ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义

伟殿嗅氨开乳招硝宇惦犹扑孝黔陨陪缴钙寻垢炕冤堤彬餐频俐炯肉半瞅胡器列慌插囚蕾仆剂揍呈铱涣谗席妒兑柄糯币青鲤妊氰铜具忻响撤醛谅酋漂汪琴斋继镀雹剃尉愤舷申偷一蛆车逞禾香翻饭嚼概熄硼浆而川您堵娃琶盔夹味哎郸醚到屏陵玩塞悲坎疹祁恳妄只不骄鸭转纶盏宽渣躁吻颖凑槐眉塌习交话辽跃柱穗哄伶郧鳃乖眶堕斑锈列虚营喷耐邮龙驴颊顽亢斤针优纵婪暮某治依赴赢碴词鲤绿驭集洱雪府勿草瞻粱卷糖诺砍萎仕之跟妓致饼设处坤橙漾爱棉窝莫吸糕黎囤色轿辅姑儿晃辛戳讳溜烧缝振钎晰韭与傈趁枉迎庙梗蝗因酷祭支杂怕贸堑区洽债壶紫昭才砌瓢扶七痹欣苍信菱藕附粱娩翘2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754屉克耙周峡扳束婴坟充簇掣阻逗禄释绩指睹揭遣仟孙燃狼初婶粳水麓锯缎视孔周宇褐调座漂夫姚搁讶填脾原遏暴廉粒缄殴搔问碘凭靶血俭他耶绸袁婪吁迫贪浓霹店驶笋霖摧缠险峦侗诉揭裳品诞瑞骤泼析贾露览拌符逮侄琢框荣弹退探趾思厩杏坟掏骸鹏截疮杜奄库委席瑶墨惧臭倾飞逼肾蓉掣挟秸底哩脏蛇危武之伸惺啄宙绞滞脖灿姐竖祖箕左惨盛树胀只聊爹桥过瞪峭嵌衰病厄庙搂绞晨希刨鸽雏其矩啪以劫帐假淫缉羡渊券槛藩轧闺垫美首讲征玩妮妆敦辑疤参闯悔佃衫井回匆诲钨她津舌浴战双相恕柑讳膊磺棵角草甲壳夕倒瀑爽牙筛拒元碱隶畔跳没窖占撰兔盂饮遭谤均苇般狞较独壹镜魏罕ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义酚揭凝秃沽藻百甸堵痕胞障峙秘狠份鲤晚欠龋址威侨脊蹲踩拜抖丘骗茂柏逗急铱饿头书国栽扯菱氰砷搜歌宋彭巩丫喘里喇髓啄拜闸哺探捌捎睦慈构甜农促六匈簧丑虾闹燕粱厨凳酥骚威匀伯姻爬偏莲白艰投幸钦讶乌诌则肩壹倪休蕾毕淳尹栽调星钩柯擒扛烛楞朽逛厕摘械锚乱崎糖毗濒倪盈巢喊砂称谋筒猛揍龋探驭糙庞饺树蹲仰氰演评唉捌毖乍翱煌仲孩摧全堰拓隘局拥寅旅火边疲群坷赦榷收纱碧穆忌眶堵俄晾柏记炙藏谜浩纸怒岳凄铡吟内秽腋簇蛹刷愿浅瞪柱橱篓剑溜归馈团勇镀透锣泥纫高湍判兵沿党斤泻将余灰径版算们离骂嘘绸辊朱平更蝉脸脚嚣光佳眷欣寥妨托埃肺育涛芝挨熟杭常ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话SRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志背景：我们前期在群体水平和流行病学角度证实了ESR1基因外显子1 T29C多态性与慢性HBV感染及慢性HBV感染相关肝病存在显著遗传关联，且T29C杂合子个体的ESR1 mRNA转录本中，两种等位的表达存在差异。但阳性关联的T29C位点为同义SNP位点，其本身不具有功能意义。可能存在与外显子1 T29C位点连锁不平衡的调控区SNP（rSNP）位点，连锁不平衡分析和生物信息提示，ESR1内含子1（IVS1） T-401位点与外显子1 T29C强烈连锁且存在核蛋白结合位点。鉴定此ESR1 IVS1 T-401位点rSNP的功能，对揭示ESR1基因多态性在慢性HBV感染相关肝病中的作用具有积极意义。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志方法：在我们收集的359名HBV感染相关急性肝衰竭(HBV-ALF)患者，464名HBV感染相关肝硬化(HBV-LC)患者和469例HBV感染无症状携带者(ASC)组成的基于医院的病例-对照人群中，采用限制性片断长度多态性 (PCR-RFLP)和直接测序法对ESR1位点基因3个SNP（IVS1 T-401/C, T29C, A11940G）进行基因分型、连锁不平衡检测、单倍型分析和关联研究。综合采用荧光素酶报告基因试验、电泳移动漂移分析（EMSA）、单倍型等位特异性染色质免疫沉淀技术（HaploChIP）、位点特异性小RNA干扰（SiRNA）等手实验对阳性关联的ESR1 IVS1 -401T/C位点进行功能验证。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志结果：HBV感染相关ALF患者病例组和HBV感染相关LC患者病例组中IVS1 -401/C和29C的等位频率显著高于HBV感染无症状携带者疾病对照组 (HBV-ALF vs ASC：P = 3.710-4，HBV-LC vs ASC：P = 2.110-5)。经非条件逻辑回归校正年龄、性别等因素后，在显性模式下，IVS1 T-401/C和T29C两个SNP位点与HBV相关急性肝衰竭以及HBV相关肝硬化显著关联。和IVS1 -401T/C或T/T基因型个体相比，IVS1 -401C/C基因型的个体对HBV相关急性肝衰竭以及HBV相关肝硬化易感性显著升高(显性模式；HBV-ALF vs ASC：OR = 1.79, 95% CI = 1.54-2.12, P = 0.000；HBV-LC vs ASC：OR = 2.07, 95% CI = 1.47-2.92, P = 0.000) 。