结合酶辅酶或辅基作用

2004 1 酶 1 第六章酶 Enzyme 2004 1 酶 2 酶 Enzyme 是由活细胞产生的具有催化作用的蛋白质 又称为生物催化剂 biocatalyst 反应通式ESP substrate product 2004 1 酶 3 本章讨论内容 酶的分子组成及活性酶促反应的特点与机制酶促反应动力学酶的命名 分类和活性测定酶与医学的关系 2004 1 酶 4 第一节酶的分子结构一 酶的分子组成二 酶的活性中心 2004 1 酶 5 一 酶的分子组成单纯酶酶酶蛋白 结合酶无机金属离子 全酶 辅助因子辅酶 低分子有机物 最大活性形式 辅基 2004 1 酶 6 辅酶与辅基的比较辅酶 以非共价键与酶蛋白结合 疏松 可以用透析或超滤方法去除之 低分子有机物 辅因子 辅基 以共价键与酶蛋白结合 紧密 不能用透析或超滤方法去除之 辅酶和辅基中均含有B族维生素 2004 1 酶 7 维生素与辅酶 2004 1 酶 8 相同的辅酶 基 与不同的酶蛋白结合成催化特异性不相同的结合酶 举例 乳酸脱氢酶 LDH 苹果酸脱氢酶酶蛋白不同 有不同的催化特异性 L 乳酸 NAD 丙酮酸 NADH H 苹果酸 NAD 草酰乙酸 NADH H 两者含相同辅酶 NAD 递氢体 LDH 苹果酸脱氢酶 2004 1 酶 9 在酶促反应中 酶蛋白作用 决定催化特异性 结合酶辅酶或辅基作用 起传递电子 原子和某些基团的作用 从而决定催化反应类型 2004 1 酶 10 单体酶寡聚酶酶的存在形式多酶体系串联酶 2004 1 酶 11 在酶分子表面特定区域上有些特殊基团 可与底物结合 并催化底物转变为产物 这个区域称为酶的活性中心 activecenter 酶活性中心的必需基团 essentialgroup 结合基团催化基团 二 酶的活性中心 2004 1 酶 12 酶的活性中心示意图 活性中心必需基团结合基团 结合底物 形成酶 底物复合物 ES 催化基团 催化底物转变为产物 2004 1 酶 13 第二节酶促反应的特点和机制 一 酶促反应的特点二 酶促反应的机制三 酶原与酶原激活四 同工酶 2004 1 酶 14 一 酶促反应的特点 与一般无机催化剂比较 共性 两者都能催化热力学上允许的化学反应 用量少 催化效率高 不改变反应的平衡点 降低反应所需的活化能 SS P V S 基态活化分子产物 活化能 快 2004 1 酶 15 2004 1 酶 16 高度的不稳定性 绝对特异性 脲酶 相对特异性 酯酶 立体异构特异性 乳酸脱氢酶 高度的催化效率 高度的特异性 酶活力的可调节性 特殊性 酶促反应的特点 2004 1 酶 17 E S ES E P2H2O22H2O O2需活化能活化分子数反应速度无催化剂73kJ mol少慢铂作催化剂49kJ mol 快酶作催化剂8kJ mol 大大加快 外加一定能量 单位体积内 中间产物学说 2004 1 酶 18 二 酶促反应的机制 一 决定酶作用高效率的机制 邻近效应与定向排列表面效应多元催化 2004 1 酶 19 二 决定酶作用特异性的机制 诱导契合学说 2004 1 酶 20 三 酶原与酶原激活1 酶原 zymogen 无活性的 酶的前体 酶原激活 酶原激活举例 胰蛋白酶原的激活过程 4 意义 1 保护组织免遭自身消化 2 保证应激需要 2004 1 酶 21 胰蛋白酶原的激活过程 trypsin 2004 1 酶 22 四 同工酶 isoenzyme H型乳酸脱氢酶 LDH 四聚体 5种同工酶M型 2004 1 酶 23 LDH同工酶在人体各组织器官中的分布 同工酶百分比 组织器官LDH1LDH2LDH3LDH4LDH5心肌67294 1 1肾5228164 