2016HCV检验方法验证报告.docx

ELISA-(HCV)检验方法验证报告一、 准确度验证采用与明确诊断的结果进行对比获得准确度包括敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值等相关指标。检测方法与明确诊断比较的2X2列联表检测方法明确诊断阳性 阴性 总数 阳性 A B A+B 阴性 C D C+D 总数 A+C B+D N=A+B+C+D 灵敏度（sens）=100%A/(A+C) 特异性（spec）=100%D/(B+D) 阳性预测值（PVP)= 100%A/(A+B) 阴性预测值（PVN)= 100%D/(C+D) 检验效能= 100%(A+D)/N注：预测值：测定为阳（阴）性样本实际为阳（阴）性的可能性。 检验效能：估计检测结果与明确诊断总一致程度的指标，为所有检测结果中真正的阳性结果与真正的阴性结果所占的比例。 灵敏度与特异性95%得分可信区间的计算方法如下： 100%（Q1-Q2)/Q3,100%(Q1+Q2)/Q3 按照下列公式计算Q1，Q2，Q3： 灵敏度： Q1=2A+1.962=2A+3.84 Q2=1.961.962+4AC/(A+C)=1.963.84+4AC/(A+C) Q3=2(A+C+1.962)=2(A+C)+7.68 特异性： Q1=2D+1.962=2D+3.84 Q2=1.961.962+4BD/(B+D)=1.963.84+4BD/(B+D) Q3=2(B+D+1.962)=2(B+D)+7.68注：公式中1.96为标准正态曲线下对于95%可信区间所对应的变量值。 检测100例新鲜临床样本，包含HCV阳性样本，数据如下表所示：HCV检测准确性验证数据试剂批号：2016075815恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1432酶标仪编号：OB-02-13实验人：夏诗雨实验日期20160815OD值健康人血清01健康人血清02健康人血清03健康人血清04健康人血清05健康人血清060.0040.0070.0070.0080.0080.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清07健康人血清08健康人血清09健康人血清10健康人血清11健康人血清120.0100.0100.0030.0090.0070.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清13健康人血清14健康人血清15健康人血清16健康人血清17健康人血清180.0030.0080.0120.0080.0030.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清19健康人血清20健康人血清21健康人血清22健康人血清23健康人血清240.0040.0080.0070.0080.0080.006阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清25健康人血清26健康人血清27健康人血清28健康人血清29健康人血清300.0030.0070.0050.0060.0060.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清31健康人血清32健康人血清33健康人血清34健康人血清35健康人血清360.0070.0060.0040.0070.0080.005阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清37健康人血清38健康人血清39健康人血清40健康人血清41健康人血清420.0060.0070.0090.0080.0040.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清43健康人血清44健康人血清45健康人血清46健康人血清47健康人血清480.0070.0080.0060.0070.0080.008阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清49健康人血清50健康人血清51健康人血清52健康人血清53健康人血清540.0030.0060.0070.0050.0060.006阴性阴性阴性阴性阴性阴性健康人血清55健康人血清56健康人血清57健康人血清58健康人血清59健康人血清600.0060.0070.0040.0060.0040.005阴性阴性阴性阴性阴性阴性HCV P01HCV P02HCV P03HCV P04HCV P05HCV P060.5982.5462.6983.0470.1962.772阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P07HCV P08HCV P09HCV P10HCV P11HCV P122.8942.9480.7583.1823.4152.555阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P13HCV P14HCV P15HCV P16HCV P17HCV P183.5983.3662.9981.9742.8472.897阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P19HCV P20HCV