低温诱导染色体加倍.doc

低温诱导植物染色体的加倍实验设计专 业： 班 级： 姓 名： 学 号： 2013年6月23日低温诱导植物染色体的加倍实验设计一、选题背景利用一些诱发因素可以人工诱导植物产生多倍体，包括物理因素，如温度的剧变，射线处理，嫁接和切断等，还有化学因素，如植物碱，植物生长激素，秋水仙素、茶嵌戊烷、异生长素、富民农等等。由于一些化学诱导物质有剧毒，且价格昂贵，比如：秋水仙素，所以我们将探究低温对染色体数目的变化。二、实验原理低温和秋水仙素一样，低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，导致分裂后期染色体不能移向两极，细胞加大而不分裂，着丝点分裂后的染色体仍在一个细胞中，故细胞中的染色体数目加倍。如果用低温处理根尖，则在根尖分生区内可以检测到大量染色体加倍的细胞，如：处理植物幼苗的芽，则可以得到染色体加倍的植株。 三、实验材料、试剂及仪器1、材料：大蒜（2n=16）。（之所以选用大蒜而非洋葱是因为在做观察有丝分裂实验时发现大蒜的效果比洋葱好。） 2、试剂及其配制方法：（1）卡诺氏固定液：取无水酒精和冰醋酸，按体积比3：1的比例混合：（2）盐酸酒精解离液：取 95酒精和15盐酸，按体积比1：1的比例混合。（3）质量浓度为10mgmL的龙胆紫溶液：将100mL的体积分数为45的（4）质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液：醋酸溶液煮沸，加入1g龙胆紫后，搅匀再煮5min，待冷却后过滤，备用3、主要仪器：冰箱、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子四、实验步骤（一）根尖的培养实验课前的35d，取蒜瓣，放在盛有少量水的培养皿中（二）低温诱导当根长到lcm时，放入冰箱内4低温下培养，处理36h。（三)固定根尖剪取以上处理的根尖，每个根尖为051cm，分别放人卡诺氏固定液中固定3060min，然后用体积分数95酒精洗两次（四）制作装片及观察（1）解离：取固定好的根尖，用盐酸酒精解离液35min，使组织细胞相互分离、酥软为止。（2）漂洗：待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的培养皿中漂洗约10min去酸，防止干扰碱性染料染色。（3）染色：用质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液对根尖染色35min。（4）制片：用镊子将根尖取出，放在载玻片上，加一滴清水，用镊子将根尖弄碎，加盖玻片，用拇指转压载玻片，使细胞分散开来。（五）观察 先用低倍镜寻找染色体形态较好的分裂相，再换上高倍镜并调节细准焦螺旋和反光镜，使物像清晰，仔细观察，辨认哪些细胞发生染色体数目变化五、知识拓展1、固定是借助于物理方法或化学药物的作用，迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能保持生活时的完整和真实状态。 2、细胞中的染色体数目加倍，可以是增加一倍（变为32），也可能是增加四倍（变为64）。 3、视野中大量细胞为有丝分裂间期的细胞，其特点为核膜、核仁明显，核质呈均匀状态。移动载玻片，先低倍镜后高倍镜，可观察到有丝分裂各个时期的细胞，尤其是中期的细胞，染色体的形态和数目清晰可见。 4、改良苯酚品红溶液和醋酸洋红溶液都可以使染色体着色实验中几种溶液的作用 （1）卡诺氏液：固定细胞的形态。 （2）改良苯酚品红染液：细胞核染色，便于观察染色体的