AVP-5060-01-1.0己酸羟孕酮残留溶剂方法验证方案.doc

No AVP 5060 01 1 0 Effective date 2011 04 17QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 1 of 25 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案 姓名姓名 Name职务职务 Title签名签名 Signature日期日期 Date 起草起草 Prepared byQC 审核审核 Checked by QC 经理经理 主管主管 QC Manager Derector 审核审核 Checked by QA 经理经理 QA Manager 批准批准 Approved by QU 总监总监 QU Derector No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 2 of 25 2 目 录 1 目的 3 2 范围 3 3 验证人员及职责 4 3 验证小组及培训 4 4 仪器和试剂 4 6 试验方法及依据 5 7 验证项目与接受标准 7 8 验证内容 8 1 专属性 8 8 2 系统适应性 9 8 3 检测限及定量限 9 8 4 线性和范围 10 8 5 准确度 11 8 6 精密度 13 8 7 溶液稳定性 14 8 8 耐用性 14 8 9 样品检测 14 9 验证评论及结论 15 10 偏差控制 15 11 变更控制 15 12 验证结论及批准 15 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 3 of 25 3 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证方案 1 目的 目的 通过对己酸羟孕酮中残留溶剂甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 分析方法的验证 进一步确认此分析方法的适用性 确保分析结果 可靠 准确 能够更好地控制产品质量 2 范围 范围 本方法适用于本公司生产的己酸羟孕酮残留溶剂甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶的检测 3 验证验证人员人员及职责及职责 3 1 验证小组组长 3 2 证小组成员 部门姓名职务 职称 QA浦娴QA QC李学昌QC 经理 QC徐冠华化验员 3 3 验证人员职责 部门姓名职务 职称 QU蔡忠祥质量总监 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 4 of 25 4 3 3 1 组长职责 验证工作的总体推进 验证方案 验证报告的 批准 对验证过程中出现的问题进行控制与追踪 对产生偏差的批 准与处理 3 3 2 组员 负责验证计划的编制 负责验证方案 验证报告的 起草 审核 其他验证文件的准备 参与验证人员的安排 培训 验证的执行 对结果的确认 产生偏差的调查及采取的相关措施 等 4 验证小组及培训验证小组及培训 4 1验证小组验证小组 小组成员部门职位主要职责 徐冠华QC化验员验证方案起草 完成验证及报告 李学昌QCQC 经理验证方案培训 方案 记录及报 告审核 浦娴QAQA验证方案 报告审核 蔡钟祥QU质量总监验证方案及报告的批准 4 2培训培训 验证前由方案编写者对所有参与验证的人员培训本验证方案相 关内容 所有参与验证人员由该验证项目负责人进行培训 培 训检查记录应附在最终的验证方案中 相关文件培训 文件编号培训人 己酸羟孕酮残留溶剂分析方法验证 方案 AVP 5260 01 1 0 所有参与验证人 员 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 5 of 25 5 分析方法验证管理规程TF 2 0021 1 0所有参与验证人 员 5 检验所需设备 仪器 试剂及规格要求 检验所需设备 仪器 试剂及规格要求 5 1 设备 仪器及器材设备 仪器及器材 仪器名称 检测器 检验设备 仪器必须经确认并校验合格并且在有效期内 5 2 试剂 试剂 试剂参数见表 1 表表 1 试剂参数表试剂参数表 溶剂名称类别 限度标准 批号生产厂家 无水甲醇2 类0 3 无水乙醇3 类0 5 二氯甲烷2 类0 5 吡啶2 类0 02 N N 二 甲基甲酰 溶剂 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 6 of 25 6 胺 5 3 样品样品 样品批号 6 试验方法及依据 试验方法及依据 6 1 试验依据试验依据 照中国药典 2010 年版附录 P 残留溶剂测定法 ICHQ2A ICHQ2B ICHQ3 USP30 1225 6 2 色谱条件色谱条件 分离检测系统 色谱柱 DB 624 30m 0 530mm 3 00 m 温度 40 保持 5min 以 25 min 升温到 200 保持 5min 检测器类型 FID 检测器温度 