P21HCV P22HCV P23HCV P243.1150.4712.8593.0442.8943.447阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P25HCV P26HCV P27HCV P28HCV P29HCV P302.8472.8543.2413.1543.5412.887阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P31HCV P32HCV P33HCV P34HCV P35HCV P361.8872.8473.0540.7143.5542.897阳性阳性阳性阳性阳性阳性HCV P37HCV P38HCV P39HCV P402.9542.8323.0590.153阳性阳性阳性阳性HCV-IgM检测方法与明确诊断比较的2X2列联表检测方法明确诊断阳性 阴性 总数 阳性 A (40)B (0)A+B(40) 阴性 C (0)D (60)C+D (60)总数 A+C (40)B+D(60) N=A+B+C+D (100) 灵敏度（sens）=100%A/(A+C)=100% 特异性（spec）=100%D/(B+D)=100% 阳性预测值（PVP)= 100%A/(A+B)= 100% 阴性预测值（PVN)= 100%D/(C+D)= 100% 检验效能= 100%(A+D)/N=100%灵敏度与特异性95%得分可信区间的计算：灵敏度： Q1=2A+1.962=2A+3.84=83.84 Q2=1.961.962+4AC/(A+C)=1.963.84+4AC/(A+C)=3.84Q3=2(A+C+1.962)=2(A+C)+7.68=87.68100%（Q1-Q2)/Q3=91.24%100%(Q1+Q2)/Q3=100%灵敏度95%得分可信区间为（91.24%，100%）特异性： Q1=2D+1.962=2D+3.84=123.84 Q2=1.961.962+4BD/(B+D)=1.963.84+4BD/(B+D)=3.84Q3=2(B+D+1.962)=2(B+D)+7.68=127.68100%（Q1-Q2)/Q3=93.98%100%(Q1+Q2)/Q3=100%特异性95%得分可信区间为（93.98%，100%）二、 重复性验证1、 日内重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的检测条件下（仪器设备、实验人员），对同一批号试剂进行同一天20次测量，计算均值，SD及CV。试剂批号：2016055811恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1432酶标仪编号：OB-02-13实验人：夏诗雨实验日期：2016.07.06序号12345678910OD值低值0.5900.6930.6380.6110.7690.6830.5890.5320.6810.619中值1.1881.1541.2171.1741.3391.2381.1311.2401.2481.346高值2.1882.1622.4252.2872.2732.3542.1602.2602.4042.522序号11121314151617181920OD值低值0.5700.6780.6340.5800.6350.5440.6180.6540.5950.546中值1.2531.3831.3521.2861.2291.2781.3221.2351.1761.251高值2.4312.2752.3332.2232.3582.2182.3612.2672.3892.263低值样本：均值X1= 0.623 ， SD1= 0.059 ，CV1= 9.5% 中值样本：均值X2= 1.276 ， SD2= 0.070 ，CV2= 5.5% 高值样本：均值X3= 2.312 ， SD3= 0.097 ，CV3= 4.2% 2、 日间重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的检测条件下（仪器设备、实验人员），对同一批号试剂进行20天，每天1次测量，计算均值，SD及CV。试剂批号：2016055811恒温箱编号：01-F00-0966洗板机编号：01-F00-1432酶标仪编号：OB-02-13实验人：夏诗雨日期07.0607.0707.0807.0907.1007.1107.1207.1307.1407.15OD值低值0.6120.5560.5600.6500.6390.6250.6040.6080.5010.597中值1.1681.1671.2451.4521.3431.2701.3781.2681.1731.224高值2.2552.1912.2262.3362.1712.1002.1832.3902.2102.207日期07.1607.1707.1807.1907.2007.2107.2207.2307.2407.25OD值低值0.6820.6460.7180.6630.6140.5870.6500.5890.6110.546中值1.2731.1461.2471.1741.2971.2441.2781.2031.2141.208高值2.1962.0982.2722.1832.2832.1642.3082.2672.1692.387低值样本：均值X1= 0.631 ， SD1= 0.050 ，CV1= 7.9% 中值样本：均值X2= 1.228 ， SD2= 0.077 ，CV2= 6.3% 高值样本：均值X3= 2.233 ， SD3= 0.082 ，CV3= 3.7% 3、 仪器设备重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的实验人员，不同的仪器设备中对同一批号试剂进行同一天20次测量，计算均值，SD及CV。