高中生物 1.3 测定微生物的数量课件 中图版选修1.ppt

第三节测定微生物的数量 血球计数板的构造 课程标准 1 测定某种微生物的数量 2 用土壤浸出液进行细菌培养 仅以尿素为氮源 测定能生长的细菌的数量 课标解读 1 了解测定微生物数量的原理和方法 2 观察菌落数 进行微生物数量的统计 3 理解稀释平板计数法的原理和操作过程 测定微生物数量的方法可分为两类 和 1 常用方法直接计数法中常用的是 这种方法是先将待测样品制成 然后取一定量的悬液放在 下进行计数 测定微生物数量的方法 1 测定微生物数量的方法 2 直接计数法 直接计数法 间接 显微镜直接计数法 悬液 显微镜 计数法 2 特点该法所需 可迅速得到结果 而且在计数的同时能观察到所研究微生物的 其缺点是难以计数 这种方法一般适用于 悬浮液中各种 的计数 间接计数法最常用的是 它是根据微生物的 而设计的计数方法 在样品中含菌数 的情形下 也可以完成计数 3 间接计数法 设备简单 形态特征 微小的细菌 纯培养 单细胞菌体 稀释平板计数法 培养特征 较少 1 常用方法 显微镜直接计数法 1 直接计数法 2 过程 先将待测样品制成悬液 然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数 根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数 显微镜直接计数示意图如右 3 优点 所需设备简单 可迅速得到结果 而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征 4 缺点 难以计数微小的细菌 1 间接计数法最常用的是稀释平板计数法 它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法 2 间接计数法 2 过程 将待测样品配制成均匀的系列稀释液 尽量使样品中的微生物细胞分散开 再取一定稀释度 一定量的稀释液接种到平板中 使其均匀分布于平板中的培养基内 或是将一定量的稀释液 与溶化后冷却至45 左右的琼脂培养基混合 倾入无菌培养皿中 摇匀 静置待凝 经过培养后 就由单个微生物生长繁殖形成菌落 这样的一个菌落就代表着一个微生物个体 统计培养基中出现的菌落数 即可推算出检测样品中的活菌数 3 优点 在样品中含菌数较少的情形下 也可以完成计数 4 缺点 由于死亡的细菌不能繁殖产生菌落 所以稀释平板计数法只计数活菌数 故又称活菌计数法 特别提醒设置重复组 增强实验的说服力与准确性 将待测样品经一系列10倍稀释 然后选择三个稀释度的菌液 分别取0 1ml接种到已制备好的平板上 然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面 放在适宜的温度下培养计数菌落数 为使结果接近真实值 可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上 经涂布 培养 计算出菌落平均数 显微镜直接计数法的优点是 a 直接观察不存在误差b 难以计数微小的细菌c 所需设备简单 可迅速得到结果 而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征d 所需设备复杂 还要用到细菌计数板 统计结果误差大答案c 巩固1 土壤中微生物的 和 极其丰富 它们对提高 有重要作用 因此 测定土壤中的 量可以作为判定土壤 的一个重要指标 取土壤表层 cm处的土样 称取 g土样 放入盛有 ml无菌水的锥形瓶中 制成 倍的稀释液 土壤中好气性细菌的计数 1 测定土壤含菌量的意义 2 制备土壤稀释液 种类 数量 土 含菌 肥力 5 10 1 99 102 壤肥力 用 3支 分别吸取稀释倍数为 的土壤稀释液各 ml 注入到相应编号的培养皿中 将已灭菌 培养基溶化 冷却至 左右时 倾入到上述各培养皿中 待这些接种好的平板培养基冷却后 放入 的恒温箱中培养 h 直至长出菌落为止 细菌 放线菌 酵母菌以每个培养皿内有 个菌落为宜 霉菌以每个培养皿内有 个菌落为宜 3 取样及倒平板 4 培养 5 选取具有合适菌落的稀释倍数并计数 无菌移液管 104 105 106 0 2 牛肉膏蛋白胨琼脂 45 50 倒置 28 30 24 36 30 300 10 100 将统计出的菌落数按下列公式计算 得出每克样品菌数 6 计算 1 土壤中好气性细菌的计数 土壤中好气性细菌的计数 制备土壤稀释液取样倒平板培养观察记录 特别提醒移液时 要将移液管插入液面 吹吸3次 每次吸上的液面要高于前一次 让菌液混合均匀并减少稀释中的误差 每配一个稀释度要换用一支移液管 1 土壤取样 土壤微生物大约70 90 是细菌 细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长 绝大多数分布在距地表3 8cm的土壤层 2 样品处理样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目 选用一定稀释范围的样品液进行培养 保证菌落数在30 300之间 便于计数 2 土壤中分解尿素的细菌的计数 3 微生物的培养与观察将培养基平板放置于30 37 温室中培养1 2d 每隔24h统计一次菌落数目 最后选取数目稳定时的记录作为结果 4 细菌的计数当菌落数目稳定时 取同一条件下的至少3个平板进行计数 求出平均值 并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目 请选出进行土壤中细菌计数的正确的操作步骤 土壤取样 称取1g土壤放入盛有99ml无菌水的锥形瓶中 吸取0 5ml进行平板涂布 依次稀释至102 103 104 105 106倍稀释度a b c d 解析在分离土壤中某细菌时 应先选取土样 1g 然后加无菌水获得土壤浸出液 并进行不同倍数稀释 最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养 并分离和计数 答案c 巩固2 取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数 测得的数目是 a 活细胞数b 死细胞数c 菌落数d 