药物分析.doc

绪论、药典概况一、药物分析学性质与任务 A、性质是一门综合性的应用学科 B、任务 常规药品检验（生产、储存、临床应用） 药品质量标准制定 临床药学研究二 、中国药典与各国药典 Ch.P （中国药典），USP（美国药典），BP（英国药典），JP（日本药局方）（Ph.Eur 欧 洲药典） Ch.P的主要内容：凡例，正文，附录，索引3、 GLP GCP GMP GSP （名称及英文全称）药品全面质量控制和科学管理法令性文件药品非临床研究质量管理规定 Good Laboratory Practice GLP 药品生产质量管理规范 Good Manufacture Practice GMP 药品经营质量管理规范 Good Supply Practice GSP 药品临床试验质量管理规定 Good Clinical Practice GCP4、 药品检验工作的基本程序（五个主要步骤） 取样，鉴别，检查，含量测定，写出检验报告第三章 药物的杂质检查第1节 概述1、掌握药物纯度、杂质及其限度的概念 药物纯度：指药物的纯净程度，主要从用药安全有效和对药物稳定性的影响方面考虑 杂质来源：A、生产过程中引入，B、贮藏过程中受外界影响 杂质限量：在不影响疗效，稳定性，不产生毒性原则下，药物中所含杂质的最大允许量 杂质限度表示：通常用百分之几何百万分之几来表示 计算方式：杂质限量（%）= 杂质最大允许量/供试品量*100% 限量检查法：标准对照法、灵敏度法、比较法第2节 一般杂质的检查方法1、氯化物、重金属、砷盐等一般杂质检查原理与操作要点 氯化物检查注意事项：A、平行实验，B、加稀硝酸的目的：加速氯化银浑浊的形成，产生较好的乳浊，避免弱硝酸银沉淀的干扰，C、稀释后加硝酸银的目的使产生的氯化银浑浊均匀，硝酸银加得过早，由于氯化物浓度过大而产生氯化银沉淀而影响比浊 重金属检查法：A、 硫代乙酰胺法 原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生 成黄色到棕黑色的硫化物混悬液。B、炽灼后的硫代乙酰胺法 原理-重金属可能与芳环 或杂环形成较牢固的价键，需先加供试品炽灼破坏，残渣加硝酸进一步破坏，蒸干，加盐 酸转化为易溶于水的氯化物操作注意事项：a、硝酸处理后须蒸干除尽NO，b、温度严格控制在500600， C、含 钠盐或氟的有机药物，在炽灼时改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿C、硫化钠法 原理：在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2+生成PbS微粒的混悬液。 （硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性，久直后会产生絮状物，应临用新制）D、微孔滤膜法适用于重金属限量低的药物 砷盐检查法：A、 古蔡氏法 原理：利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐作用生成 具挥发性的砷化氢，与溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑 加入碘化钾目的将五价砷还原为三价砷，有利于生成砷化氢的反应不断进行 加入酸性氯化亚锡的目的（还原剂表现三个方面）a、将五价砷还原为三价砷，b、 将碘化钾被氧化生成的碘还原为碘离子，c、氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌 锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续的发生 醋酸铅棉花的作用排除硫化物的干扰 溴化汞试纸的作用产生砷斑B、二乙基二硫代氨基甲酸银法 产生红色胶态银2、熟悉药品与化学试剂标准的区别 药物纯度：又称为药用规格，主要从用药安全有效和对药物稳定性等方面考虑。 