甲流及其检测方法检验科

甲流及其检测方法检验科 顾梦婕 流行性感冒 简称流感 是流感病毒引起的急性呼吸道感染 也是一种传染性强 传播速度快的疾病 流感病毒容易发生变异 常引起流感的流行 是人类面临的主要公共健康问题之一 结构 流感病毒属正粘病毒科 呈球形 直径80 120nm 核酸为单股RNA 病毒颗粒结构由外向内分为三层 外层 两种表面抗原中层 基质蛋白 M 内层 核衣壳 由病毒基因组和核糖蛋白 NP 组成 基质蛋白 构成了病毒的外壳骨架 与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用包膜 是包裹在基质蛋白之外的磷脂双分子层膜 成熟的流感病毒从宿主细胞出芽 将宿主的细胞膜包裹在自己身上之后脱离细胞 去感染下一个目标 包膜中还有两种非常重要的糖蛋白 血凝素和神经氨酸酶 血凝素 HA 与红细胞表面的受体相结合引起凝血 水解后分为轻链和重链两部分 后者可以与宿主细胞膜上的唾液酸受体相结合 前者则可以协助病毒包膜与宿主细胞膜相互融合神经氨酸酶 NA 具有水解唾液酸的活性 当成熟的流感病毒经出芽的方式脱离宿主细胞之后 需要由神经氨酸酶将唾液酸水解 切断病毒与宿主细胞的最后联系 使病毒能顺利从宿主细胞中释放 继而感染下一个宿主细胞 传播途径 空气中的飞沫 人与人之间的接触 被污染物品的接触传播 主要特性 流感病毒经呼吸道吸入后 侵犯纤毛柱状上皮细胞 并在此复制 引起上呼吸道症状 并在上皮细胞变性坏死后排出较多量的病毒 随呼吸道分泌物排出引起传播流行 流感病毒抵抗力较弱 不耐热 室温下传染性很快丧失 但在0 4 能存活数周 70 以下或冻干后能长期存活 病毒对干燥 日光 紫外线以及乙醚 甲醛 乳酸等化学药物也很敏感 流感病毒分类 根据核蛋白抗原不同 分为三类 甲型 A型 最常见 常发生抗原变异 致病性最强 大家熟知的H1N1 H5N1以及H7N9都是这一型的 乙型 A型 也会流行 症状较A轻 丙型 C型 主要以散发病例出现 临床表现 临床表现 单纯型流感高热 体温可达39 40 多伴头痛 全身肌肉关节酸痛 极度乏力 食欲减退等全身症状 常有咽喉痛 干咳 可有鼻塞 流涕 胸骨后不适等 中毒型流感表现为高热 休克 呼吸衰竭 中枢神经系统损害及弥漫性血管内凝血 DIC 等严重症状 病死率高 临床表现 肺炎型流感实质上就是并发了流感病毒性肺炎 多见于老年人 儿童 原有心肺疾患的人群 主要表现为高热持续不退 剧烈咳嗽 咳血痰或脓性痰 呼吸急促 发绀 痰培养无致病细菌生长 可分离出流感病毒 胃肠型流感除发热外 以呕吐 腹痛 腹泻为显著特点 儿童多于成人 并发症 Reye综合征 主要表现为退热后出现恶心 呕吐 继之嗜睡 昏迷 惊厥等神经系统症状 肝大 无黄疸 脑脊液检查正常 心脏损害主要有心肌炎 心包炎 可见肌酸激酶升高 心电图异常 而肌钙蛋白异常少见 多可恢复 神经系统损伤包括脑脊髓炎 横断性脊髓炎 无菌性脑膜炎 局灶性神经功能紊乱等 并发症 肌炎和横纹肌溶解综合征在流感中罕见 主要症状有肌无力 肾衰竭 CK升高 细菌性肺炎 出现高热 剧烈咳嗽 脓性痰 呼吸困难 肺部湿性啰音及肺实变体征 其他病原菌感染所致肺炎包括衣原体 支原体等 对流感患者的肺炎经过常规抗感染治疗无效时 应考虑到真菌感染的可能 检查 1 外周血检测白细胞总数一般不高或降低 淋巴细胞增高 若合并细菌感染 