250 进样口温度 200 载气 氮气 燃烧气 氢气 助燃气 空气 载气流速 5ml min 分流比 1 1 进样系统 顶空瓶温度 80 定量环温度 90 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 7 of 25 7 传输线温度 100 平衡时间 30 min 加压时间 0 5 min 进样时间 1 min 进样体积 1ml 6 3 溶液配制溶液配制 6 3 1 空白溶液 取 2ml DMF 于 20ml 顶空瓶中即得 6 3 2 对照品溶液的制备 分别精密称取溶剂对照品适量 用 DMF 定量稀释成每 1ml 含 甲醇 300 g 乙醇 500 g 二氯甲烷 60 g 吡啶 20 g 的溶液 作 为对照品溶液 6 3 3 样品溶液 取本品约 1g 精密称定 置 10ml 量瓶中 加 DMF 使溶解并稀 释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 6 3 4 测定法 精密量取空白溶液 供试品溶液及对照品溶液各 2ml 分别置 顶空瓶中 按程序进样 记录色谱图 按外标法以峰面积计算供试 品中各残留溶剂的含量 6 3 5 限度要求 甲醇不得过 0 3 乙醇不得过 0 5 二氯甲烷不得过 0 06 吡啶不得过 0 02 6 3 6 程序 进样程序如下 空白溶液 1 针 对照溶液 5 针 样品溶液 1 1 针 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 8 of 25 8 样品溶液 2 1 针 对照溶液 1 针 6 3 7 计算 按照下面公式计算 w AS AR CR 式中 w 样品中各溶剂含量 ppm AS 样品溶液中各溶剂峰面积 AR 对照溶液中各溶剂 5 针峰面积平均值 CR 对照溶液中相当样品中各溶剂含量 ppm 7 方法验证的项目和可接受标准 方法验证的项目和可接受标准 表表 2 验证项目及可接受标准表验证项目及可接受标准表 验证项目可接受标准 专属性 1 溶剂 DMF 进样 2 针 确定对检测没有干扰 2 各溶剂峰之间分离度不得小于 1 5 3 加标混合溶液各峰保留时间及峰面积正常 系统适用性峰面积重复性 对照溶液中己酸羟孕酮各残留溶剂 峰面积标准偏差不得超过 10 0 检测限各溶剂峰信噪比约为 2 1 或 3 1 定量限 各溶剂峰信噪比约 10 时的浓度 在此浓度下 各溶 剂峰面积 n 5 的相对标准偏差 RSD 10 0 线性 在线性范围内 要求各溶剂浓度与峰面积成线性关 系 R 0 99 范围定量限 限度的 150 准确度 回收率试验 三个水平 3 份 分别在 5 100 200 处 三个浓度水平回收率在 90 110 范围内 重复性 同一个样品 取 6 份样品配制样品溶液 并检测 6 次残留量 RSD 10 0 精密 度中间精密 度 不同分析人员不同时间在同一分析仪器上重复上述 操作 6 次残留量 10 0 与另一分析人员所测 6 份数据进行比较 所得 12 个残留量 RSD 10 0 溶液稳定性 溶液稳定性 放置 0 2 4 6 8 12 24 小时检 测 各溶剂峰面积 RSD 10 0 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 9 of 25 9 8 验证内容 验证内容 8 1专属性专属性 8 1 1 空白溶液 8 1 1 1溶液配制 即溶剂 HPLC 级的 DMF 吸取 2ml 于顶空瓶中 置于顶 空进样器中 8 1 1 2程序 进空白溶液 2 针 按本方法测试 记录色谱图 8 1 1 3接收标准 空白溶液无干扰 无异常峰 8 1 2相关溶剂定位 8 1 2 1溶液配制 精密量取甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶单一对照储备液各 1mL 分别置 10mL 量瓶中 加 DMF 稀释至刻度 摇匀 作为单一对照品溶液 8 1 2 2程序 取以上五种溶剂的单一对照品溶液各 2 针 按本方法测试 记录色谱图 8 1 2 3接收标准 以 DMF 为溶剂时 各溶剂都能正常出峰 与 DMF 能分 离 结果见表 3 相关溶剂定位结果表 表表 3 相关溶剂定位结果表相关溶剂定位结果表 溶剂名称甲醇乙醇二氯甲 烷 吡啶DMF 保留时间 min 1 耐用性 色谱条件 改变顶空平衡温度 流速 初始柱温 检 测器温度 进样口温度 样品测定样品中各溶剂含量小于限度要求 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 10 of 25 10 2 8 1 3混合溶液 8 1 3 1溶液配制 分别精密量取甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶对照品储备液 各 5ml 置同一 50ml 量瓶中 加 DMF 溶解 稀释至刻度 摇匀 作为对照品混合溶液 8 1 3 2程序 进混合溶液 2 针 按本方法测试 记录色谱图 8 1 3 3接收标准 各溶剂分离度不得小于 1 5 