1肝24112756骨骼肌47212741红细胞42361552肺1020302515胰腺301550 5脾102540255子宫52544224 2004 1 酶 24 LDH同工酶的功能 葡萄糖 丙酮酸乳酸 LDH5 丙酮酸还原酶 三羧酸循环 丙酮酸乳酸 LDH1 乳酸脱氢酶 经血液运输 NADH H NAD 氧化磷酸化 ATP 骨骼肌 心肌 2004 1 酶 25 H型与M型亚基性质差别H型亚基分子量小于M型亚基H型亚基带电量多于M型亚基LDH同工酶谱分析的临床意义 LDH1 染色斑点大而深 帮助诊断心肌梗塞 LDH5 染色斑点大而深 帮助诊断肝癌 各类LDH有不同的分子量和带电量 利用电泳技术可使彼此间分离开来 2004 1 酶 26 第三节酶促反应动力学 酶浓度 E 底物浓度 S 温度 T 酸碱度 pH 抑制剂 i 激活剂 a 2004 1 酶 27 一 酶浓度对酶促反应速度的影响 条件 S E E 2004 1 酶 28 二 底物浓度对酶促反应速度的影响 一 矩形双曲线图形 E SESE P 中间复合物学说 2004 1 酶 29 1 米氏常数 Km 意义 1 1 2Vmax Km S 2 Km可以近似地代表E与S的亲和力 Vmax S 二 米氏方程式 Km S Km越小 表示E与S亲和力越大 对于多底物 Km越小者 为酶的最佳底物 2004 1 酶 30 2 Km值和Vmax值的测定 双倒数作图法 2004 1 酶 31 三 温度对酶促反应速度的影响 在一定温度范围内 T 酶活性 T 酶活性 T 超过一定范围时 酶反而变性失活 最适温度酶活性最高 变性程度最小时的温度 2004 1 酶 32 四 pH对酶促反应速度的影响 pH 影响酶活性中心上的必需基团和底物基团的解离程度最适pH酶与底物处于最佳解离状态 利于形成 ES 反应速度最大时的pH 体外实验选取相应pH的缓冲液 2004 1 酶 33 五 激活剂对酶促反应速度的影响 凡能提高酶活性的物质 统称为酶的激活剂 大部分是离子或简单的有机化合物 必需激活剂非必需激活剂如 Cl 是唾液淀粉酶的激活剂 2004 1 酶 34 六 抑制剂对酶促反应速度的影响巯基酶抑制剂 专一性抑制丝氨酸酶抑制剂不可逆抑制非专一性抑制抑制作用 竞争性抑制作用可逆性抑制 非竞争性抑制作用反竞争性抑制作用 2004 1 酶 35 一 不可逆抑制作用 irreversibleinhibition i以共价键与E活性中心上的必需基团结合 从而抑制酶活性 这种i不能用透析 超滤等物理方法除去 常见抑制剂 丝氨酸酶抑制剂巯基酶抑制剂 2004 1 酶 36 1 巯基酶抑制剂 抑制剂 重金属离子 Ag Hg2 砷剂 As3 等 Cu2 是唾液淀粉酶的抑制剂 2004 1 酶 37 2 丝氨酸酶抑制剂 抑制剂 有机磷化合物 丝氨酸酶 解磷定 2004 1 酶 38 乙酰胆碱 H2O 胆碱 乙酸 胆碱酯酶 有机磷杀虫剂 胆碱能神经过度兴奋 中毒 心跳变慢 瞳孔缩小 流涎 多汗 呼吸困难 2004 1 酶 39 二 可逆性抑制作用 reversibleinhibition i与E或ES以非共价键结合 从而抑制酶活性 这种i可用透析 超滤等方法除去 竞争性抑制作用分类 非竞争性抑制作用反竞争性抑制作用 2004 1 酶 40 1 竞争性抑制 competitiveinhibition i结构与s结构相似 互相竞争与酶活性中心结合 从而抑制酶活性 2004 1 酶 41 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 琥珀酸脱氢酶 succinate fumarate malonate 2004 1 酶 42 磺胺类药物的竞争性抑制作用 磺胺药与PABA相互竞争与FH2合成酶结合 p