论文-衡阳油茶的组织培养技术研究.doc

衡阳油茶的组织培养技术研究摘要：本项目主要研究了衡阳茶茎段的组织技术。通过比较分析在改良的MS培养基（1/2NH4NO3）的基础上6-BA与NAA两种激素不同的浓度组合对衡阳油茶整个组培过程的影响，结果发现在当6-BA的浓度为1.0 mgL-1 且NAA的浓度为0.01 mgL-1 时是衡阳油茶的最佳浓度组合。实验证明可利用组培技术，基本培养基在其最佳激素浓度组合的情况下，提高衡阳油茶组培的成功率，从而提高衡阳油茶的产量。关键词：油茶；茎段；组织培养The Study on the stems Tissue Culture of Camellia oleifera AbelAbstract：The stems tissue culture of Camellia oleifera Abel was studied in this paper. Through the comparative analysis in MS（1/2NH4NO3）culture improvement on the basis of 6-BA and NAA two hormones different concentration of the whole process of tissue camellia combination of influence, The results found that when the concentration of the 6-BA in 1.0 mgL-1 the concentration of the NAA for 0.01 mgL-1 is the optimal concentration of hengyang Camellia oleifera Abel. Experiments show available technology, basic medium of tissue in the best combination of hormone concentration, improve the success rate of tissue hengyang camellia oleifera, so as to improve the output of hengyang. Keywords: Camellia oleifera Abel; stem; tissue culture油茶（Camellia oleifera Abel）又名油茶树、茶仔树，常绿乔木或灌木，油茶树高24米，最高可高达6米，一般23米。单叶互生，常常革质；无托叶，是山茶科最重要的树种。油茶主产于秦岭、淮河以南，以福建、浙江、江西、湖南、广西，四川为主要产区，其中又以湖南和江西省为主要集中产区。油茶能适生于干旱贫瘠的酸性红壤或黄壤，适应能力强，油茶又是一个抗污染能力极强的树种，对二氧化硫抗性强，抗氟和吸氯能力也很强，科学经营油茶林具有保持水土、涵养水源、调节气候的生态效益，所以它又是我国南方地区的重要造林绿化树种，其生理特性还特别适宜作防火林带树种。油茶是我国南方主要的经济林木、与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料植物。油茶具有很高的综合利用价值。油茶种子含油30以上，供食用及润发、调药，可制蜡烛和肥皂，也可作机油的代用品。油茶油中不饱和脂肪酸含量高达90%，远远高于菜油、花生油和豆油，与橄榄油比维生素E含量高一倍，并以油酸和亚油酸为主，还含有少量的亚麻酸等高价不饱和脂肪酸，且不含对人体有害的芥酸，而深受群众喜爱，同时，茶油因具有清热化湿、解毒之功能，可用于治疗痧气腹痛、急性蛔虫阻塞肠梗阻、疥癣、烫火伤等，故茶油亦为中华人民共和国药典所收载。由于油茶油含有山茶甙等特定生理活性物质，具有极高的营养价值，且油茶油风味独特，营养丰富，耐贮藏，易被人体吸收，长期食用能降低血清胆固醇含量、起到预防和治疗高血压和常见心血管疾病的作用。油茶叶部含有花黄素、茶碱等，是医药工业的原料。由此可见，茶油集食用和医疗保健于一身，所以长期以来一直被誉为“东方橄榄油”。茶油的副产品茶枯饼既是农药，又是肥料，可提高农田蓄水能力和防治稻田害虫，更可提取茶皂素、制刨光粉和复合饲料，茶壳可提糠醛、鞣料和制活性炭等；木材坚硬致密，可作家具。由此可见其副产品加工的附加值也非常高。所以，在有些经济相对比较落后的地方，油茶被誉称为“命根树”。1 材料与方法1.1 材料油茶（Camellia oleifera Abel）采自衡阳个地区，挑选幼嫩，带有幼芽的枝条做为组培材料。1.2 方法1.2.1 材料的处理分别剪取新萌芽枝条的茎尖，剪去叶片，用洗衣粉浸泡30min 左右，流水冲洗不少于1.5h，剪成2段，在超净工作台上用 75% 酒精浸泡30s，0.1% 升汞灭菌6min，无菌水冲洗 3-4 次，再用0.1% HgCl2消毒3min，无菌水冲洗 6-8 次，用无菌吸水纸吸干，切取1cm 左右茎尖，备用；1.2.2 培养基与培养条件培养基：改良MS（1/2NH4NO3）+激素+琼脂 5.4 gL-1+蔗糖 30 gL-1，采用6-BA、NAA两种激素，其中6-BA的浓度分别为 0.5 mgL-1、1.0 mgL-1、2.0 mgL-1 ，NAA的浓度分别设为0.01 mgL-1、0.05 mgL-1、0.1mgL-1。