高中生物 专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件 新人教版选修1.ppt

专题2 课题2 课前预习 巧设计 名师课堂 一点通 重点突破 创新演练 大冲关 知识清单 案例师说 课堂强化 每课一练 了解实验设计中对照实验的设置方法理解筛选微生物的原理 选择培养基的配制及其对微生物的选择作用 1 对土样的选取和选择培养基的配制2 对分解尿素的细菌的计数 一 菌株筛选1 自然界中目的菌株的筛选 1 依据 根据它对的要求 到相应环境中去寻找 2 实例 pcr技术中用到的耐高温的taq细菌就是从中筛选出来的 生存环境 热泉 2 实验室中目的菌株的筛选人为提供有利于生长的条件 包括营养 温度 ph等 同时其他微生物的生长 3 选择培养基在微生物学中 将允许生长 同时其他种类微生物生长的培养基 称作选择培养基 目的菌株 抑制或阻止 特定种类微生物 抑制 或阻止 二 实验设计及操作1 实验设计 1 土壤取样 取样条件 富含的土壤表层 酸碱度接近且潮湿 取样部位 距地表约cm的土壤层 2 样品稀释 样品的稀释程度直接影响平板上生长的 选用一定稀释范围的样品液进行培养 保证菌落数在之间 便于计数 有机质 中性 3 8 菌落数目 30 300 3 微生物的培养与观察 以细菌为例 将培养基平板置于温室中培养1 2d 每隔24h统计一次数目 最后选取数目时的记录作为结果 4 细菌的计数 当菌落数目稳定时 取同一下的3个平板进行计数 求出 并根据所对应的计算出样品中细菌的数目 30 37 稳定 菌落 稀释度 平均值 稀释倍数 2 操作提示 1 无菌操作 取土样的用具在使用前都需要 应在旁称取土壤 并在火焰附近将土样倒入烧瓶中 塞好棉塞 在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在旁操作 2 培养过程中应设置重复组 同一稀释度下应涂布平板 才能增强实验的说服力与准确性 灭菌 火焰 火焰 3个 3 实验中应设置对照 主要目的是排除任何其他可能原因对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 如空白对照组 观察培养物中是否有污染 设置牛肉膏蛋白胨培养基 观察选择培养基是否具作用等 杂菌 筛选 三 课题延伸对于分离出的分解尿素的细菌还需借助生物化学方法作进一步鉴定 1 原理细菌合成的将尿素分解成nh3 使培养基增强 ph 因此 可通过检测来判断该化学反应是否发生 脲酶 碱性 ph的变化 升高 2 方法在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂 培养某种细菌 若指示剂变红 则ph升高 说明该种菌能 尿素 酚红 分解尿素 1 读教材p21相关内容 归纳并回答下列问题 1 从自然界中 筛选某种微生物时 确定取样环境依据是什么 提示 依据目的菌株对生存环境的要求 到相应的环境中取样 2 分析教材p22左上方侧栏的本课题使用的培养基配方 该培养基对微生物具有选择作用吗 若有 是如何进行选择的 提示 有选择作用 该培养基配方中 尿素是唯一的氮源 只有能够合成脲酶的微生物才能利用尿素 才能在该培养基上生长 其他微生物由于不能利用尿素而无法生长繁殖 2 读教材p22的相关内容 归纳并回答下列问题 1 菌落计数的方法有哪些 提示 活菌计数法 显微镜直接计数法 2 分析通过计数平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有的活菌数目的原因 提示 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 因此通过计数平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有的活菌数目 3 利用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 分析其原因 提示 当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的是一个菌落 4 利用活菌计数法进行实验操作时 常常将同一浓度稀释液需要接种三个平板 分析这样做的道理 提示 该做法是设置重复实验 目的是为了增强实验的说服力和准确性 将同一稀释度下的三个平板 经涂布 培养 计算出菌落平均数 使结果更接近真实值 3 读教材p22 23 三 设置对照 的相关内容 分析教材实例讨论并完成下列问题 1 a同学与其他同学的实验结果相差很大的可能原因有哪些 提示 所取土样不同 培养基被污染或操作失误造成 2 如何设置对照实验 说明你的上述分析的原因 提示 4 读教材p23 25 实验设计 内容 根据你自己的实验操作 分析交流下列问题 1 观察教材p23图2 7 思考在样品稀释时每一次用吸管吸取土壤悬液前 都要吹吸三次后再吸取 这样做有什么道理 提示 每次吹吸三次 使土壤悬液中的菌种分布均匀 保证所吸取样液中的菌种均衡性 减少实验误差 2 如何判断选择培养基是否筛选出菌落 提示 牛肉膏培养基的菌落数目大于选择培养基上的菌落数目 说明选择培养基已筛选出一些菌落 3 怎样根据结果判断样品稀释操作是否成功 提示 若得到了2个或2个以上菌落数目在30 300的平板 则说明稀释操作比较成功 并能够进行菌落的计数 分离土壤中分解尿素的细菌 对培养基的要求是 加尿素 不加尿素 加琼脂糖 不加琼脂糖 加葡萄糖 不加葡萄糖 加硝酸盐 不加硝酸盐a b c d 解析 尿素和硝酸盐都能作为氮源 而培养尿素分解菌的培养基应含有尿素为唯一的氮源的固体平板培养基 因此培养基中应不加硝酸盐 加入尿素和琼脂 葡萄糖作为碳源加入 答案 c 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数 在对应稀释倍数为10的培养基中 得到以下两种统计结果 a同学涂布了一个平板 统计的菌落数为230 b同学涂布了三个平板 统计的菌落数分别为21 212和256 该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果 试回答 1 当 时 培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的 此时统计平板上的菌落数 就能利用 公式推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数为 的平板进行计数 2 a同学确信自己的实验结果与别人不同是因为土壤样品不同 却不能证明自己的培养基是否被污染 你能帮助a同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗 3 b同学的结果正确吗 为什么 解析 a同学只涂布了一个平板 没有设置重复组 因此结果不具有说服力 可以由其他同学用与a同学一样的土样进行实验 如果结果与a同学一致 则证明a同学结果无误 如果结果与a同学不同 则证明a同学存在操作失误或培养基的配制有问题 另一种方案是将a同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是否被污染 b同学的三个平板应无明显差异才能符合计数要求 答案 1 样品的稀释度足够高一个活菌每克样品中的菌株数 c v m30 300 2 可以 由其他同学用与a同