CN104488703A一种金叶复叶槭的组培快繁方法

CN104488703A一种金叶复叶槭的组培快繁方法 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号xx10684843.8 (22)申请日xx.11.25A01H4/00(xx.01) (71)申请人巴中七彩林业科技有限公司地址636007四川省巴中市巴州区巴州镇江北段家街3-2号 (72)发明人沈香兰马建华王小辉朱晓菲马良良杨小霞 (74)专利代理机构成都金英专利代理事务所(普通合伙)51218代理人袁英 (54)发明名称一种金叶复叶槭的组培快繁方法 (57)摘要本发明公开了一种金叶复叶槭的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。 它包括外植体灭菌，启动培养，初代培养，继代培养，移栽的步骤。 本发明中只使用一种培养基1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，同一培养基上可以同时进行增殖和生根培养，培养流程简便，操作简易，具有繁殖系数高，繁殖周期短，不需炼苗，成活率高的特点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图2页 (10)申请公布号104488703A (43)申请公布日xx.04.08104488703A1/1页21.一种金叶复叶槭的组培快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成23cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌3060s，升汞灭菌58min，用无菌水冲洗46次； （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养23周，腋芽伸长24cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养23周，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养34周后，植株生长67cm，生根数为212根，根长35cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数36； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，将其茎段切割成36段带芽茎段，接种到继代培养基中培养23周，得到金叶复叶槭无菌苗的完整植株； （5）移栽洗掉生根强壮的金叶复叶槭无菌苗上的培养基，直接移栽到温室大棚苗床上，控制大棚内温度为2030。 2.根据权利要求1所述的一种金叶复叶槭的组培快繁方法，其特征在于，步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中所述的培养基为1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，pH5.86.3。 3.根据权利要求1所述的一种金叶复叶槭的组培快繁方法，其特征在于，步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中所述的培养室内条件为光照强度2600LX3000LX，光照时间1418h，温度2226。 4.根据权利要求1所述的一种金叶复叶槭的组培快繁方法，其特征在于，所述的移栽过程中移栽基质为珍珠岩和腐殖质混合，两者重量比为1:1.52.5。 权利要求书104488703A21/5页3一种金叶复叶槭的组培快繁方法技术领域0001本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种组培方法，具体涉及一种金叶复叶槭的组培快繁方法。 背景技术0002金叶复叶槭（Acer negundoAurea）为槭树科槭树属植物。 金叶复叶槭为落叶高大乔木，是复叶槭的栽培变种，从欧洲引进。 金叶复叶槭羽状复叶很大，叶色柔和，春季呈金黄色；叶片夏季不焦边；抗寒能力强，能耐40度至45度低温；具有较广的适生范围，在我国东北沈阳地区、江浙、华南地区均可种植，喜透气性良好的土壤，孤植群植均可；具有旺盛的生长势和萌芽力，年生长量可达两三米，且病虫害少；绿化过程中还可修剪，绿篱美化环境。 0003但金叶复叶槭自然繁殖率低，多采用扦插繁殖。 期刊农村科技xx年12期第55页金叶复叶槭嫁接繁殖技术中提供了金叶复叶槭的嫁接繁殖技术，该技术受到季节限制，且后期管理流程繁琐，扦插苗成活率低，难以规模化生产。 因此可以采用组培快繁技术，在短期内获得大量种苗。 0004目前，关于金叶复叶槭的组培技术已经有少量报道，期刊河南农业科学xx年07期中金叶复叶槭组织培养研究主要研究了不同浓度植物生长调节物质对金叶复叶槭组培苗生长的影响，确定了培养基WPM+IBA0.08mg/L，增殖系数为3.11，生根率达100%，成活率90%。 但对于金叶复叶槭组培技术的研究都不够详细，并且存在组培流程较复杂等问题。 发明内容0005本发明利用组织培养技术，获得了金叶复叶槭，繁殖系数在36，组培流程简便，省时省力，解决了现有技术组培流程复杂的问题，提供了一种金叶复叶槭的组培快繁方法，为金叶复叶槭工厂化育苗提供了技术支持。 0006本发明首先利用植物组织培养技术获得金叶复叶槭无菌组培苗，再通过切割茎段，直接诱导茎段生根，同时腋芽萌发增殖，进行繁殖，壮苗，生根。 0007本发明的目的通过以下技术方案实现一种金叶复叶槭的组培快繁方法，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成23cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌3060s，升汞灭菌58min，用无菌水冲洗46次； （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养23周，腋芽伸长24cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养23周，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养34周后，植株生长67cm，生根数为212根，根说明书104488703A32/5页4长35cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数36； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，将其茎段切割成36段带芽茎段，接种到继代培养基中，培养23周，得到金叶复叶槭无菌苗的完整植株； （5）移栽洗掉生根强壮的金叶复叶槭无菌苗上的培养基，直接移栽到温室大棚苗床上，控制大棚内温度为2030。 0008步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中所述的培养基为1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，pH5.86.3。 0009步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中所述的培养室内条件为光照强度2600LX3000LX，光照时间1418h，温度2226。 0010所述的移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖质混合，两者重量比为1:1.52.5；温室大棚里用市售的遮阳网遮光降温保湿。 0011所述的移栽过程包括每天早晚叶面喷水，培养35周，见到新叶开始生长，表明移栽的金叶复叶槭成活。 0012本发明具有以下有益效果 （1）本发明中一株健壮无菌组培苗可以切割成36段带根茎段，繁殖系数高，带根茎段23周后就可以长成完整植株，繁殖周期较短，是金叶复叶槭组培快繁的一种有效途径。 0013 （2）本发明中使用的启动培养基、初代培养基和继代培养为同一种培养基，即本发明中仅需一种培养基，在同一培养基上可以同时进行增殖和生根培养，培养流程简便，操作简易，省时省力，能够较容易的获得金叶复叶槭无菌苗。 