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Outofanother20 3-day regnantmice,ten received PTENantisense oligonucleotide atthe horn ofuterus and ten received normalsaline to countthe blastocysts atpregnantday 8.ResultsThePTENmRNA/β-actinmRNA in pregnantmicewashigher than thatofnonpregnantmice,PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋gradually hoisted as days passed by,and reached the highest atpregnantday 5. The number ofblastocysts inthemice that received PTEN antisense oligonucleotidewas fewer than that received normal saline.ConclusionPTEN persistently expresses in mouse endometria during the early pregnancy and maybe participate in theregulation process ofmouse blastodyst implantation.PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋Key words:PTEN;endometrium;implantation;real-time fluorescence quantitative PCR;intrauterine injectionPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋PTEN是位于人类染色体的10q23的肿瘤抑制基因,编码一种双特异性的蛋白磷酸化酶,能够脱去丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸残基的磷酸1。序列分析表明,该蛋白质与张力蛋白和辅助蛋白有很大的同源性2,促进细胞凋亡的发生。它在体外同时具有脂质磷酸酶和蛋白水解酶的活性。近年的研究表明,它在胚胎发育、着床,细胞迁移,和细胞凋亡等中发挥重要的作用1, 3。胚胎着床和胎盘形成过程会发生一系列的细胞间相互作用,细胞增值,侵入以及细胞凋亡等,导致着床点处组织重建。细胞凋亡可能在胚胎发育和多余细胞清除方面起关键性的作用。本研究采用实时荧光PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitativePCR, real-time FQ-PCR)定量分析PTEN在妊娠早期子宫内膜的表达,用子宫角注射法观察PTEN反义寡核苷酸对胚泡着床的影响,初步探讨它在小鼠胚泡着床过程中的作用,为进一步探讨胚胎着床机制提供实验依据。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1材料与方法PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 1材料PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 1. 1实验动物PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋清洁级NIH小鼠120只, 68周龄,质量(2325)g,由重庆医科大学实验动物中心提供合格证号:SCXK(渝) 20050002。选择动情周期中任意时期的雌鼠按雌、雄比例21与雄鼠合笼交配,次晨发现有阴栓者为妊娠第1天,依次计算妊娠天数。随机数字表法将未孕小鼠和孕鼠分为6组(分别记为d0、d1、d3、d4、d5、d7),每组20只。断颈处死,取无菌条件下子宫内膜备用。将孕3 d的20只小鼠,分为2组,进行子宫角注射。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 1. 2主要试剂及仪器PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋FQ-PCR引物和荧光探针均由上海基康公司设计并合成。荧光定量PCR仪为ABI Prism 7000。PTEN反义寡核苷酸由TaKaRa合成,脂质体2000转染试剂购自Invitrogen公司。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2方法PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 1总RNA的制备及cDNA合成PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋按照TRI-zol试剂的说明书提取小鼠子宫总RNA,所提取的总RNA通过电泳和测定A值判断总RNA的质和量。25μl反应体系中总RNA 1μg,PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋Olig-DT 500 ng, 5×缓冲液5μ,l M-MLV(200U/μl)1μ,l RNAi(25U) 0.5μ,l dNTPs(10mmol/L) 5μ,l加DEPC-H2O至25μ,lPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋705 min, 4260 min, 7010 min进行逆转录反应。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 2荧光定量PCR标准品的制备PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋在实时荧光定量PCR中需要制备标准品以产生标准曲线,普通PCR仪上进行PTEN片断的PCR,获得255 bp的产物,胶回收纯化PCR产物。与PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋PMD18-T载体建立连接反应,产生PMD18-T载体+PTEN基因片断的质粒,蓝白斑筛选,转入感受态细菌扩增,抽提纯化质粒,酶切, PCR,测序。紫外分光光度计检测吸光度值D(260),并计算质粒浓度及换算拷贝数。梯度稀释质粒,得到108、107、106、105、104、103copies/μl的质粒。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 3荧光定量PCR标准曲线的制备和数据分析PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋用已知PTEN质粒拷贝数的模板进行扩增得到CT值,与其对应的起始拷贝数的自然对数作图,得到一标准曲线(R≥0. 99)。