培养条件：pH5.8 左右，光照强度1200lx，光照时间每12h，温度25-27，培养30d后统计萌芽率。2 结果与分析不同激素的组合对芽的萌发有明显的影响. 在 BA 为 1.0 mgL-1、NAA 为 0.01 mgL-1时，萌芽率达到了最大，为80%；芽的生长状况也最好：苗高且粗，叶片舒展，叶色翠绿。 方差分析结果表明：NAA 及其与 BA 交互效应 NAABA 对芽的诱导率没有显著影响，而 BA 对芽的诱导率有显著影响。表 不同激素组合对衡阳油茶茎段组培的影响Table Effects of phytohormone combinationson on the stems tissue culture of Camellia oleifera Abel 激素组合/（mgL-1）6-BA NAA外植体数以分化的外植体数芽的诱导率/%苗的生长状态0.50.015240长势一般0.50.055360长势一般0.50.15240长势一般1.00.015480苗高且壮1.00.055360长势一般1.00.15240长势一般2.00.015240苗高但不壮2.00.055120苗高但不壮2.00.15120苗高但不壮注 芽的诱导率（%）=分化芽的外植体数/接种的外植体数100%3 讨论 植物器官和组织，其形态发生能力不同。Murashige 曾指出，植株增长速度和再生植株的品质，最关键的决定因素是起始的外植体。 尤其是一些较难培养的植物种类，需要仔细考虑外植体的来源和生理状态，包括不同的个体，同一个体不同器官或器官上的不同部位。 虽然从理论上讲，每一种植物的任何部位、任何一个细胞都能恢复胚性，但由于技术和条件的限制，在实践中这种可能性不能完全成为现实。 有必要依据培养对象的生理特性和生态学特性选择适宜的外植体。本研究在丛生芽的增殖过程中出现了玻璃化苗的现象，主要表现在玻璃化丛生芽的芽体弱小，叶片脆化，明显呈现出水渍状，叶色淡，这种苗若继代培养，虽能增殖形成新的丛生芽，但芽体玻璃化症状更加明显，且有褐化枯死现象，因此玻璃化苗基本上不能作为生产或再生产的材料. 关于组培中的玻璃化苗现象的原因，多数研究认为6-BA浓度的升高会使玻璃化程度加剧，本研究结果也呈现出同样的趋势. 除此之外，还有其他些因素与玻璃化苗出现也有一定的关系，培养基上可以诱导出愈伤组织，0.1或 0.5 mgL-1 6-BA上继代培养可以诱导出芽原基，茎在无激素的 1/2 MS培养基上生长超过10cm长后，即可生根. AgrawalD.C.等用杂种柳（S.fragilis S.lispoclados）的子房进行微体快速繁殖，认为离体茎在不含激素的 SH培养基中培养时具有最高的生根率，杂种小植株在田间生长良好。4 参考文献1 杨晖, 大扁杏离体组织茎芽分化诱导试验N. 平原大学学报,2007,24(4):122-125.2 韦三立, 李丕明, 何钟佩, 韩碧文. 大丽花茎段的离体快速繁殖N. 北京农业大学学报,1990,16（4）:381-385.3 关亚丽, 陈英, 黄敏仁. 簸箕柳组织培养初步研究N. 海南师范大学学报(自然科学版),2009,22（2）:204-208.4 刘国民, 陈秀蕙, 李任珠, 潘学峰, 符文英. 苦丁茶树茎段离体培养的研究N. 海南大学学报自然科学版,1997,15（4）:291-297.5 冀爱青, 赵宇, 王慧阳, 郭生金. 不同激素配比对驱蚊草茎段组织培养的影响N. 晋中学院学报,2009,26（3）:55-58.6 付志惠, 李洪林, 杨波. 广东石斛的组织培养J. 植物生理学通讯,2005,41（4）:491.7 周传明, 黄寿先, 熊英, 黄文. 火龙果茎段离体培养快速繁殖试验J.广西科学,2002,9（1）:78-80.8 陈瑛, 陶文沂. 几种激素对茶愈伤组织合成茶氨酸的影响N. 无锡轻工大学学报,1998,17（1）:74-77.9 宿静, 汤庚国, 万劲, 汤诗杰, 武文婷, 李玉萍. 香果树茎段和叶片的组织培养N. 植物资源与环境学报,2008,17（1）:71-74.10 邓文韬. 油茶茎段和侧芽的组织培养D. 中南林业科技大学,2008.11 梁贵秋,唐燕梅,陆 飞等.驱蚊草的组织培养与快速繁殖J.广西热带农业,2004,94(5):3-4.12 刘国信.驱避蚊虫的“基因植物”J.农业市场信息,2002(21):26-28.13 于国维.香叶挥发油化学成分的研究J.北京中医学院学报,1993,16 (1):33-35.14 李大红,姚 雷,黄 健.两种天竺葵的精油成分和矿物元素的研究J.香料香精化妆品,2004(1):8-11.15 江新国,刘杏泉.驱蚊草的组织培养和快速繁殖J.江西林业科技,2004(5):19-21.16 和承尧,寸守铣.滇产驱蚊草芳香油化学成分分析研究J.云南化工,2003,30(5):21-24.17李庆伟,梁明勤,杨红丽.驱蚊草组培快繁技术研究初报J.中国农学通报,20