0014 （3）本发明中生根后的金叶复叶槭无菌苗，生长健壮，不需要特殊炼苗，就可以直接移栽，缩短了获得金叶复叶槭的时间。 0015 （4）本发明中得到的金叶复叶槭无菌苗直接移栽到温室大棚中，成活率高，可达100%。 附图说明0016图1为本发明所述的金叶复叶槭启动培养中腋芽萌发；图2为本发明所述的金叶复叶槭初代培养中金叶复叶槭无菌组培苗；图3为本发明所述的金叶复叶槭继代培养情况，其中,a初期，b后期，c:生根培养，d:根系；图4为本发明所述的金叶复叶槭移栽成活植株。 具体实施方式0017下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。 0018实施例1一种金叶复叶槭的组培快繁方法，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌30s，升汞灭菌5min，用无菌水冲洗4次； （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养2周，腋芽说明书104488703A43/5页5伸长2cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养3周，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养3周后，植株生长6cm，并且生根，根系发达，生根数为2根，根长3cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数为3； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，用节段法，将其茎段切割成3段带芽茎段，接种到继代培养基中，进行继代，同时进行生根培养，培养2周，得到金叶复叶槭无菌苗， （5）移栽洗掉生根强壮的金叶复叶槭无菌苗上的培养基，直接移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内温度为20，其中，移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖质混合，两者重量比为1:1.5。 0019所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养基均为1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，pH5.8。 0020所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养室内条件均为光照强度2600LX，光照时间18h，温度22。 0021所述的移栽过程中包括每天早晚叶面喷水，培养3周，见到新叶开始生长，表明移栽的金叶复叶槭成活，再过2周，调查金叶复叶槭的成活率，成活率为100%。 0022实施例2一种金叶复叶槭的组培快繁方法，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成3cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌60s，升汞灭菌8min，用无菌水冲洗6次； （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养3周，腋芽伸长4cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养2周，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养4周后，植株生长7cm，并且生根，根系发达，生根数为12根，根长5cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数为6； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，用节段法，将其茎段切割成6段带芽茎段，接种到继代培养基中，进行继代，同时进行生根培养，培养3周，得到金叶复叶槭无菌苗； （5）移栽洗掉生根强壮的金叶复叶槭无菌苗上的培养基，直接移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内温度为30，其中，移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖质混合，两者重量比为1:2.5。 0023所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养基均为1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，pH6.3。 0024所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养室内条件均为光照强度3000LX，光照时间14h，温度26。 0025所述的移栽过程中包括每天早晚叶面喷水，培养5周，见到新叶开始生长，表明移栽的金叶复叶槭成活，再过2周，调查金叶复叶槭的成活率，成活率为100%。 0026实施例3一种金叶复叶槭的组培快繁方法，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2.3cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌40s，升汞灭菌6min，用无菌水冲洗5次；说明书104488703A54/5页6 （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养16天，腋芽伸长2.8cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养16天，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养23天后，植株生长6.3cm，并且生根，根系发达，生根数为6根，根长3.5cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数为4； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，用节段法，将其茎段切割成4段带芽茎段，接种到继代培养基中，进行继代，同时进行生根培养，培养17天，得到金叶复叶槭无菌苗； （5）移栽洗掉生根强壮的金叶复叶槭无菌苗上的培养基，直接移栽到用市售的遮阳网遮光降温保湿的温室大棚的苗床上，控制大棚内温度为24，其中，移栽过程中所用基质为珍珠岩和腐殖质混合，两者重量比为1:1.8。 0027所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养基均为1/2DKW0.1mg/LNAA0.05mg/LIAA蔗糖30g/L琼脂5g/L，pH6.0。 0028所述的步骤 （2）、步骤 （3）和步骤 （4）中培养室内条件均为光照强度2700LX，光照时间16h，温度24。 0029所述的移栽过程中包括每天早晚叶面喷水，培养4周，见到新叶开始生长，表明移栽的金叶复叶槭成活，再过2周，调查金叶复叶槭的成活率，成活率为99.5%。 0030实施例4一种金叶复叶槭的组培快繁方法，它包括以下步骤 （1）外植体灭菌采集无病虫害的金叶复叶槭幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2.7cm带芽茎段，在超净工作台上，用酒精灭菌50s，升汞灭菌7min，用无菌水冲洗5次； （2）启动培养将灭菌后的带芽茎段接种到启动培养基中，在培养室中培养19天，腋芽伸长3.5cm； （3）初代培养将腋芽切下，接种到初代培养基中，在培养室中培养19天，得到健壮的生根金叶复叶槭无菌组培苗，培养26天后，植株生长6.7cm，并且生根，根系发达，生根数为9根，根长4.2cm，在叶腋处重新生长出腋芽，增殖系数为5； （4）继代培养以健壮的金叶复叶槭无菌组培苗为母本，用节段法，将其茎段切割成5段带芽茎段，接种到继代培养基中，