房磊冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用.ppt

冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用 研究生 房磊实验完成人 杜为高峰房磊导师 韩颖研究员 军事医学科学院野战输血研究所 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 结论 1 5 研究内容 2 技术路线 3 实验结果 4 研究背景 生长因子与创伤修复 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 生长因子与创伤修复 基因重组细胞因子药物在美国已经开始批准应用并取得良好的临床效果 基因重组药物的缺陷 1单一生长因子作用有限2贝卡普勒明 becaplermin 效应 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 血小板与生长因子 军事医学科学院野战输血研究所 血小板中的生长因子 生长因子在创伤修复中的作用 更天然更适合 血小板创伤修复作用的原理 研究背景 血小板与创伤修复 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 血小板与创伤修复 血小板创伤修复作用的应用 军事医学科学院野战输血研究所 商品化的prp制备方法 研究背景 血小板与创伤修复 prp技术的优缺点 prp中生长因子的含量是静脉血的几十倍 prp中各种生长因子是天然的 并且比例符合体内生理水平 prp中各种生长因子之间存在相互协同作用 prp 高效 安全 难量化 难储存 prp在22士2 条件下振荡保存仅5d prp中血小板含量因人而异 甚至同一个人在不同时间血小板含量也不同 量足 军事医学科学院野战输血研究所 研究背景 血小板冰冻干燥保存与创伤修复 军事医学科学院野战输血研究所 冰冻干燥保存 在低温和真空环境中除去血小板保存体系中的自由水和部分结合水 得到粉末状固体 可以长时间贮存 需要使用时进行复水即可 目前研究热点 2006 1956 klein等首次尝试用冷冻干燥的形式长期保存血小板 read等用多聚甲醛固定的方法提高血小板在冻干过程中的渗透稳定性 woiker等首次使用海藻糖和白蛋白作为冰冻干燥保护剂 在冻干血小板的研究中取得突破性的进展 哈佛大学医学院的一个研究小组首先报道了冰冻干燥血小板创伤修复作用的研究 目前 这一研究正逐渐兴起 但仍处于实验室水平 国内未见相关报道 研究内容 冰冻干燥血小板的制备及所含生长因子的研究冰冻干燥血小板促进创伤修复作用的研究 细胞实验动物实验 军事医学科学院野战输血研究所 一 冰冻干燥血小板制备及所含生长因子分析 军事医学科学院野战输血研究所 实验结果 军事医学科学院野战输血研究所 冰冻干燥血小板的制备 实验结果 采用本实验室自行研制的小分子糖保护法进行冻干血小板的制备 9080706050403020100 冻干血小板 20 保存0d 冻干血小板 20 保存30d 冻干血小板 20 保存90d 冻干血小板常温保存20d 新鲜血小板 与各冻干组比较ap 0 05 表1血小板提取液总蛋白含量 mg ml means sd 图1不同保存条件冻干血小板提取液总蛋白含量的测定结果 实验结果 与各冻干组比较ap 0 05 与各冻干组比较bp 0 05 表2不同保存时间冻干血小板生长因子浓度 n 5 means sd 实验结果 图2血小板中pdgf bb和tgf 1 二 冰冻干燥血小板促创伤修复作用的研究 军事医学科学院野战输血研究所 实验结果 图3原代培养的人皮肤成纤维细胞 100 军事医学科学院野战输血研究所 1 冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 成纤维细胞是创伤愈合过程中最重要的修复细胞 参与了创伤修复的全过程 其数量及功能变化对创伤愈合有着极大的影响 实验结果 1 冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 军事医学科学院野战输血研究所 潜伏期 对数生长期 平台期 图4人皮肤成纤维细胞形态观察 100 图5人皮肤成纤维细胞生长曲线 实验结果 军事医学科学院野战输血研究所 1 冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 图6mtt法测定人皮肤成纤维细胞的增殖率 与rhpdgf bb治疗组比较p 0 05 实验结果 1 冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 军事医学科学院野战输血研究所 血小板浓度数量级为106 ml用m200 2 5 fcs为稀释液 第一天和第三天坡度较陡 说明高浓度血小板生长因子对细胞增殖具有抑制作用 第五天坡度较缓和 说明较高浓度组的剩余生长因子还在起作用 图7冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析 军事医学科学院野战输血研究所 2 冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究 图8大鼠全皮层切除创面愈合过程 a未治疗组brhpdgf bb治疗组c新鲜血小板治疗组d冻干血小板治疗组 实验结果 大鼠的脊柱两侧 建立两个直4cm 12 56cm2 的圆形创口 皮层全部切除 深至筋膜 军事医学科学院野战输血研究所 图9不同治疗组全层皮肤缺损创口再上皮化率 2 冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究 ab ab ab ab ab ab ab ab a 与未治疗组比较p 0 05b 与rhpdgf bb治疗组比较p 0 05 实验结果 军事医学科学院野战输血研究所 a未治疗组组brhpdgf bb治疗组c新鲜血小板治疗组d冻干血小板治疗组 图10创伤后不同时间愈合创口he染色结果 100 2 冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究 实验结果 军事医学科学院野战输血研究所 a未治疗组brhpdgf bb治疗组c新鲜血小板治疗组d冻干血小板治疗组 图11创伤后不同时间愈合创口免疫组化结果 100 2 冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究 实验结果 2 血小板促进大鼠慢性难愈合创口修复的研究 大鼠的脊柱两侧 建立两个直2cm的圆形创口 皮层全部切除 深至筋膜 军事医学科学院野战输血研究所 图12大鼠创口修复图示 实验结论 军事医学科学院野战输血研究所 1 生长因子含量 冰冻干燥血小板 新鲜血小板且二者促成纤维细胞增殖和伤口修复的能力相近2 冰冻干燥血小板中生长因子对皮肤创伤愈合成纤维细胞的促增殖作用与单一生长因子rhpdgf bb一样具有剂量依赖性 3 相同浓度条件下 血小板中多种生长因子的协同作