试验结果见表 4 各溶剂混合 定位表 表表 4 各溶剂混合定位表各溶剂混合定位表 保留时间 min 各分离度 1 5 序号溶剂名称 1212 1甲醇 2乙醇 3二氯甲烷 5吡啶 8 1 4加标溶液 8 1 4 1溶液配制 样品溶液 加标溶液 8 1 4 2程序 分别进空白溶液 样品溶液 加标溶液各一针 8 1 4 3接收标准 加标后各溶剂均能正常出峰 保留时间及峰面积正常 试 验结果见表 5 各溶剂加标定位表 表表 5 各溶剂加标定位表各溶剂加标定位表 溶剂名称甲醇乙醇二氯甲烷 吡啶 DMF 保留时间 min No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 11 of 25 11 8 28 2系统适用性试验系统适用性试验 8 2 1 溶液配制 对照溶液配制见 6 2 2 8 2 2 程序 连续进对照溶液 5 针 记录色谱图 8 2 3 接收标准 重复性进样各溶剂峰面积 RSD n 5 不得超过 10 0 试验结 果见表 6 系统适用性试验结果表 表表 6 系统适用性试验结果表系统适用性试验结果表 峰面积 溶剂名 称 12345平均 值 RSD 10 0 甲醇 乙醇 二氯甲 烷 吡啶 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 12 of 25 12 8 38 3检测限和定量限检测限和定量限 8 3 1 检测限 8 3 1 1 溶液配制 将对照溶液逐步稀释成各浓度溶液 8 3 1 2 程序 将各浓度稀释溶液各进样一针 记录色谱图 并计算出各溶剂 的信噪比 8 3 1 3 接受标准 各溶剂信噪比约为 2 3 时为检测限 8 3 2 定量限定量限 8 3 2 1 溶液配制 将对照溶液逐步稀释成各浓度溶液 8 3 2 2 程序 将各浓度稀释溶液各进样一针 记录色谱图 并计算出各溶剂 的信噪比 8 3 2 3 接受标准 各溶剂信噪比约为 10 时为定量限 试验结果见表 7 各溶剂检测限 定量限试验结果表 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 13 of 25 13 表表 7 各溶剂检测限 定量限试验结果表各溶剂检测限 定量限试验结果表 检测限定量限 溶剂名称 mg ml mg ml 甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶 8 48 4线性和范围线性和范围 8 4 1溶液配制 储备液的配制 分别精密甲醇 乙醇 二氯甲烷 吡啶各 0 75g 1 25g 0 15g 0 050g 于 50ml 容量瓶中 作为储备液 线性溶液配制 线性溶液 L1 取储备液 20ml 于 100ml 容量瓶中 用 DMF 稀释至刻度 线性溶液 L2 取储备液 10ml 于 100ml 容量瓶中 用 DMF 稀释至刻度 线性溶液 L3 取储备液 5ml 于 100ml 容量瓶中 用 DMF 稀释至刻度 线性溶液 L4 取储备液 2ml 于 100ml 容量瓶中 用 DMF 稀释至刻度 线性溶液 L5 取储备液 1ml 于 100ml 容量瓶中 用 DMF 稀释至刻度 线性溶液 L6 取储备液 0 5ml 于 100ml 容量瓶中 用 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 14 of 25 14 DMF 稀释至刻度 线性溶液各浓度如下表 表表 8 线性溶液浓度表线性溶液浓度表 溶剂 L1 g mL L2 g mL L3 g mL L4 g mL L5 g mL L6 g mL 甲醇3000150075030015075 乙醇500025001250500250125 二氯甲 烷 6003001506030 15 吡啶2001005020105 表表 9 甲醇线性试验结果表甲醇线性试验结果表 浓度 ug ml 30001500750300150 75 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 表表 10 乙醇线性试验结果表乙醇线性试验结果表 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 15 of 25 15 浓度 ug ml 500025001250500250 125 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 表表 11 二氯甲烷线性试验结果表二氯甲烷线性试验结果表 浓度 ug ml 6003001506030 15 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 16 of 25 16 表表 12 吡啶线性试验结果表吡啶线性试验结果表 浓度 ug ml 200100502010 5 峰面积 1 峰面积 2 平均峰面 积 相关系数 r 线性方程 8 4 2程序 取对照品溶液 2ml 与顶空瓶中进行系统适用性试验 连续进 5 针 其他线性溶液 L1 L6 各 