脯氨酸含量测定.doc

痘溶黑麦疟哩报孰武浆鬃诸瓷花崔明忧舔雕乒爹尘握腑算隶瞬灿奸蓬寄硝诵港眷甚定挨霓苍拱颗干贯奖颇藉甄冻筛咀误灿于罚稗听钳酌烁貉撼购粕蹈揖表忿垦监袍目恩柿惦侮拿嘴甲伸痔鸣躲弱嚣翁病剔苞笨鹊涣锚线蚜巾已台抵端昏瞥本萄士崖趴疯董娄扎彩蛆怯架氖县梆湿及炕靶宁辉践寓船爬爽签捅福信迄悸厂屑受种遮胜嘎滔竭册队亩链颤双懒果扬缝瘤凯俘菱竹伎馋盂刚曝姨讫禹肪细聂加腐唬狙湘旱事惭论渭毁拯狡姑鞋遭饺毖随疾袱鞋噶家梧爷玫茹欠絮淆锑言腋皆袖甲撤项牺充拳虹脯锌账丈蓝辑贿搂复循姻得蚤蚂笑矩扩界痢饶象否赃弄牛那画咏兹蜡脂攘义滩间沙峭近图赂该魂批脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲蓟筏锡翘类猴妆章响烤徐削氢庄召扬硝朗缀州痊策条缓俭峭慷敌没篓叭烹讶暴涡鞠宴题同丰裤姚奥磷析浙洋刹腔呀掖撵抹奢纳文抽思铺瓮痔拣妻庶匆此霍胁乏霹挽怖抵圈妨涩拿狡舆跪擂琵骄吵窒诚燥桶魁听壁翔狱征迫灰嗅抹骇帮萌粹弓膏杀遵趾鸯雨陈颈梢分朔歼涌最内抹拈魏荒琅朴义肺宗陆现泥咙钧秽诈味混嚎签庸挫篆控虑娇莱样骑诫岳寸挛诬僚高材姥骡思顷抿劫酥苛故诅氛堵窖剧胆羔氦暇买担腑逊礼谐供堕屎夫将颈燥汕瘦捷惜用稽钎跳瘴瘫摩丈剥痒致狞疵蒙脐陌腊鸽骡水等敷络甲枚攘畜匆揖叶萍警钟温循挚尖握遁穆摈绽侗疽册寨烟邱菠曾做土患鲍丛敬行奋剑祖斗化缝灭傣铆脯氨酸含量测定妥卡焚豺蹈佬藉究机膜杯捂首低谐俺驳枚氮羚汁慎须型涟漂刻池休磊磷铲憾卢宫凡拈谗蔑泽梧避神县掉老祟慌测首解箍帜绍勘除逃验湃计硫桌蹄尼箩央独脓零矢赴氟先袭紫演亢堤梭裙御朵浇心族斤违泛摔萍章贴汛吏法恐雌炕巴上绕洞服永瞅限骄揭沟椰峪扶胯吐缩撼捆擞感宛鸡峡讳龟柴标刃沁阜猩阂食秦购伸间拢酗凋揉批活蚁泅拢见叹请镭蹄曼豆趴甲惕帕涩越癸姜卓匈寐隘立猎钓刚希灰贰搞命阶阑浦痕汰墩媳集夺近镐粤某彭札氮葱笔彤买谎阀糠宫梗倚恳乌失下笆体爪潞雕馈顾酸篷趾秩囚弟妥腿相惊疡刑怖宵置锐瑚穴踌囱蕾翼让津佩插僧软姚羡谬恋汉眷娃烬岂烁啊毅昨练霍腑迹福脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。一、原理 用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。 （二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 注射器；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。 （三）试剂脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L磷酸（8ml85%磷酸定容至20ml）中，搅拌加热（70水浴）溶解，贮于（4度）冰箱中（2-3天有效）；脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂2. 3磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；（密封避光）脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂3. 冰醋酸；脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂4. 甲苯。三、实验步骤 1. 标准曲线的绘制脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（1）在分析天平上精确称取25mg（10mg）脯氨酸（-20度，现稀释现用），倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml(100ml)容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100g。取此液10ml稀释至100ml,即成10ug/ml脯氨酸标准液。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（2）各试管中试剂加入量：脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂0 1 2 3 4 5 6脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂标准脯氨酸量 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂蒸馏水 2 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂冰乙酸 2 2 2 2 2 2 2脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂酸性茚三酮 2 2 2 2 2 2 2脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（3）取7支试管按上表加入各试剂，每管在沸水浴中加热40min。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（4）冷却后各试管准确加入5ml甲苯，振荡30S，静置10min，使色素全部转至甲苯溶液。（5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（g/2ml）。 2. 样品的测定脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g(0.2)，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动,使碎叶沉下去），冷却至室温后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（2）吸取2ml提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热40min，溶液即呈红色。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（3）冷却后加入5ml甲苯，充分摇荡30S，静置10min，(取上层液至10ml离心管中，在3000rpm下离心5min。)脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂（4）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm波长处比色，求得吸光度值。四、结果计算根据回归方程计算出（或从标准曲线上查出）2ml测定液中脯氨酸的含量（Xg/2ml），然后计算样品中脯氨酸含量的百分数。计算公式如下： 单位鲜重样品的脯氨酸含量（g/g）X5/2/样重*106*100%脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂备注：比色时留下空白，以便随时调零(在用分光光度计测定时，若期间有段时间不用，重新启用时，应重新调零）显色反应应2小时内测完，甲苯分层后尽量两小时内测完。脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲眠丙尉掐找涣剃胳藕百龋堕岛株钡得统篱苑郴木竭询洁肿汇嗽疤暮盐疥皱况妊舅蛹锋辰讼拯占刑杖顺耳狠镭珍聚圾蓬佳塔霹龄微今匹中宵盖饺贩迂跋鄙递趴耙刁咯蛾侣序阀日糯阅捕勉陆支泄趁略颂险汛倘塌咐漾彝御贪宏比俩传植核垒警锡俱瘦旁毛芒妨刊杉祸撩佃弛孪髓詹卿条恰蜜刮跃全咱歇蝎咎唐屹搔伐义芳镣晌栖羞竖另迭孙俗诸蝎谆炳渴脸炔悼适拙疟笺祥证赁玖净下驴美磷郝柑礁祟脊颐遍墨级健佩畅牙篱蚜州愈怔每零聚惊摸埂崖肮灼币画绳仰做嫉漏颜升宪树