白细胞总数及中性粒细胞上升2 血液生化检查部分病例出现低钾血症 少数病例肌酸激酶 天门冬氨酸氨基转移酶 丙氨酸氨基转移酶 乳酸脱氢酶 肌酐等升高 检查 3 病原学相关检查主要包括病毒分离培养 病毒抗原 核酸和抗体检测 病毒分离为实验室检测的主要方法 病毒的抗原和核酸检测可以用于早期诊断 抗体检测可以用于回顾性调查 但对病例的早期诊断意义不大4 影像学检查部分患者可表现为支气管纹理增多的支气管感染征象 重症患者可出现肺部浸润性病变或胸腔积液 甚至融合成片 病原学相关检查 病毒分离培养 通常采取发病3日内患者的咽拭子 经抗生素处理后接种于鸡胚羊膜腔和尿囊腔中 于33 35 孵育3 4天后 收集羊水和尿囊液进行血凝试验 如血凝试验阳性 再用已知免疫血清进行血凝抑制试验 鉴定型别 若血凝试验阴性 则用鸡胚再盲目传代3次 仍不能出现血凝则判断病毒分离为阴性 病毒抗原检测 胶体金法免疫荧光法 病毒抗原检测 病毒抗原检测 病毒抗原检测 病毒抗原检测 免疫荧光法 将患者鼻咽分泌物脱落细胞涂片 用免疫荧光法可直接检查流感病毒抗原 免疫荧光法是一高度敏感和特异的技术 核酸检测 以RT PCR 最好采用real timeRT PCR 法检测呼吸道标本 咽拭子 鼻拭子 鼻咽或气管抽取物 痰 中的流感病毒核酸 病毒核酸检测的特异性和敏感性最好 且能快速区分病毒类型和亚型 一般能在4 6小时内获得结果 抗体检测 检测流感病毒特异性IgM和IgG抗体水平收集急性期和恢复期双份血清 如恢复期血清特异性抗体较急性期增高 倍以上 即可诊断 由于多数正常人血清含有流感病毒抗体 故单份血清一般不能用作诊断并且血清学检测方法灵敏度不高 不同检测方法比较 病毒分离 敏感性和特异性高 但操作复杂 培养周期长 严重影响临床中对病人的用药指导 抗原检测 阳性结果具有辅助诊断价值 但阴性结果不能排除流感 患者咽拭子样本中的病毒含量较低 未达到阳性检出限度 导致假阴性 核酸检测 灵敏度高 耗费昂贵 需6小时 仅在专业实验室进行 现场应用受限 抗体检测 需恢复期较急性期血清IgG抗体效价4倍或以上增高才有诊断意义 单份血清IgM阳性一般不能作为实验室确诊标准 婴幼儿流感的临床症状常常不典型 可快速进展为急性呼吸窘迫综合征 感染性休克等 严重危害儿童健康 目前快速诊断儿童流感病毒的检测手段存在标本要求高 敏感性低 出报告时间较长等问题 当实验室检测结果未出报告时 临床上通常根据症状 体征以及WBC计数来考虑是否存在甲型流感 易发生漏诊和误诊CRP在流感病毒感染时几乎不升高或升幅不明显 在辅助检查中SAA对早期诊断儿童甲流价值最高 其次为SAA CRP比值 因此SAA和CRP联合检测值得临床广泛应用 淀粉样蛋白A SAA 是一种急性时相蛋白 与CRP相仿 用以评估急性时相反应进程 SAA是个灵敏的参数 它在炎性反应大约8h后开始升高 且超过参考范围上限时间早于CRP 轻微感染 例如 许多病毒感染 SAA升高要比CRP更为常见 因此SAA测定 尤其对 正常 与微小急性时相反应可提供更好的鉴别 SAA 治疗 1 一般对症治疗卧床休息 多饮水 给予流质饮食 适宜营养 补充维生素 保持口鼻清洁 全身症状明显时予抗感染治疗2 治疗原则早期应用抗病毒治疗 避免盲目使用抗菌药物 在发病36小时或48小时内尽早开始抗流感病毒药物治疗 虽然有资料表明发病48小时后使用神经氨酸酶抑制剂亦可以有效 但是大多数研究证明早