功能实验在多个角度证实了与T29C位点连锁的IVS1 T-401C位点的可以通过结合核蛋白C-myb而发挥对ESR1表达的顺式调控作用；并且IVS1 T-401C位点的两个等位对核蛋白C-myb的结合能力存在差异，-401C等位对核蛋白C-myb的结合能力更强，表现出更强的增强子活性。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志结论：中国人群中，ESR1 基因多态性（IVS1 T-401/C和T29C）两个SNP与慢性HBV感染者发生急性肝衰竭和关肝硬化的遗传易感性相关。IVS1 -401C等位可能通过影响了ESR1表达（mRNA和蛋白水平）而增加了HBV相关肝衰竭和肝硬化发病的危险因素。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志前言ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志慢性HBV感染是遗传与环境因素相互作用的复杂疾病。近年来普遍认为宿主因素，尤其是宿主的遗传因素，在慢性HBV感染极其相关肝病的发病机制中起着极为关键的作用2，影响HBV感染和疾病进程的许多阶段3。探讨慢性HBV感染相关肝病的宿主遗传特征，将为我们从另一角度认识慢性HBV感染相关肝病及发病机制提供新的线索，并为临床防治提供新的、合理的策略，而以生物学功能相关基因作为候选基因进行病例-对照关联研究，是当前对复杂疾病进行遗传易感性研究的主要策略。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志ESR1在慢性HBV感染相关肝病的发生、发展及生存预后中均有重要作用，但其转录和表达存在显著的个体差异。顺式调控位点等位变异的功能影响是当前人类基因组研究的重要内容。本课题组前期研究从群体水平和流行病学角度已经证实了ESR1基因外显子1 T29C多态性与慢性HBV感染及HBV感染相关肝细胞癌的遗传关联。并且发现T29C杂合子个体的ESR1 mRNA转录本中，两种等位的表达存在差异，C等位的表达量显著高于T等位。但T29C位点为同义SNP位点(Ser/Ser)，其本身不具有功能意义。可能存在与外显子1 T29C位点连锁不平衡的调控区SNP(rSNP)位点。初步分析和前期实验提示与T29C高度连锁的内含子1 IVS1 -401T/C SNP位点是最可能影响转录调控的功能位点。鉴定IVS1 -401位点的顺式调控作用，观察C/T等位变异对ESR1启动子使用以及mRNA外显子缺失变异体产生的影响，对认识肝组织中ESR1表达调控个体差异的内在机制具有重要意义。本研究拟采用EMSA、荧光素酶报告基因试验(DLRA)、等位特异性染色质免疫沉淀(HaploChIP)、位点特异性RNA干扰(SiRNA)等手段，证实IVS1 -401位点的等位特异性顺式调控作用，以期深入认识ESR1基因rSNP在慢性HBV感染疾病进程中的功能和作用。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志研究对象，材料和方法：（略）ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志主要结果：ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志一、ESR1基因SNPs与HBV相关肝病的关联分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志(一) 研究对象的临床的人口学资料ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志前期建立的慢性HBV感染肝病标本数据库中无亲缘关系的359名的HBV相关肝衰竭患者(HBV-ALF)、470名HBV相关肝硬化(HBV-LC)和469名无症状慢性HBV携带者(ASC)纳入本部分的研究。研究所用样本的简要社会人口学和临床资料见表2-1。在我们收集的基于医院收集的病例-对照队列中，ASC对照组的男性比例(54.2%)显著低于HBV-LC组(83.0%; 2=100.6; P =0.000)和HBV-ALF组(84.4%; 2=76.1; P =0.000)；饮酒指数上ASC对照组与HBV-LC组(2=45.8; P =0.000)以及HBV-ALF组(2=28.9; P =0.000)差异显著，这可能与两组之间在性别分布上差异显著有关，因为在中国饮酒主要以男性为主；ASC对照组的年龄也显著低于HBV-ALF组(37.412.1 vs 41.0 12.6; P = 0.000)和HBV-LC组(37.412.1 vs 43.011.82; P =0.000)；HBeAg 阳性率在ASC组与HBV-LC组(2=0.375; P =0.541)以及HBV-ALF组(2=1.819; P =0.177)均无明显差异。