Vc含量测定.doc

方法一、 2.6二氯酚靛酚滴定法二、原理 Vc又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料 2.6二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中， 2.6二氯酚靛酚钠离子呈红色，被还原后变为无色。 三、实验器材 锥形瓶、 微量滴定管、研钵、 容量瓶、 吸量管等。 四、实验试剂 2% 草酸溶液 ：取2g草酸溶于100ml蒸馏水中。1% 草酸溶液 ：取1g草酸溶于100ml蒸馏水中。标准抗坏血酸溶液（ 0.1mg/ml ）：精确称取10mg抗坏血酸，以1%草酸溶解并定容到100ml。储存到棕色玻璃瓶中，最好临用前配制。0.001N 2.6二氯酚靛酚钠溶液：将50mg2.6二氯酚靛酚钠溶解于约200ml含有52mg NaHCO3的热蒸馏水中，冷却后定容到250ml，储存在棕色瓶中，保存在低温下。2.6二氯酚靛酚钠不稳定，必须在一周内用完。用前必须标定到1ml2.6二氯酚靛酚钠相当于0.088mg抗坏血酸。五、操作 1、植物样品Vc提取液的制备：用电子天平准确地称取辣椒 0.5 g ，样品必须预先用温水洗去泥土，并在空气中风干，加25ml 2%草酸溶液匀浆，并将匀浆液转入50ml离心管中；用少量2%草酸溶液冲洗匀浆杯，一起转入离心管中进行离心（ 5min,4500rp ），将上清液移入 50ml 容量瓶，用少量2%草酸冲洗沉淀并离心保留上清，如此反复抽提 3 次，最后用 2% 草酸定容到50ml。2、测定：每次量取 5ml提取液放入小锥形瓶内进行滴定。 用微量滴定管以 2.6二氯酚靛酚钠溶液 滴定到提取液呈现淡粉红色，并在 1530 秒内不褪色，滴定过程必须迅速，不要超过 2 分钟。 另取 5ml 2%草酸作空白对照进行滴定。 平行进行 2-3 次，计算样品中Vc含量。 M=(V A -V B ) C 0.088 100/ （ D W ） M ： 100g 样品中含抗坏血酸的质量 mg V A ：滴定样品管时所用去染料体积数 ml VB ：滴定空白管时所用去染料体积数ml C ：提取液总体积mlD ：滴定时所取的样品的提取液毫升数 W ：被检样品的重量 0.088 ： 0.001N2.6二氯酚靛酚钠溶液 1ml 相当于 0.088mgVc 方法二、紫外快速测定法（张波老师说用这个方法做实验）一、原理：Vc的2.6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中Vc的含量。二、实验器材：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml, 25ml）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。三、实验试剂：10%HCl：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。1%HCl：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。 1M NaOH溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。四、操作步骤：（一）标准曲线的制作1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100g/ml。2取带塞刻度试管8支并编号，分别按表内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。12345678标准抗坏血酸溶液加入体积（ml）0.10.20.30.40.50.60.81.0蒸馏水加入体积（ml）9.99.89.79.69.59.49.29.0总体积（ml）10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度（g/ml）1.02.03.04.05.06.08.010.03消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（g）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。（二）样品的测定1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1% HCl，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。2样品的测定：取0.2ml提取液，放入盛有0.4ml 10% HCl的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。3待测碱处理液的制备：分别吸取0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.8ml 1M NaOH溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.8ml 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，