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实验八 鸡红细胞融合教程教案 实验八鸡红细胞融合实验 一、实验目的1.通过PEG介导的鸡血细胞融合实验,理解体细胞融合原理2.掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术，并观察细胞融合过程。 二、实验原理?细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)是指真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。 ?目前,诱导细胞融合的方法有三种病毒(Okada,1958)、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)(Pontecorvo,1975)和电激(Zimermann,1980)。 ?PEG能改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起两个细胞邻接位置的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。 三、实验用品1器材?离心机，水浴锅，普通光学显微镜；量筒，滴管，刻度离心管，等。 2材料新鲜鸡血3试剂?Alsever液，葡萄糖2.05g，拧棱酸纳0.8g，氯化纳0.42g。 加重蒸水至100mL。 ?0.85%生理盐水，?GKN液氯化钠8g，氯化钾0.4g，磷酸氢二钠1.77g，磷酸二氢钠0.69g，葡萄糖2g，酚红0.0lg，溶于1000mL重蒸水中。 ?Ringer溶液氯化钙0.25g，氯化钾0.42g，氯化钠6.5g(恒恒温动物8.5g)，溶于1000mL蒸馏水中。 ?Hanks液氯化钙0.14g（另溶解），氯化钾0.4g，磷酸二氢钾0.06g，氯化镁0.10g，氯化钠8.0g，碳酸氢钠0.35g，七水磷酸氢二钠0.09g，D-葡萄糖1.0g，酚红0.01g。 按顺序依次逐一完全溶解，用时氯化钙和其余混合，共计100mL。 ?50%PEG混合液称取适量PEG (4000)放人刻度离心管沸水浴中加热溶化，待冷却至50时，加入预热至50的等体积的的GKN液，混匀。 注意使用前配制，PGE有毒避免沾染皮肤。 五、实验结果?经经PEG处理后，在显微镜下，可观察到未融合的单核细胞、融合后的双核细胞和融合后的多核细胞。 绘图说明各个时期。 细胞融合后可观察到哪几种类型的细胞？?细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。 多个视野计数再平均 六、讨论
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