分析溶液体或固体中而制备的溶液，溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。316(某一物质系统的)基质个物质系统中除被分析物之外的所有成分。317参考方法适用于评定由同类量的其他测定方法获得的被测定量值的测定正确度。318测定系统的灵敏度敏度1：测定系统的灵敏度可能与被测定的量值有关。注2：所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力，319分析特异性110分析干扰影响量自身在测定系统中不产生信号，但它会引起示值的增高或降低。3111影响量112被测量1；对被测定的说明要求了解量的种类，以厦古有该量的现象，物体或物质状态的描述，包括有关成分及所涉及的化学宴体。注2：在001中，被测定定义为受到测定的量，注3：测定包括测定系统和实施测定的条件，它可能会改变研究中的现象、物体或物质，使被测定的量可能不同于定义的被测定。在这种情况下113检出限声称的物质成分不存在的误判概率为p，声称物质成分存在的误判概率为a。注1：国际理论和应用化学联合会(荐2：有时使用缩写词3：不要用术语“是敏度”表示“检出限”。3114校准品32缩略语35320下列缩略语适用于本文件。门冬氨酸氨基转移酶(D：乳酸脱氢酶(1D：苹果酸脱氢酶(化型烟酰胺腺嘌岭二核苷酸(原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(5P：5际准操作方法(参考方法描述41测定原理和方法本法采用偶联反应，成草酰乙酸和酰乙酸在时应式如下：卜天门冬氨酸+2一酮戊二酸竺_谷氨酸草酰乙酸+-!里+测尔消光系数的下降速率与2检查列表421试剂到表将所用试剂按表1试剂列表分类系统名称通用名称、缩略语三羟甲基氨基甲烷叫(100 U本的重复性精密度宜小于15，实验室内复现性精密度宜小于2 0。494检出限与分光光度计的最小分析信号有关。奉参考方法测定的最低检出限为008 _1(50U4 9 5线性范围线性范围<413 _1(2477 u4 9 6误差的来源在孵育过程中，样本中高浓度的丙酮酸将导致样会降低测定范围的上限，并大大降低测定结果。410通过实验室问比对进行确认目前尚无磷酸吡哆醛)参考方法的实验室问比对活动。411参考区间初步调查男性与女性(17岁)的参考区问。男性：下限(第2 5百分位)：0311_1(186 U上限(第975百分位)：055_1(32 7 u女性：下限(第25百分位)：026_1(15 5 U上眼(第97 5百分位)：0 47叫(28 1 U注：中国磷酸吡哆醛)参考区间尚在调查中。412报告应设计适宜的测定结果报告格式，包括但不限于以下内容：血清、血浆或其他；取样日期和测定测定所使用的参考方法：测定被测定的名称、测定结果数字值和测定单位：被测定的名称；测定单位：“；评定测定结果的不确定度：一般取一2；样本异常特性记录：如溶血、黄疽、乳糜等；测定方法的异常情况或改变测定方法记录413质量保证4131室内质量控制每个工作日开始正式测定样本前均测定质控品，当质控符合要求后才进入正式测定。应建立包括质控规则、操作步骤的室内质控 13 2室间质量控制评价目前尚无磷酸吡哆醛)参考方法的实验室间比对活动4 13 3质量日志每个工作日完成工作日志及环境控制的质量记录。A 1测定试剂附录A(规范性附录)测定储存酶溶液中 35320A 1 1辅助试剂A 11 1一水5一磷酸吡哆醛(mo相对分子质量=2652。A112丙酮酸一钠盐(c。H。O。相对分子质量一110 0。A 1 2试剂制备A 1 2 1 5 上述物质按以下步骤处理：溶于约6 转移至10 将容量瓶和溶液2平衡至20；加溶液2至容量瓶的校准刻度线(20)；避光保存(如装在棕色瓶)。最终配制的溶液中5磷酸吡哆醛的浓度为6 300 溶液28稳定性为1周。A1 2 2测定  200 磷酸吡哆醛溶液、0200 100上述溶液充分混匀、避光保存。该溶液28稳定性为1 d。A12 3测定99 0 上述物质按以下步骤处理：溶于约6 转移至25 将容量瓶和水平衡至20；加水至容量瓶的校准刻度线(20)。最终配制的溶液中丙酮酸一钠盐的浓度为3600 。该溶液28稳定性为1 d。A124 用前进行)示例A 12 41在100 50 分混匀。第一步的稀释比例是1：201。A I242将步骤A1241中的0 050到100 分混匀。第二步的稀释比例是l：201。第一步和第二步总稀释比例是1：40 401。注：所用释度不同，需要对稀释园子()进行各自诃整。】