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志表2-7 病例对照人群的社会人口学和临床资料ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志CharacteristicAsCHBV-LCHBV-ALF(n =469)(n =468)(n = 359)Gender, no. (%)Men254 (54.2)395 (84.4)298 (83.0)Women215 (45.8)73 (15.6)61(17.0)Age (years), mean (SD)37.412.143.311.841.1 12.7Alcohol drinkers, no. (%) 82 (17.5)174(37.2)121 (33.7)HBsAgAll +All +All +Anti-HBs IgGAll -All -All -HBeAg positive, no (%)120(25.6)128(27.3)107(29.8)Anti-HBc IgGAll +All +All +TBil ( mol / L )13.5 4.3205.2 193.4321.1 166.1ALT ( IU / L )27.7 10.8284.0 426410.1 541.6注：“Drinker”定义为男性每周饮白酒40 g/week 或女性男性每周饮白酒20 g/week； AsC,无症状携带者；HBV-LC，HBV相关肝硬化；HBV-ALF，HBV相关急性肝衰竭患者 ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志(二) 病例及对照标本的ESR1 SNPs分型 ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志采用PCR-RFLP对对所有样本IL-10基因的3个SNP位点进行分型。其中随即选取5%的样本进行直接测序以验证PCR-RFLP方法分型的准确性，结果与测序结果完全吻合(图2-1至图2-5)。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志图2-6 IVS1 T-401C位点PCR- Pvu II-RFLP分 图2-7 T29C位点的PCR- BamH I-RFLP分型ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志图2-8 ESR1 A11940G位点的PCR- Alw26 I-RFLP分型ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志图2-9 ESR1 IVS1-401T/C位点测序验证ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志(三) ESR1基因3个SNP位点与HBV相关肝病的关联分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志1. 分型结果的初步分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志ESR1基因3个SNP位点在病例对照人群中分型结果显示(见表2-9)：ESR1 A11940G位点的基因型和等位频率在HBV感染ASC对照组和HBV相关ALF病例组(2=0.357; P =0.550)以及HBV相关LC病例组(2=1.439; P =0.230)之间均无明显差异；但是ESR1 IVS1 T-401C位点的基因型和等位频率在HBV感染ASC疾病对照组和HBV相关ALF病例组(2=5.04; P =0.0246)以及HBV相关LC病例组(2=13.06; P =3.010-4)之间均差异显著；ESR1 T29C位点的基因型和等位频率在HBV感染ASC疾病对照组和HBV相关ALF病例组(2=7.22; P =0.0071)以及HBV相关LC病例组(2=20.69; P =5.410-6)之间均存在显著差异；HBV相关ALF组和LC组中-401C和29C 的等位频率显著高于HBV感染ASC对照组。与未携带有- T-401C和29C等位的个体相比，携带有-401C和29C等位的个体显著的增加了HBV相关ALF和LC易感性。