化学试剂纯度：是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响，以及对试剂的使用范围和使 用目的加以规定3、 特殊杂质检查原理：色谱分析法（薄层色谱法和高效液相色谱法）光谱分析法（紫外分 光光度法，红外分光光度法和原子吸收光谱法）4、薄层色谱法在药物分析中的应用-杂质对照法和供试品溶液自身稀释对照法5、了解药物杂质的来源途径第四章 样品定量分析与分析方法验证1、掌握：定量分析前处理方法中的氧瓶燃烧法 A、快速分解有机结构的简单方法 B、不需要复杂的设备，使有机结合的待测元素定量转化为无机形式 C、适用于含卤素或S，P等元素的有机药物鉴别 D、仪器装置：严密，空心，铂丝（催化剂，固定样品，惰性金属） E、通常取样量为1020mg2、 定量分析各种计算方法（重点色谱法的计算方法和系统适应性实验）3、药品质量标准分析方法的验证4、熟悉：样品前处理方法，包括不经有机破坏和经有机破坏的方法5、定量分析方法的特点6、了解：一些前处理技术第五章 巴比妥类药物的分析1、掌握巴比妥类药物的化学结构与分析方法间的关系： （1）弱酸性 1，3-二酰亚胺基团 （2）水解性 1，3-二酰亚胺基团 （3）与重金属离子的反应 A、与银盐的反应：首先生成可溶性的一银盐，硝酸银过量后，生成难溶性的二银盐沉淀 B、与铜盐的反应： 巴比妥类药物紫色沉淀，含硫巴比妥类药物绿色沉淀 C、与钴盐的反应：紫堇色配位化合物2、 掌握巴比妥类药物的鉴别（1）与重金属的反应（2）特殊取代基（不饱和烃基取代、芳环取代）和硫元素的鉴别试验 不饱和烃基取代的鉴别 与高锰酸钾的反应在碱性溶液中将紫色的高锰酸钾还原为棕色的二氧化锰 芳环取代的鉴别(苯巴比妥的特征反应) A、硝化反应 生成黄色硝基化合物 B、与硫酸-亚硝酸钠的反应橙红色 C、与甲醛-硫酸的反应玫瑰红色产物 硫元素的鉴别试验 与铅离子生成白色沉淀，加热变为黑色硫化铅3、掌握巴比妥类药物含量测定的原理与方法：（见书） （1）银量法测定的原理与含量计算 （2）溴量法测定的原理与含量计算 （3）紫外分光光度法测定（计算）第六章 芳酸及其酯类药物的分析第一节 经典药物的分类与性质 （一）苯甲酸类 （二）水杨酸类 具酚-OH，与三氯化铁应；具酯结构，发生水解反应 （三）其它芳酸类第二节 鉴别试验 一、三氯化铁反应 阿司匹林： 紫堇色 苯甲酸盐：赭色沉淀 丙磺舒： 米黄色沉淀 二、水解反应具有酯结构 如：阿司匹林，生成白色水杨酸沉淀第三节 特殊杂质检查 阿司匹林中特殊杂质的检查水杨酸 来源：由生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。 原理：利用阿司匹林结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐 反应生成紫堇色（对照法）第四节 含量测定 一、酸碱滴定法1、直接滴定法 原理： 注意事项：中性乙醇为溶剂的原因： A、防止阿司匹林酯结构在滴定时水解，致使测定结果偏高 B、阿司匹林不溶于水 C、中性是为了排除干扰 滴定时应在不断振摇下稍快地进行，以防止局部碱度过大而促使其水解 本法不适用于水杨酸含量较高的样品测定2、水解后剩余滴定法 注意：空白试验校正-碱液在受热时很易吸收CO2，生成碳酸钠，用酸回滴定时会影响 测定结果3、两步滴定法 第一步中和的目的：中和了存在的各种游离酸，阿司匹林也成为钠盐，从而排除干扰 二、双相滴定法 原理：利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂，并置 于分液漏斗中进行滴定反应，将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂层 中，减少苯甲酸在水中的浓度，使滴定反应完全，终点清晰，同时可降低苯甲酸的 离解 第七章 芳香胺类药物的分析一、芳胺类药物：包括对氨基苯甲酸酯药物和酰胺类药物（一）、对氨基苯甲酸酯类 化学性质芳伯氨基：重氮化-偶合反应；水解：酯键；弱碱性：叔胺氮原子（二）、酰胺类药物 主要性质：水解芳伯胺基 对乙酰氨基酚酚羟基三氯化铁反应（三）、鉴别试验 1、重氮化-偶合反应：区别盐酸丁卡因生成乳白色沉淀 