根据同PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋时扩增的未知样品的CT值,仪器自动在标准曲线上产生它的起始拷贝数。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 4荧光定量PCR检测PTEN表达PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋以RNA反转录得到的cDNA为模板扩增PTEN和β-actin(引物和探针序列见表1)。25μl反应体系中含Mg2+(25 mmol/l) 3. 0μ,l dNTPs(各PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋2. 5 mmol/l) 2. 0μ,l 10×buffer2. 5μ,l引物1, 2(20μmol/L)各0. 5μ,l rTag酶(5 U/μl)0. 2μ,l探针(20μmol/L) 0. 8μ,l cD-PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋NA模板2. 0μl。扩增反应条件9510 s预变性, 9515 s,6030 s收集荧光信号, 7230 s,共40个循环。每一个样本做3个平行管。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋表1引物及探针序列PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋基因引物序列PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋PTEN外围引物正义链CCCAGTCAGAGGCGCTATGTPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋PTEN外围引物反义链GATATCACCACACACAGGCAATGPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋探针配套PTEN正义链ACCCGTGGCACTGCTGTTPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋探针配套PTEN反义链GATATCACCACACACAGGCAATGPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋PTEN荧光探针F-TGGCGGAACTTGCAATCCTCAGTTTG-PPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋内参β-actin正义链CCTGAGGCTCTTTTCCAGCCPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋内参β-actin反义链TAGAGGTCTTTACGGATGTCAACGTPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋内参β-actin荧光探针F-TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC-PPTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 5反义寡核苷酸-脂质体复合物的制备PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋根据小鼠PTEN全基因cDNA序列设计反义寡核苷酸,序列为5′-GGCG-GTGTCATAATGTCTCT-3′经NCBI BLAST向基因库检索验证PTEN反义寡核苷酸序列仅与PTEN mRNA互补。对所有核苷酸进行全硫代修饰。将PTEN反义寡核苷酸81μg稀释于50μl生理盐水中(A液),将脂质体ipofectamine2000 6μl稀释于50μl (B液)生理盐水中,将A、B液混匀,室温放置30min备用。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 2. 6小鼠子宫角注射PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋将20只妊娠3 d的小鼠随机数字法分为两组:对照组(10只),双测子宫角均注射生理盐水;实验组(10只),左侧子宫角注射反义寡核苷酸,右侧子宫角注射生理盐水对照。以上各组小鼠于妊娠3 d晚上8点子宫角分别缓慢注入A、B混合液8μl、或生理盐水8μl(注射过程大于3min),具体步骤按Illera4介绍的方法进行。待妊娠8 d剖腹取出子宫,肉眼观察并统计胚泡着床数。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋1. 3统计学处理PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋每一个实验组PTEN基因mRNA拷贝数与β-actin基因mRNA拷贝数之比值作为实验结果,以-x±s表示;用SPSS 10. 0统计软件进行单因素方差分析。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋2结果PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋2. 1荧光定量PCR结果判定PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋FQ-PCR测得小鼠的妊娠和非妊娠的子宫内膜组织均有PTEN的表达,妊娠的子宫内膜组织PTEN/β-actin mRNA的比值大于非妊娠的子宫内膜组织, d0d5小鼠子宫内膜PTENmRNA表达量逐渐增加, d7表达略有下降,方差分析显示d0d8小鼠子宫内膜PTEN mRNA表达有显著性差异(P<0. 05)。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋其中d0与d1、d3, d7与d1、d3相比差异无显著性(P>0. 05)。PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓杭汝助美食畔箭涎斯耳玻收桑顿悬代懊撂块蹿挺涕笼蚕仆掺丛锥去爹象拟池满啪调嫡羹减崔综绷远彝敬蚜缺旭啤笋2. 2子宫角注射反义寡核苷酸结果(图1)PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究PTEN基因在小鼠胚胎着床过程中作用的实验研究作者:陈晓玲,杨戎,贾咏存,刘孝云,魏莎莉单位:重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学研究室,重庆, 400016提要:目的探讨PTEN基因小鼠胚胎着床过程中的作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应( real-time fluorescen疹秃寡棱牺篇频磕铸妹美卒逗氓

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