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文档简介
质粒提取试剂盒 一、 试剂盒组成 产品序列号及组成K2303-50 (50次)KarrotenTM Mini Column 502ml Collection Tube50Buffer KBL1 (Lysis solution) 30 mlBuffer KB (Column balance solution)15 ml Buffer KW1 (Washsolution 1) 30 ml Buffer KW2 (Wash solution 2)使用前加入70% 乙醇40 mlBuffer KE (Elution solution)5 ml 二、用户需自备的试剂材料和准备工作 请事先准备好70%乙醇、1.5 ml, 2 ml 离心管。 三、操作步骤： 请将40 ml 70% 的乙醇加入到KW2 试剂瓶中。1. 取一KarrotenTM Mini Column 柱裝在一个2 ml 收集试管上(已备)。加入300 l Buffer KB平衡液至柱子內，室温下13,000 rpm 离心1 min，使平衡液完全流过柱子。弃去收集管中的平衡液. （保留空的收集管，继续往下使用）。特别注意：柱子不平衡，将导致DNA产率和纯度的减少。2. 按250 l全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入500 l KBL1 的比例加入裂解缓冲液，混匀，静置3min （时间超过3 min 也不影响DNA 抽提。人血以100 l-300 l，小鼠以50 l-100 l为最佳，当全血体积小于250 l时，KBL1体积不能小于500 l）。如果样品是无细胞的血清等，应按比例增加体积.3将混合液转移至已平衡的吸附柱內，室温下13,000 rpm 离心30s，使裂解液完全流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。（如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过700 l) 4. 把柱装入2ml 收集管中，加入500 l Buffer KW1，室温下13,000 rpm 离心30s，弃去收集管中的过滤液， 保留柱。5把柱装入2ml 收集管中，加入700 l Buffer KW2，室温下13,000 rpm 离心30s，弃去收集管中的过滤液， 保留柱。注意： Buffer KW2在使用之前必须加入40 ml 70%乙醇，并置于室温下。6.（可选）重复用700 l 70%乙醇 （室温）洗涤柱子。室温下12,000 rpm离心1min。7. 弃收集管中的滤液，将空柱子套回2ml收集管内收集管。室温下,最高转速或13,000 rpm离心2 min以甩干柱子基质残余的液体。 （注意：省去这一步将导致残留乙醇于中） 8. 把柱子装在一个干凈的1.5 ml 离心管上，加入50 l的KE (或者用灭菌的TE 10 mM tris-HCl, pH 8.0或纯水代替，纯水可能影响DNA洗脱效率)，65放置5-10 min, 13,000 rpm离心1min以洗脱DNA。附录：1.
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