芳伯胺基橙黄到猩红色沉淀，潜在芳伯胺基-红色沉淀 2、三氯化铁反应：蓝紫色 3、水解产物反应：（反应原理及现象）盐酸普鲁卡因10NaOH溶液白色(普 鲁卡因)油状物(普鲁卡因)蒸气（二乙氨基乙醇）(使润湿的红色石蕊 试纸变蓝)油状物消失放冷，HCL酸化白色（对氨基苯甲酸）（能 溶于过量的盐酸）+HCL沉淀消失 苯佐卡因的鉴别 黄色沉淀，有碘仿的臭气 4、杂质检查：对乙酰氨基酚中对氨基酚的检查-在碱性条件下与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物 盐酸普鲁卡因注射液水解产物对氨基苯甲酸（4） 、含量测定 亚硝酸钠滴定法 A、原理 B、测定的主要条件： 1、加入适量的溴化钾:起到氢溴酸的加速作用 2、加入过量的盐酸以加速反应 作用：A 、重氮化反应速度加快 B、重氮盐在酸性溶液中稳定 C、防止生成偶氮氨基化合物 芳胺类药物：酸的摩尔比=1：2.56，反应在室温（10-30） 3、指示终点方法：电位法 永停滴定法 外指示剂法 内指示剂法 非水溶液滴定法：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰 滴定盐酸丁卡因加醋酐（增加其碱性）以突出终点二苯乙胺类药物 氧化反应：肾上腺素肾上腺素红（显血红色）棕红色多聚体 盐酸异丙肾上腺素异丙肾上腺素红淡红色 重酒石酸去甲肾上腺素，在pH 3.56，加碘放置5分钟，加硫代硫酸钠，溶液 无色，而肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素明显的红棕色或紫色。 亚硝基铁氰化钠反应脂肪族伯胺的专属反应第八章 杂环类药物的分析第一节 吡啶类药物的分析 1、异烟肼中具有酰肼基-较强的还原性 2、吡啶环的开环反应：A、戊烯二醛反应（kning反应） B、二硝基氯苯反应（Vongerichten反应） 3、酰肼基反应 还原反应-氨制硝酸银试液，缩合反应-腙 4、异烟肼中游离肼的检查 来源：制备过程引入以及贮存过程降解而产生 方法：薄层色谱法原理：对二甲氨基苯甲醛与肼反应生成腙显色。 比浊法原理：游离肼可与水杨醛反应生成不溶于水的水杨醛腙，呈现 混浊。第二节 喹啉类药物的分析 绿奎宁反应奎宁和奎尼丁鉴别 绿色二醌基亚胺的铵盐第三节 托烷类药物水解性（酯水解生成醇和酸） 托烷生物碱一般鉴别试验：药物水解莨菪酸发烟硝酸（加热）处理三硝基衍 生物+氢氧化钾醇溶液和固体氢氧化钾有色的醌型产物（深紫色）第四节 吩噻嗪类药物 与钯离子配位显色：未氧化的硫可与金属钯离子形成红色配位化合物含量测定一、非水溶液滴定法 （一）、溶媒的选择 pKb在810，冰醋酸做溶媒；pKb在1012，冰醋酸和醋酐做溶 媒；pKb12，醋酐做溶媒 （二）、A测定生物碱氢卤酸盐：加入定量的醋酸汞冰醋酸溶液，生成在醋酸中难解离的 卤化汞B测定生物碱为硫酸盐，滴定至生成硫酸氢盐C测定生物碱为硝酸盐：采 用电位滴定法指示终点；终点指示方法-电位滴定法和指示剂法（结晶紫）二、氧化还原滴定法 1、铈量法 吩噻嗪类药物自身颜色的变化（红色自由基二价阳离子，无色） 二氢吡啶类药物邻二氮菲指示剂 (还原型) 红色(氧化型) 浅蓝色或无色 2、溴酸钾法异烟肼 （1）化学计量关系：3：2 （2）终点时指示剂颜色变化：甲基橙由红色变为无色3、 酸性染料比色法 A 、原理：阳离子BH+与阴离子In定量结合，生成具有吸收光谱的有色离子对B、影响因素： 水相的最佳pH值的选择：只有选择合适的pH，使有机碱性药物均成阳离子BH+， 而酸性染料电离足够的阴离子（In），才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶 剂中，而过量的染料完全保留在水相中，才能保证定量的测定 酸性染料的选择有机溶剂的选择水分的影响酸性染料有色杂质第九章 维生素类药物的分析第一节 VitA1、共轭体系，具有紫外吸收2、共轭多烯侧链，结构不稳定3、鉴别试验：三氯化锑反应 原理：维生素A在无水无醇SbCl3中即显蓝色，渐变紫红色 