7 35320A2测定条件A 21 最终完全反应混合物的浓度见表A 1  指 标三羟甲基氨基甲烷7)酸吡哆醛丙酮酸与反应馄合液体积比分扩展不确定度(A 22 。表A 2  指 标温度 37 00l渡长带宽 2 定点) 65扩展不确定廑(t=2)。屯3测定步骤九31试剂准备将一份适当体积(约0 4 起始试剂在37下平衡，为测定做准备。剩余的起始试剂保存在28。A 32测定方法按表A3的顺序和量，将试剂和样本加入比色杯。袭A3  35320体 积 测定步骤反应眭平衡到37步骤A 1 2 4配制的育30 s。孵育结束时，比色杯中溶液温度应达到37起始试剂溶藏充分混匀，等待30 连续监测90 3试剂空白用9 g 54 叫)上述步骤进行操作A 4计算计算方法与过回归分析(最小二乘法)计算摩尔消光系数随时间的改变!s叫(。减去试剂空白率后，即公式(A 1)计算储存酶溶液中D。tF(f)加 -(A 1)式中：LD储存酶溶液中位为微凯塔尔每升(单位每升(U单位_1除以1 000可得，单位U00可得叫系数，等于l 905(在339 珊(530m2F。例中为40 401，(A)皿经过试剂空白率校正后的位为每秒(每分( 35320B 1测定试剂附录B(规范性附录)测定储存酶溶液中1辅助试剂B 1 1 1一水5一磷酸吡哆醛(G 0：O)，相对分子质量。B11 2草酰乙酸，游离酸(C；H。O。)，相对分子质量=132 07。B12试剂制备B 121测定  200 一磷酸吡哆醛溶液、0 200 100 上述溶液充分混匀、避光保存。该溶液28稳定性为1 d。B 122测定31 7 上述物质按以下步骤处理：溶于约40 转移至50 将容量瓶和水平衡至20；加水至容量瓶的校准刻度线(20)；将溶液在冰上冷却。最终配制的溶液中草酰乙酸的浓度为4 800 。该物质28稳定性为30  1 2 3 用前进行)示倒B 1 2 31在10 50分混匀。第一步的稀释比例是1 2 201。B 1232将步骤B12 3 1中的0 050  分混匀。第二步的稀释比例是1：201。第一步和第二步总稀释比例是1：40 401。注：所用释霞不同，需要对稀释因子(行各自调整。B 2测定条件B21 最终完全反应混合物的浓度见表B1 度测定最终完全反应混合物的浓度 35320参 数 指 标三羟甲基氨基甲烷7)酸毗哆醛草酰展不确定度(一2)。B 2 2 ，衰B2  指 标温度波长带宽 2 定点) 6扩展不确定度伯=2)。B 3测定B 3 1试剂准备将一份适当体积(约0 4 起始试剂在37下平衡，为测定做准备。剩余的起始试剂必须保存在28。B 3 2测定步骤按表B3的顺序和量，将试剂和样本加入比色杯。2 35320表B 3  测定步骤反应渣平衡到37步骤3制备的育30 s。孵育结束时，比色杯中溶液温度应达到37起始试剂溶液充分混匀，等待30 连续监涮90 3试剂空白采用9 g54 叫)上述步骤进行操作。B 4计算计算方法与过回归分析(最小二乘法)计算摩尔消光系数随时问的改变s叫(。减去试剂空白率后，即公式(B 1)计算储存酶溶液中D，。kFX(A (B 1)式中：MDt储存酶溶液中位为微凯塔尔每升(p一)或单位每升(U单位_1除以l 000可得，单位u00可得。F系数，等于1 905(在339 瑚(630 F。例中为40 401；(Af)地经过试剂空白率校正后的位为每秒(每分(C1试剂原料详细信息附录c(资料性附录)试剂原料详细信息见表C1表C 13。表C 1试剂原料详细信息试剂系坑名三堑里堇量堇里量一通用名!j!一 35320信息指标 内 容号丹子式 有)危险度 363738，9贮存要求失效期试剂系统名旦童苴1苎塑堕_表C2试剂原料详细信息信息指标 内 容号分子式 C。对分子质量纯度特定合格要求(如有)危险度贮存要求失效期 35320表C3试剂原料详细信息试剂系坑名三查堡塑盛三壁墨垦三壁垫信息指标 内 容号分子式 。N2有)危险度 $2425贮存要求失效期表C 4试剂原料详细信息试剂系统名亘垦型上塑壁壁垦堕堕三篮童堕三煎垫通用名旦皇里 容号分子式 4有)危险度 $2425贮存要求失效期表C5试剂原料详细信息试剂系统名塾壁照堑壁通用名曼旦一 35320信息指标 内 容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有) 来源于猪的骨骼肌，保存在甘袖中危险度贮存要求失教期袅c 6试剂原料详细信息试剂系统名主墨堕堕量堕一通用名塑里一信息指标 内 容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有) 来酥于猪的心脏，保存在甘油中危险度贮存要求失效期试剂系统名叠氮钠表c 