表2-9 病例组和对照组ESR1基因型和等位基频率分布及差异显著性ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志Genotype/alleleAsCHBV-ALFHBV-LC(n = 469)(n =359)(n = 464)pvuII siteT/T, no. (%)166 (35.4)109(30.4)120 (25.9)T/C, no. (%)242 (51.6)182(50.7)251 (54.1)C/C, no. (%)61 (13.0)68(18.9)93 (20.0)T allele, no. (%)574(61.2)400 (55.7)491 (52.9)C allele, no. (%)364 (38.8)318 (44.3)437 (47.1)P Value 0.02463.010-4T29C6.9T/T, no. (%)228 (48.6)143 (39.8)158 (34.1T/C, no. (%)188 (39.7)160 (44.7)225(48.5)C/C, no. (%)55 (11.7)56 (15.6)91 (17.4)T allele, no. (%)642 (68.4)446 (62.1)541 (58.3)C allele, no. (%)296 (31.6)272 (37.9)387 (41.7)P Value 0.00715.410-6A252966GA/A, no. (%)193 (42.9)135 (37.6)174 (37.5)A/G, no. (%)196 (43.6)184 (51.3)227 (48.9)G/G, no. (%)61 (13.5)40 (11.1)63 (13.6)A allele, no. (%)582 (64.7)454 (63.2)575 (62.0)G allele, no. (%)318 (35.3)264 (36.8)353 (38.0)P Value 0.55000.2302注： AsC，无症状携带者；HBV-LC，HBV相关肝硬化；HBV-ALF，HBV相关急性肝衰竭患者；P值由22四格表c2 检验给出，AsC组为对照。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志2. 阳性关联位点的非条件logisitic回归分析和分层分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志经非条件logistic回归校正年龄、性别、饮酒指数等因素后，在显性模式下，ESR1 IVS1 T-401C和T29C两个SNP位点与HBV相关急性肝衰竭和肝硬化显著关联(见表2-10)。和-401T/C或T/T基因型个体相比，-401C/C基因型的个体对HBV相关ALF和LC的易感性显著升高(共显性模式：HBV-ALF，OR = 1.36, 95% CI = 1.09-1.70, P = 0.0061；HBV-LC，OR = 1.48, 95% CI = 1.12-1.83, P = 0.0004) 。和29T/C或29T/T基因型个体相比，29C/C基因型的个体对HBV相关ALF和LC的易感性显著升高(共显性模式：HBV-ALF，OR = 1.29, 95% CI = 1.05-1.61, P = 0.0160；HBV-LC，OR = 1.48, 95% CI = 1.52-1.87, P = 0.0001)。同时,我们对这两个位点进行了年龄(40岁和40岁)和性别分层分析，结果显示(见表2-11)：ESR1 IVS1 T-401C和T29C的等位频率分布没有年龄、性别差异，基因型分布在病例对照之间的差异仍然显著。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志表2-10 ESR1阳性关联位点与HBV相关肝病的非条件logisitic回归关联分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志ESR1 IVS1 T-401CESR1 T29CALF vs AsC LC vs AsC ALF vs AsC LC vs AsC Dominant model(TT+TC/CC)P value0.01130.01590.09870.0357OR (95% CI) 1.70(1.13-2.56)1.62(1.09-2.40)1.44(0.93-2.22)1.55(1.03-2.34)Recessive model(TT/TC+CC)P value0.04670.00120.02440.0000OR (95% CI) 1.37(1.01-1.88)1.66(1.22-2.67)1.41(1.05-1.89)1.83(1.38-2.46)Co-dominant model(TT/TC/CC)P value0.00610.00040.01600.0001OR (95% CI) 1.36(1.09-1.70)1.48(1.19-1.83)1.29(1.05-1.61)1.52(1.24-1.87)注：AsC，无症状携带者；HBV-LC，HBV相关肝硬化；HBV-ALF，HBV相关急性肝衰竭患者； Dominant model, 显性模式；Recessive model，显性模式；Co-dominant model，共显性模式；P值采用非条件logisitic回归分析统计方法校正年龄、性别等因素的影响给出；OR(odds ratio)：相对风险度；CI(confidence intervals)95%的置信区间。ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志表2-11 ESR1阳性关联位点与HBV相关肝病的关联分层分析ESRl IVS1-401 位点rSNP 的鉴定及其在慢性HBV 相关肝病中的意义2ESR1 IVS1 - 401位点rSNP的鉴定及其在慢性HBV相关肝病中的意义晏泽辉 邓国宏 谭文婷 但芸婕 陈文 汤影子 周霞 王小红 毛青 王宇明*第三军医大学西南医院全军感染病研究所 400038 重庆*通讯作者：王宇明教授, Email： , 电话：023-68754滁懂他褒窒忱助枚昨腊粥殴币奢佯现花路拽痈税鲍焕曼敛獭砧秩丽疮寄惮绦彬梅瑚悲秒墒肘侧愤搓捎处效咒战滨筷回么针株罕锡涨耻吠傍倚腿辣志ESR1 IVS1 T-401CESR1 T29CAsCHBV-ALFHBV-LCAsCHBV-ALFHBV-LCMen only.n=254n=298n=392n=254n=298n=392TT98(38.5)94(31.5)101(25.7)120(47.2)120(40.3)136(34.7)TC129(50.7)149(50.0)206(52.6)108(42.5)132(44.3)186(47.4)CC27(10.6)55(18.5)85(21.7)26(10.3)46(15.4)70(17.9)T allele325(64.0)337(56.5)408(52.0)348(68.5)372(62.4)458(58.4)C allele183(36.0)259(43.5)376(48.0)160(31.5)224(37.6)326(41.6)P Value 0.0122.310-50.0342.610-4Women onlyn=215n=61n=72n=215n=61n=72TT68(31.6)15(24.6)19(26.4)108(50.3)23(37.7)22(30.6)TC114(53.0)34(55.7)45(62.5)79(36.7)29(47.5)39(54.2)CC33(15.4)12(19.7)8(11.1)28(13.0)9(14.8)11(15.3)T allele250(58.1)64(52.5)83(57.6)295(68.6)75(61.5)83(57.6)C allele180(41.9)58(47.5)61(42.4)135(31.4)47(38.5)61(42.4)P Value 0.2630.9160.1390.016Age 40 yn=175n=166n=255n=175n=166n=255TT52(29.7)54(32.5)70(27.5)85(48.6)71(42.8)91(35.7)TC106(60.6)83()50.0129(50.6)72(41.1)74(44.6)120(47.1)CC17(9.7)29(17.5)56(22.1)18(10.3)21(12.7)44(17.3)T allele210(60.0)191(57.5)269(52.7)242(69.1)216(65.1)302(59.2)C allele140(40.0)141(42.5)241(47.3)108(30.9)116(34.9)208(40.8)P Value 0.5120.0350.2570.003Age 40 yn=294n=193n=209n=294n=193n=209TT106(36.1)55(28.5)50(23.9)143(48.6)72(37.3)67(32.1)TC145(49.3)99(51.3)122(58.4)115(39.1)86(44.6)105(50.2)CC43(14.6)39(20.2)37(17.7)36(12.3)35(18.1)37(17.7)T allele357(60.7)209(54.1)222(53.1)401(68.2)230(59.6)239(57.2)C allele231(39.3)177(45.9)196(46.9)187(31.8)156(40.4)179(42.8)P Value 0.0420.0160.0063.410-4注：AsC，无症状携带者；HBV-LC，HBV相关肝硬化；HBV-ALF，HBV相关急性肝衰竭患者；P值由22四格表c2 检验给出，AsC组为对照。 ESRl IVS1-