2ml 于顶空瓶中各进 2 针 记录 色谱图 以线性溶液浓度作为纵坐标 各溶剂峰面积作为横坐 标做曲线 进行线性回归 并求回归方程 计算相关系数 8 4 38 4 3接收标准 相关系数 r 不得低于 0 99 8 58 5准确度 回收率 准确度 回收率 8 5 1 溶液配制 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 17 of 25 17 空白溶液 见 6 3 1 对照溶液 见 6 3 2 样品溶液 取一批己酸羟孕酮样品 1 0g 于 20ml 顶空瓶中 加 DMF2ml 溶解 加标溶液 100 水平的加标溶液 准确称量同一批次的己酸羟孕酮 1 0g 于 20ml 顶空瓶中 用 8 4 1 中线性溶液 L2 溶解并稀释至 2ml 平行配制 3 份 5 水平的加标溶液 准确称量同一批次的己酸羟孕酮 1 0g 于 20ml 顶空瓶中 用 8 4 1 中线性溶液 L6 溶解并稀释至 2ml 平行配制 3 份 200 水平的加标溶液 准确称量同一批次的己酸羟孕酮 1 0g 于 20ml 顶空瓶中 用 8 4 1 中线性溶液 L1 溶解并稀释至 2ml 平行配制 3 份 8 5 2 程序 按照本方法 检测一批样品及 9 批次的加标样品中各溶剂残留 并计算各个浓度水平的回收率 8 5 3 接收标准 回收率在 90 0 110 0 表表 1313 回收率试验结果表回收率试验结果表 溶剂名称甲醇乙醇二氯甲烷吡啶 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 18 of 25 18 5 100 加入量 mg 200 5 1 5 2 5 3 100 1 100 2 100 3 200 1 200 2 测得值 mg 200 3 5 1 5 2 5 3 100 1 100 2 100 3 200 1 200 2 回收率 200 3 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 19 of 25 19 平均回收率 回收率 RSD 8 68 6精密度精密度 8 6 1 重复性重复性 8 6 1 1 溶液配制 空白溶液 见 6 3 1 对照溶液 见 6 3 2 样品溶液 见 6 3 3 配制 6 份样品溶液 8 6 1 2 程序 按照本分析方法检测 6 份样品各溶剂残留 记录色谱图 并计 算 6 份样品各溶剂残留的 RSD n 6 8 6 1 3 接受标准 6 份样品各溶剂残留的 RSD n 6 不得超过 10 表表 14 重复性试验结果表重复性试验结果表 溶剂甲醇乙醇二氯甲烷吡啶 1 2 3 4 5 6 平均值 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 20 of 25 20 RSD 8 6 2 中间精密度中间精密度 另一具有相同资质的分析人员另取相同批次的己酸羟孕酮 6 份 根据本方法检测残留溶剂 8 6 2 1 溶液配制 同 8 6 1 1 8 6 2 2 程序 同 8 6 1 2 8 6 2 3 接受标准 该分析员 6 份样品各溶剂残留的 RSD n 6 不得超过 10 两分析员共 12 份样品各溶剂残留的 RSD n 12 不得超过 10 表表 15 中间精密度试验结果表中间精密度试验结果表 溶剂甲醇乙醇二氯甲烷吡啶 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD RSD 12 次 No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 21 of 25 21 8 78 7溶液稳定性溶液稳定性 8 7 1 溶液配制 对照溶液液配制见 6 3 1 6 3 2 8 7 2 程序 分别将对照溶液及样品溶液放置 0 小时 2 小时 4 小时 8 小时 12 小时 24 小时按照本方法检测 计算各残留溶剂色 谱峰相对标准偏差 8 7 3 接受标准 各次检测对照溶液各溶剂峰面积 RSD n 6 不得超过 10 0 表表 16 溶液稳定性试验结果表溶液稳定性试验结果表 溶剂名称甲醇乙醇二氯甲烷吡啶 0hr 2hr 4hr 8hr 12hr 24hr 平均值 RSD No AVP 5260 01 1 0 Effective date 2011 04 17 QC Dept 己酸羟孕酮残留溶剂分析己酸羟孕酮残留溶剂分析 方法验证方案方法验证方案 Page 22 of 25 22 8 88 8耐用性耐用性 8 8 1 溶液配制 空白及对照溶液配制见 6 3 1 6 3 2 8 8 2 程序 8 8 2 1 空白溶液 8 8 2 2 正常条件下进对照溶液一针 8 8 2 3 起始柱温升高和降低 2 条件下各进对照溶液一针 8 8 2 4 流速增加和降低 0 2ml min 条件下各进对照溶液一针 8 8 2 5 平衡温度升高和降低 5 条件下各进对照溶液一针 8 8 3 接受标准 各条件下峰面积 RSD n 7 不得 超过 10 0 表表 17 耐用性试验峰面积结果表耐用性试验峰面积结果