7试剂原料详细信息信息指标 内 容号分子式 对分于质量纯度特定合格要求(如有)危险度 T+，N，32，3，45，试剂原料详细信息信息指标 内 容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有)危险度 C，37，45贮存要求失效期试剂系统名鱼盏韭盟一表C 9试剂原料详细信息信息指标 内 容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有)危险度贮存要求失效期试剂系统名氯化钠表C  容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有)危险度贮存要求失效期 35320试剂系统名生查煎鱼曼皂表C 11试剂原料详细信息信息指标 内 容号分子式相对分子质量纯度特定合格要求(如有) 2435贮存要求失效期表C 12试剂原料详细信息试剂系统名二查主二壁堕堕堕堇一通用名旦 容号分子式 有)危险度 $2425贮存要求失效期试剂系统名蔓醴量堕表C 13试剂原料详细信息 35320信息指标 内 容号分子式 CHO 有)危险度 c，26739，$45贮存要求失效期 35320D 1不同温度下溶液1的附录D(规范性附录)不同温度下溶液1、溶液2的不同温度下溶液1的度 温度 pH 5 00 8 336 23 50 8 056 32 00 7 80215 25 8 328 23 75 8 059 32 25 7 7950 8 320 24 00 8 051 32 50 7 7875 8 312 24 25 8 043 32 75 7 77916 00 8 304 24 50 8 035 33 0e 7 77216 25 8 296 24 75 8 027 33 25 7 76416  288 25 00 8 019 33 5c 7 75615 75 8 280 25 25 8 01 2 3。7j 7 74917 00 8 272 25 50 8 004 34 0C 7 745 8 264 25 75 7 996 34 25 7 73317 8 256 26 00 7 988 31 5c 7 72617 75 8 248 26 25 7 980 34 75 7 71818 00 8 240 26 50 7 972 35 00 7 71018 25 8 232 26 75 7 965 3S 25 7 70318 50 8 224 27 00 7 957 35 50 7 69518 75 8 216 27 25 7 949 35 75 7 68819 00 8 208 27 50 7 941 36 00 7 68019 25 8 201 27 75 7 934 36 25 7 67219 50 8 193 28 00 7 926 36 50 7 66519 75 8 185 28 25 7 918 36 75 7 6572000 8 177 28 50 7 910 37 00 7 65020 25 8 169 28 75 7 903 37 25 7 6422050 8 161 29 00 7 895 37 50 7 63420 75 8 153 29 25 7 887 3775 7 6272l00 8 145 29 50 7 879 3800 7 61921 25 8 137 29 75 7 872 3825 7 61221 50 8 129 30 00 7 864 38  6042 12I 3025 7 856 38 75 759722 00 8 114 3050 7 848 39 00 758922 25 8 106 30 75 7 841 39 25 758122 50 8 098 31 00 7 833 39 50 7 57422 75 8 090 扎25 7 825 39 75 7 56623 00 8 082 31 50 7 818 40 00 7 55923 25 8 074 31 75 7 810D2不同温度下溶液2的裹D2不同温度下藩藏2的 35320温度 温度 温度pH pH 26  935 35320附录E(资料性附录)7参考方法与30参考方法的比较E 1 目前的参考方法为37取代30作为测定温度，只需对某些测定参数进行微小的改变即可保留最适的测定条件。E 2附录中列出了修改并对其进行解释。另外，如果与30参考方法比较时，为提高测定的高标准化而需要更准确的说明是必要的。参见表E 1。表E 1 37和30参考方法的比较37参考方击 30参考方法 解 释