CN103494869A一种石淋通片的制备方法及应用

CN103494869A一种石淋通片的制备方法及应用 (10)申请公布号103494869A (43)申请公布日xx.01.08103494869A (21)申请号xx10470470.X (22)申请日xx.10.10A61K36/48(xx.01)A61K9/20(xx.01)A61P13/04(xx.01)A61P11/00(xx.01)A61P35/00(xx.01) (71)申请人南京正亮医药科技有限公司地址211200江苏省南京市溧水经济开发区柘宁东路369号 (72)发明人不公告发明人 (54)发明名称一种石淋通片的制备方法及应用 (57)摘要本发明提供一种石淋通片的制备方法，由广金钱草1000克作为原料药制成，采用超临界萃取萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用。 (51)Int.Cl.权利要求书1页说明书4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书4页 (10)申请公布号103494869A103494869A1/1页21.一种石淋通片的制备方法，由广金钱草1000克作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成取广金钱草1000克，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50，CO2流量1-3m1/g生药min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 2.根据权利要求1所述一种石淋通片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。 3.根据权利要求1所述一种石淋通片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40，CO2流量2ml/g生药min，萃取时间160min。 4.根据权利要求1所述一种石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于石淋通片由广金钱草1000克作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成取广金钱草1000克，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50，CO2流量1-3m1/g生药min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 5.根据权利要求4所述一种石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于石淋通片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。 6.根据权利要求4所述一种石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，其特征在于石淋通片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40，CO2流量2ml/g生药min，萃取时间160min。 权利要求书103494869A21/4页3一种石淋通片的制备方法及应用技术领域0001本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种石淋通片的制备方法及应用。 背景技术0002石淋通片记载于药典，处方和工艺为取广金钱草1000克，加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩，加5倍量85乙醇，充分搅拌，静置24小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，干燥，加辅料适量，制成颗粒，干燥，压制成片，或包糖衣，即得。 能清除湿热，利尿排石。 用于湿热蕴结所致的淋沥涩痛；尿路结石，肾盂肾炎有上述证候者。 0003现有技术中，尚未有石淋通片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。 发明内容0004发明目的为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种石淋通片的制备方法。 0005本发明的另一个目的在于提供一种石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用。 0006技术方案本发明的目的是通过如下的方案实现的0007一种石淋通片的制备方法，由广金钱草1000克作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成取广金钱草1000克，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50，CO2流量1-3m1/g生药min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 0008上述一种石淋通片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。 0009上述一种石淋通片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40，CO2流量2ml/g生药min，萃取时间160min。 0010上述一种石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，石淋通片由广金钱草1000克作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成取广金钱草1000克，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50，CO2流量1-3m1/g生药min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 0011上述石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，石淋通片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。 0012上述石淋通片在制备抑制人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖药物中的应用，石淋通片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40，CO2流量2ml/g生药min，萃取时间160min。 说明书103494869A32/4页40013现有技术中，石淋通片每片0.5g，每次4片，一日3次，采用本发明制备成的石淋通片每片0.5g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。 具体实施方式0014以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 0015实施例10016取广金钱草1000克加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30，CO2流量1m1/g生药min，萃取时间150min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 0017实施例20018取广金钱草1000克加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50，CO2流量3m1/g生药min，萃取时间180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 0019实施例30020取广金钱草1000克加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40，CO2流量2m1/g生药min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。 0021实施例4石淋通片抑制SPC-A-1细胞增殖的实验研究资料00221实验材料00231.1实验用细胞株0024人肺腺癌SPC-A-1细胞，南京正亮医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。 00251.2实验药物0026研究药物本发明石淋通片按实施例3方法制备。 0027药液储液称取100mg石淋通片，溶于5ml无水乙醇中，0.2m滤器过滤，500ldoff管分装，-20存储，同时0.2m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。 00281.3实验试剂0029DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号xx/04）；EDTA（AMRESCO公司批号xx/10）；Penicillin GSodium Salt（AMRESCO公司批号xx242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号xx382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号080310182）；MTT(Biosharp批号0793);PBS（实验室自配）；00301.4实验器材0031莱卡倒置显微镜（德国Leica型号DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号SPECTRA MAX190）；CO2培养箱（FORMA型号3111）；超净台（苏净集团安泰公说明书103494869A43/4页5司制造型号SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号xx）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号KA-1000）；0.2m滤器（MILLIPORE型号SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。 00322实验方法00331）SPC-A-1细胞用DMEM+10%FBS于37、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3104个/ml。 00342）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180l，培养板放入细胞培养箱中（37，5%CO2）常规培养。 00353）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入石淋通片溶液，继续培养24h。 00364）24h后加入20l MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。 00375）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200l二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。 在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。 00386）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。 00397）结果以药物对细胞的抑制率表示0040细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值100%。 实验重复3次。 00413统计处理0042采用Microsoft Excelxx软件中的相关分析和Student t检验，数据以meanS.D.表示。 00434实验结果0044MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对SP