细胞总数思维导图 例1 示例一微生物的记数方法及特点 深度剖析显微镜直接记数法是测定微生物数量的一种常用方法 由于该法不能区分微生物的死活 故测得的数目为细胞总数 答案d 方法技巧直接计数法与间接计数法 安徽理综卷 下列是关于 检测土壤中细菌总数 实验操作的叙述中 错误的是 a 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板b 取104 105 106倍的土壤稀释液和无菌水各0 1ml 分别涂布于各组平板上c 将实验组和对照组平板倒置 37 恒温培养24 48hd 确定对照组无菌后 选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 例2 示例二土壤中细菌的计数 思维导图 深度剖析确定对照组无菌后 选择菌落数在30 300的平板进行计数 d错 a是培养基的灭菌方法 b设置了一系列对照实验 c是细菌的培养方法 a b c三个选项均是正确的 答案d 归纳总结土壤中微生物含量不同 其活菌计数时所用的稀释倍数也不同 如 稀释倍数 倍数测细菌数 选用104 105 106倍稀释测放线菌数 选用103 104 105倍稀释测真菌数 选用102 103 104倍稀释 微生物的计数方法不仅用于科学研究 而且还广泛应用于食品卫生检验 环境污染检测等领域 由于微生物形体微小 需用一些特殊的方法进行计数 1 稀释涂布平板法 也叫活菌计数法 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 探究微生物的数量测定 技法必备 2 显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 但不能区分细菌的死活 计算公式 每ml原液所含细菌数 每小格平均细菌数 400 10000 稀释倍数 3 滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例 将已知体积的水过滤后 将滤膜放于伊红 美蓝培养基上培养 在该培养基上 大肠杆菌菌落呈现黑色 可根据培养基上黑色的菌落数目 计算出水样中大肠杆菌的数量 自然界中的微生物往往是混杂生长的 人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯 然后进行数量的测定 下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验 请回答有关问题 步骤如下 制备稀释倍数为102 103 104 105 106的系列稀释液 为了得到更加准确的结果 你选用 稀释混合平板法 稀释涂布平板法 接种样品 适宜温度下培养 结果分析 能力展示 1 测定的大肠杆菌数 在对应稀释倍数为106的培养基中 得到以下几种统计结果 正确可信的是 a 一个平板 统计的菌落数是23b 两个平板 统计的菌落数是22和26 取平均值24c 三个平板 统计的菌落数分别是21 5和52 取平均值26d 四个平板 统计的菌落数分别是21 30 24和25 取平均值25 2 一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23 4 那么每毫升样品中的菌数是 涂布平板时所用稀释液的体积为0 2ml 3 用这种方法测定密度 实际活菌数量要比测得的数量 因为 4 某同学在测定大肠杆菌的密度时发现 在培养基上还有其他杂菌的菌落 能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了 为什么 答案 稀释混合平板法 1 d 2 1 17 108 3 多当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的是一个菌落 4 不能 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程 在做分解尿素的细菌的分离实验时 a同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落 而其他同学只选择出大约50个菌落 a同学的结果产生原因可能有 由于土样不同 由于培养基污染 由于操作失误 没有设置对照a b c d 1 解析a同学比其他同学的实验结果数据大 可能由于选取的土样不同 培养基灭菌不彻底或操作过程中有杂菌污染 也可能是操作失误 如配制培养基混入其他含氮物质 稀释度不够准确等 答案a 下面对 从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌 的理解 不正确的是 a 防止杂菌污染b 消灭全部微生物c 稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作d 灭菌必须在接种前进行答案b 2 探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数 实验原理 农田的表层土壤中 自生固氮菌的含量比较多 将用表土制成的稀泥浆 接种到无氮培养基上进行培养 在这种情况下 只有自生固氮菌才能生长繁殖 用这种方法 可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来 材料用具 农田的表层土壤 无氮培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 盛9ml无菌水的大试管若干 无菌吸管 无菌涂布器 无菌培养皿 盛90ml无菌水的锥形瓶 恒温箱 酒精灯 方法步骤 1 倒平板分别将无氮培养基 牛肉膏蛋白胨培养基倒平板 应在 操作 3 2 制备土壤稀释液取土样10g加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 充分摇匀 用无菌吸管吸取上清液1ml 转至盛有9ml的无菌水的大试管中 依次稀释到107稀释度 3 涂布按照由107 103稀释度的顺序分别吸取0 1ml进行平板涂布 每个稀释度下 无氮培养基应至少涂布 个平板 牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个 4