16P2实验室操作规程.doc

黑龙江省疾病预防控制中心文件编号：HJK/GZ-BD-016-2010作业指导书第3页 共 4页第5版 第0次修订文件名称：P2实验室操作规程实施日期：2010年1月1日BSL-2实验室操作规程1. 目的加强P2实验室生物安全管理，规范实验人员仪器设备、实验操作行为，确保P2实验室工作安全运行。 2适用范围 适用于P2实验室的管理与操作。3职责31实验人员：严格执行P2实验室相关管理规定，规范操作行为。32实验室负责人：监督执行P2实验室相关管理规定，及时纠正违规操作行为，发现不安全隐患及时上报。33科室负责人：监督并定期抽查P2实验室管理规定执行情况，及时发现并解决P2实验室运行中出现的问题。4准入要求41只有经过授权的人员才允许进入P2实验室工作区。42 16岁以下儿童禁止进入P2实验室工作区。43 实验人员要接受相应预防性生物制品的免疫接种。44禁止将无关动物带入实验区。45外单位人员来访、参观、进修，必须经中心主管部门批准，未经批准不得进入P2实验室工作区。46外来人员进入P2实验室，须由本室人员陪同，在严格遵守有关规定的条件下方可进入，同时填写外来人员进出实验室特殊区域登记表。47限制免疫耐受者进入实验室。48限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室。编写： 审核 ： 批准 ： 批准日期： 年 月 日49严禁在实验室内吸烟、饮食、化妆等。 5进入程序51用P2实验室专用卡，在电子刷卡器上刷卡，听到门舌打开后，方可打开缓冲间外门。伸手打开缓冲间内空调和生物安全柜按钮，使实验室和生物安全柜净化10分钟以上。 方可进入实验室进行实验。52将实验所需材料和物品放入传递窗内。53进入P2实验室缓冲区，关闭外门，在工作服外加穿P2实验室专用罩衣（紧口，后系带），戴一次性口罩、帽子和戴两层手套, 换穿P2实验室专用鞋。需要时打开照明按钮。54进入实验室工作区，首先打开照明按钮，打开前玻璃门，调节到要求的高度。将实验所需物品一次性放入实验台内，摆放要有秩序且要相对区分清洁物与污染物，净化生物安全柜10分钟左右。55观察实验区负压表指示数值是否在工作要求范围内，如不能满足要求则进行负压调节。观察温湿度计，填写温湿度计使用记录。56实验人员手臂放进安全柜内大约1分钟后，即可按无菌要求进行实验操作。57完成整个实验操作后，将使用过的物品进行分类处理。消毒整个工作台面，再让排风至少运行10分钟。58放下前玻璃门，打开生物安全柜紫外线灯进行毒。59离开实验操作区前脱去第二层手套放到指定容器内消毒处理。510 填写仪器使用记录。6实验后物品、污染物处理61对不可回收的污染物品小心包扎后，通过污染通道，在双扉灭菌器内按规定要求进行高压灭菌处理。然后按医用垃圾交中心统一处理。 62对可回收的污染物品小心包扎后，通过污染通道，在双扉灭菌器内按规定要求进行高压灭菌处理。之后转入洗刷间进行洗刷。63对一次性实验用品放入容器内高压灭菌，然后按医用垃圾交中心统一处理。64对不可高压灭菌处理的物品，应选择适当的消毒剂进行浸泡消毒。可回收的物品，送洗刷室；不可回收的物品，按中心“三废”处理的有关规定执行。7出实验室程序71打开实验室内门，出来后随手关闭。将实验室专用罩衣脱下，挂在缓冲区，待稍后进行紫外线消毒。脱掉一次性帽子、口罩和手套，放入待消毒的垃圾筒内，按门锁按钮，打开外门，更换拖鞋，打开紫外线按钮，同时关闭排风按钮，然后关闭外门。注：若进入时打开照明，则此时应关闭。72如实验过程中在传递窗传递过污染性物品，在实验后应进行紫外线消毒。73待消毒完毕后（至少30分钟），关闭生物安全柜和紫外线按钮。8注意事项8.1 应保持实验室环境清洁。8.2 工作台内部空间需用消毒剂擦洗，如消毒剂具有腐蚀性，要用自来水清洗台面，以避免腐蚀。8.3 操作台内的实验器具应避免阻挡前后的穿孔网格，并且避免把东西卷入其中。所有的操作应该在距离前面的格栅约10厘米以内的工作面上进行。8.4 操作时应动作缓慢，减少不必要的手和手臂伸进和伸出空气屏障，以免影响气流。8.5 工作台在操作时，应尽量减少实验室内开门、关门，人员走动等情况，以免影响室内气流。8.6 通常情况下，在安全柜里面不要使用酒精灯或类似的明火，因为他们会破坏气流模式、损坏HEPA过滤器，并且有火灾的危险（除非有特殊的要求）。8.7 警报灯或警铃响时切勿继续操作。8.8 一旦工作台在操作时出现意外事故，须在这些东西搬出之前，连同工作台在内进行全面消毒，如果溢出的污水或液体集中在排液槽中，必须采取紧急措施将污水排出。同时填写实验室潜在危险材料溢出或浅出记录。89试验结束后将试验物品移出生物安全柜，不得将生物安全柜当成储物箱。9 维护保养9.1 当安全柜移动后或实验室布局改动时，应该由有经验的工作人员对安全柜的屏障作用重新进行测试。9.2 半年一次安全柜内沉降菌检测：安全柜消毒清洁后，紫外线照射30分钟，开前门通风十分钟后，于工作台面中部均匀放置两块已制好、经检验无菌的普通营养琼脂培养皿，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后倒置，取出放36培养箱培养24小时以上，用肉眼直接进行菌落计数，以1为合格。9.3 检查前玻璃驱动装置的松紧度。9.4每年请厂商对安全柜进行风速、洁净度检测一次。9.5 根据需要更换紫外灯管和照明灯管。杀菌灯工作超过一定时间后会失去效果，当工作台灯照强度低于每平方厘米40微瓦时，就应更换新的杀菌灯。（可用紫外线灯表来测定工作台表面的灯照强度）9.6 应根据需要更换高效过滤器（HEPA），由专业人员进行操作。（高效空气过滤器的寿命取决于如何使用它。在实验室的正常条件下，可以预测本过滤器至少可以使用五年。）9.7 在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5分钟使安全柜内的空气进行净化。9.8 定期对安全柜的工作台面、内壁（不包括