注意：无水无醇是因为水可以使SbCl3水解成氯化氧锑，乙醇使其正电荷消失4、含量测定三点校正法原理（看些计算题）u 杂质的吸收在310340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小u 物质对光的吸收具有加和性第一法（等波长差法）：用于测定VitA醋酸酯第二法（等吸收比法）：测定对象是VitA醇第一法校正公式 A328(校正)=3.52(2 A328 -A316 -A340)第二法校正公式 A325(校正)=6.815 A325-2.555 A310-4.260 A334第二节 VitB11、结构特征：氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)2、硫色素荧光反应为维生素B1所特有，碱性中被铁氰化钾氧化生成硫色素，溶于正 丁醇，显蓝色荧光3、非水溶液滴定法：溶剂冰醋酸 滴定剂高氯酸 终点紫红天蓝色 A、加入醋酸汞溶液，醋酸汞可与氢卤酸盐作用生成非解离的卤化汞（氯化汞）溶液， 以消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。 B、维生素B1具有两个碱性基团，故与高氯酸反应的摩尔比是1：2第三节 VitC1、结构特征：内酯结构（水解性），烯二醇结构（酸性）2、鉴别试验：与AgNO3反应，黑色银沉淀 ； 与2,6-二氯靛酚反应，蓝色无色3、含量测定 直接碘量法 注意：加入稀醋酸，使滴定在酸性溶液中进行，因为在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢；加新沸过的冷水的目的：为了减少水中溶解的氧对测定的影响 2,6-二氯靛酚滴定法自身的颜色变化指示终点第五节 VitE1、结构：苯环上有乙酰化的酚羟基（酯结构），水解成游离生育酚2、鉴别试验：硝酸反应生育红（橙红色） 三氯化铁反应 原理：在碱性条件下Vit E水解成生育酚，被氧化为对-生 育醌，Fe2+与联吡啶生成红色沉淀（配位离子）第十章 甾体激素类药物的分析类别C数A环17位取代基肾上腺皮质激素 214-3-酮有-醇酮基雄激素194-3-酮-羟基、-甲基孕激素214-3-酮甲基酮雌激素18苯环，3位上具羟基-羟基或酮基化学鉴别法1、强酸的呈色反应：磷酸、高氯酸、盐酸、硫酸（应用广泛）2、官能团的反应 C17-醇酮基还原性（皮质激素类药物） C3酮基和C20酮基：雌激素C3具有酚羟基，无酮基的呈色反应，用以区别。 甲酮基的呈色反应 激素的特征反应 酚羟基的呈色反应 雌激素C3具有酚羟基残留溶剂的检查甲醇（0.1%）和丙酮（0.5%）GC游离磷酸盐检查原理：磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵反应生成磷钼酸蓝，在740nm 处有最大吸收含量测定四氮唑比色法红四氮唑深红色三苯甲簪，蓝四氮唑-暗蓝色的双甲簪讨论：A、反应应在强碱性条件下进行，氢氧化四甲基铵的结果最佳 B、在25暗处反应4045min C、溶剂：无水乙醇(无醛)第十一章 抗生素类药物的分析含量/效价测定方法微生物检定法：优点：（1）与临床疗效吻合；结果直观(2)灵敏度高，(3)适用范围广；缺点：操作复杂费时，误差大理化方法：优点：（1）准确度与专属性较高；（2）操作简便；缺点：与临床疗效有偏差（抗生素的活性以效价单位表示）第二节 -内酰胺类含量测定一、碘量法原理：青霉素族和头孢菌素族药物在氢氧化钠碱性条件下水解，其水解产生 可与定量过量的I2发生氧化还原反应，用硫代硫酸钠来滴定过量的碘，以进行含量计 算讨论：（1）做空白试验的目的：A、消除样品已降解产物的干扰；B、消除样品中其他 消耗碘的杂质的干扰；C、消除碘挥发造成的误差 （2）样品：碘=1 ：8 （3）弱酸性：pH4.5 （4）温度：2426（注意：空白试验中加入样品，不加碱） （5）水解时间：以水解20分钟后的耗碘量最大二、酸碱滴定法原理：青霉素在碱性条件下水解，生成青霉噻唑酸衍生物，加入定量过量的碱，剩余的碱可用盐酸滴定液进行回滴