aminobenzoicacid PABA sulfadrugs 2004 1 酶 43 PABA 二氢蝶呤啶 谷氨酸 FH2合成酶 磺胺类药物 FH2 FH2还原酶 MTX FH4 相互竞争 相互竞争 磺胺类药物的抑菌机理 氨甲蝶呤 methotrexate MTX 促进核酸的合成 2004 1 酶 44 竞争性抑制作用特点1 i与S结构相似 2 i与S互相竞争与酶活性中心结合 3 抑制程度取决于 i 和 S 的相对比例 4 S 可以减少或去除抑制作用 Km Vmax不变 2004 1 酶 45 2 非竞争性抑制作用 non competitiveinhibition i和s结构不相似 两者互不干扰同时与酶结合 从而抑制酶活性 E SESE P IIEI SESI 2004 1 酶 46 非竞争性抑制作用特点 1 i与S结构不相似 2 i与S互不干扰同时与酶结合 3 抑制程度只取决于 i 的浓度 4 S 不能去除抑制作用 Km不变 Vmax 2004 1 酶 47 3 反竞争性抑制作用 抑制剂仅与酶 底物复合物 ES 结合 使酶失去催化活性 2004 1 酶 48 第四节酶的命名 分类和酶活性测定酶的命名和分类 一 习惯命名法根据底物命名 2 根据反应类型命名根据底物 反应类型命名 二 系统命名 国际酶学委员会规定 IEC 系统名称 酶的分类与编号 习惯名称 所有底物 反应性质 1 6大类底物 反应类型1 2 亚类 大类1 2 亚亚类 亚类酶的特定编号 亚亚类 4个数字 乳酸 NAD 氧化还原酶 EC1 1 1 27 乳酸脱氢酶 2004 1 酶 49 酶的分类与编号 氧化还原酶类转移酶类水解酶类裂解酶类 裂合酶类 异构酶类合成酶类 连接酶类 每种酶的分类编号均有4个数字组成 2004 1 酶 50 二 酶活性测定1 酶活性 酶催化某一化学反应的能力常用单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示酶活性大小 2 酶活性单位 u 1 国际单位25 最适PH 最适底物浓度 每分钟转化1 mol底物所需的酶量定为1个国际单位 IU 催量 Kat 每秒钟使1mol底物转化为产物所需的酶量Kat与IU的换算 1Kat 6x107IU 2004 1 酶 51 酮戊二酸 丙氨酸谷氨酸 丙酮酸 37 pH7 4 30min GPT ALT活性单位定义 1ml血清在37 pH7 4条件下 催化底物发生转氨反应30min 产生2 5 g丙酮酸定为1个谷丙转氨酶单位 U 丙酮酸含量 g 12 5 g0 13 酶的比活性 u mg Pr ALT GPT X GPT U ml血清 2 实用单位根据实验条件而决定酶活性单位 如 GPT 2004 1 酶 52 第五节酶与医学的关系 酶与某些疾病发生的关系酶在疾病诊断上的应用酶在疾病治疗中的应用 2004 1 酶 53 一 酶与某些疾病发生的关系 酶缺陷所致的疾病 酪氨酸酶缺陷 白化病6 磷酸葡萄糖脱氢酶缺陷 蚕豆病苯丙氨酸羟化酶缺陷 苯丙酮酸尿症 酶活性被抑制所致疾病 有机磷农药中毒 抑制胆碱酯酶重金属离子 抑制巯基酶氰化物 抑制细胞色素氧化酶 2004 1 酶 54 皮肤乳白色 毛发淡黄或银白色 瞳孔淡红 虹膜淡灰或淡红 半透明视网膜缺乏色素 酪氨酸酶缺陷 白化病 2004 1 酶 55 智力低下 60 患儿有脑电图异常 头发细黄 皮肤色淡和虹膜淡黄色 惊厥 尿有 发霉 臭味或鼠尿味 苯丙氨酸羟化酶缺陷 苯丙酮酸尿症 2004 1 酶 56 同型半胱氨酸尿症 多发性血栓形成 晶体脱位 身体瘦长 蜘蛛样指 趾 轻中度智力低下 2004 1 酶 57 二 酶在疾病诊断上的应用 2004 1 酶 58 2004 1 酶 59 三 酶在疾病治疗中的应用 消化酶类抗炎清