试剂批号：2016055811洗板机01：01-F00-1432洗板机02：01-F00-1431实验人员：夏诗雨恒温箱编号：01-F00-0966酶标仪编号：OB-02-13实验员01010101010101010101OD值低值0.6060.6580.5890.5650.6670.6130.5740.6270.6260.563中值1.1891.2481.1931.2571.2861.2451.2041.2241.1471.203高值2.2462.2932.3002.2572.2462.1952.3152.2752.1682.305实验员02020202020202020202OD值低值0.6130.5930.5660.6030.6630.6360.5960.5540.5120.571中值1.2531.1871.2211.2361.3711.2631.2071.2191.1691.280高值2.1842.2512.2362.1682.2712.4152.3292.2932.1842.314低值样本：均值X1= 0.591 ， SD1= 0.040 ，CV1= 6.8% 中值样本：均值X2= 1.241 ， SD2= 0.049 ，CV2= 3.9% 高值样本：均值X3= 2.264 ， SD3= 0.063 ，CV3= 2.8 % 试剂批号：2016055811恒温箱01：01-F00-0966恒温箱02：01-F06-6172洗板机编号：01-F00-1432实验人员：夏诗雨酶标仪编号：OB-02-13实验员01010101010101010101OD值低值0.5580.6590.6290.5470.6740.6380.5570.6270.5640.668中值1.2351.3621.2451.1591.2831.3151.2461.2801.3311.211高值2.3742.4332.2522.1812.2922.3072.2262.2222.1782.317实验员02020202020202020202OD值低值0.6010.6010.5840.5820.5300.6120.6990.6570.5720.594中值1.3731.2851.2661.2061.1481.1921.2811.2741.3291.248高值2.0872.1882.1862.2262.0912.2972.3832.2722.1662.388低值样本：均值X1= 0.603 ， SD1= 0.047 ，CV1= 7.8% 中值样本：均值X2= 1.260 ， SD2= 0.062 ，CV2= 4.9% 高值样本：均值X3= 2.228 ， SD3= 0.096 ，CV3= 4.3 % 4、 实验人员操作重复性：使用低值、中值、高值样本，分别在相同的仪器设备中，不同的实验人员对同一批号试剂进行20次随机测量，计算均值，SD及CV。试剂批号：2016055811实验员01：夏诗雨实验员02：张雪芳洗板机编号：01-F00-1432恒温箱编号：01-F00-0966酶标仪编号：OB-02-13实验员01010101010101010101OD值低值0.6310.6110.6760.6270.5930.5450.6490.5900.5070.620中值1.2621.2441.3631.2761.1991.2421.2931.3461.2401.267高值2.5002.2272.1382.2822.1192.1772.2952.3552.2892.196实验员02020202020202020202OD值低值0.5790.6840.6380.5960.5290.6280.6720.6140.7060.625中值1.2841.3771.2521.2141.1591.3351.2521.2251.1141.193高值2.2302.2932.4522.3582.2802.4342.2782.2042.2912.183低值样本：均值X1= 0.627 ， SD1= 0.051 ，CV1= 8.1 % 中值样本：均值X2= 1.240 ， SD2= 0.066 ，CV2= 5.3% 高值样本：均值X3= 2.300 ， SD3= 0.102 ，CV3= 4.4 % 三、 临界点验证使用有证标准物质，如卫生部临检中心或者康侧斯坦质控品，使用正常人血清为基质稀释液，进行梯度稀释，进行重复检测以确定可以获得近50%阳性及近50%阴性结果的那个稀释度，确定临界点（C50）。试剂批号：2016095818标准品名称：康彻斯坦质控品标准品批号：201302001洗板机编号：01-F00-1432恒温箱编号：01-F00-0966酶标仪编号：OB-02-13实验人：夏诗雨实验日期：2016.09.23序号123456稀释液量（ul）0200400400500600稀释比例01:101:201:301:401:50终浓度（NCU/ml）80.80.40.270.20.16检测结果S/C.O.2.7300.8950.5260.2910.1680.119预测临界点曲线方程式：y=1.213x-0.044预测临界点（C50）： 0.15NCU/ml 临界值： 0.1