HPLC法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质

HPLC法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质摘要目的建立草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质测定方法。方法采用高效液相色谱法测定，色谱柱：HypersilBDSC6H5（4.6mm250mm，5m）；柱温：25；流动相：0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（4060），流速：1.0mL/min；检测波长：283nm；进样量：20L。结果草酸萘呋胺酯与杂质能完全分离，草酸萘呋胺酯最小检测限为3ng。结论该方法灵敏、专属，可用于草酸萘呋胺酯包衣微丸有关物质的检查。关键词HPLC法；草酸萘呋胺酯；微丸；有关物质中图分类号R927.2文献标识码A文章编号1674-4721（2013）02（a）-0071-02草酸萘呋胺酯是一种脑血管和外周血管扩张药1，临床上用于治疗脑动脉硬化、老年性痴呆、老年精神紊乱、脑功能不全及美尼尔氏综合征、间歇性跛行、糖尿病性脉管病、毛细血管炎及营养性溃疡、早期坏疽等疾病2。草酸萘呋胺酯在国外已上市剂型有胶囊剂和缓释片，国内暂无制剂上市。草酸萘呋胺酯包衣微丸为自制，因微丸具有粒度均匀、流动性好、在胃肠道分布面积大，生物利用度高等优势3，而且可以对其进行包衣，通过控制包衣衣膜种类或厚度等因素来控制药物的释放速度4-6，以达到缓控释目的。本文按照中华人民共和国药典二部附录药品质量标准分析方法验证指导原则要求7附录194-195，对该制剂进行有关物质测定方法学研究。1仪器与试药1.1仪器LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津）；HypersilBDSC6H5色谱柱（4.6mm250mm，5m）（大连依利特科学仪器有限公司）；HW色谱工作站（南京千谱软件有限公司）。1.2试药草酸萘呋胺酯对照品（广州贝氏制药有限公司，批号：041105，纯度：99.7%）；草酸萘呋胺酯包衣微丸（自制，批号：050223、050224、050225，含量：95%105%）；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件流动相：0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH4.0）-乙腈（4060）；检测波长：283nm；流速：1.0mL/min；柱温：25；进样量：20L。在上述色谱条件下理论板数按草酸萘呋胺酯峰计算应不低于1500。2.2供试品溶液的制备取草酸萘呋胺酯包衣微丸研细，精密称取适量（约相当于草酸萘呋胺酯0.1g），置100mL量瓶中，加流动相溶解，滤过，制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液。2.3对照溶液的制备精密量取供试品溶液1mL至50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照溶液。2.4对照品溶液的制备精密称取草酸萘呋胺酯对照品0.1g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。2.5辅料干扰试验按处方量称取本品辅料适量，照供试品稀释方法同法配制成空白对照溶液，分别量取供试品溶液、对照品溶液、空白对照溶液名20L注入色谱仪，结果表明辅料对草酸萘呋胺酯峰及有关物质峰无干扰。2.6破坏性试验分别取5份草酸萘呋胺酯包衣微丸，研细，精密称取适量（约相当于草酸萘呋胺酯0.1g），分置100mL量瓶中，分别做以下破坏试验：（1）碱破坏：加1mol/L的NaOH溶液10mL，放置12h，用1mol/L的HCl溶液调节pH值至中性，加流动相至刻度；（2）酸破坏：加1mol/L的HCl溶液10mL，放置12h，用1mol/L的NaOH溶液调节pH值至中性，加流动相至刻度；（3）高温破坏：于120烘箱中加热3h，放至室温，加流动相至刻度；（4）光破坏：于6500Lux条件下放置72h，加流动相至刻度；（5）氧化破坏：加入H2O2适量，放置12h，加流动相至刻度；取上述5种溶液分别进样20L，记录色谱图，见图1。结果表明本品经碱、酸、高温、强光及氧化破坏后，产生的杂质能有效地与主成分峰完全分离，互不干扰。2.7最小检测限取对照品溶液，进行逐级稀释，取20L注入液相色谱仪，根据信噪比（S/N=3），计算得出草酸萘呋胺酯的最小检测限为3ng。2.8精密度试验取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测定草酸萘呋胺酯峰面积。结果，RSD=0.71%，说明方法精密度良好。2.9重现性试验取同批次（批号：050223）样品，按“2.10”项下方法操作，平行6份。结果RSD=0.83%，说明方法重现性良好。2.10样品有关物质检查取草酸萘呋胺酯包衣小丸三批（批号：050223、050224、050225），按项“2.2”、“2.3”项下方法制备供试溶液与对照溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定，取对照溶液20L注入液相色谱仪，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高度达满量程的30%；再取上述两种溶液各20L分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中显示各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液的主成分峰面积（2%）。结果证明三批样品的有关物质含量分别为0.96%、1.03%、1.10%，表明三批样品的有关物质均符合规定。3讨论在选择检测波长时，通过紫外分观光度计在200400nm波长范围内进行扫描，待测成分在283nm处响应值较大，且所用辅料在此波长也无干扰，所以选用283nm作为检测波长。在初试过程中，分别比较了不同比例不同组分流动相对草酸萘呋胺酯保留时间及理论塔板数的影响：0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-甲醇（5050）；0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH4.0）-乙腈（7030）；0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（6040）；0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（5050）；0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（4060）。结果以0.05mol/L乙酸钠（用磷酸调节pH=4.0）-乙腈（4060）为流动相时，被测物保留时间、分离度、理论塔板数均适宜。在流动相中加入乙酸钠作为抑制剂抑制草酸萘呋胺酯的解离8，保证峰形良好。本试验也对空白辅料进行了碱、酸、高温、强光及氧化破坏，证明其对有关物质的测定均无干扰。由于很难获得杂质对照品，所以参照中华人民共和国药典（2010版）有关规定7附录204-206，以不加校正因子的主成分自身对照法测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质。本试验采用HPLC测定草酸萘呋胺酯包衣微丸的有关物质，方法简便、易行、准确可靠，可用于该制剂的质量控制。参考文献1BarradellLB，BrogdenRN.Oralnaftidrofuryl.AreviewofitspharmacologyandtherapeuticuseinthemanagementofperipheralocclusivearterialdiseaseJ.DrugsAging，1996，8（4）：299-322.2虞惠康.克拉瑞啶J.中国新药杂志，1997，6（3）：189-190.3原丽慧，卞俊.缓控释微丸制剂的研究进展J.海军医学杂志，2012，33（2）：135-137.4黄涓涓，谢俊，黄春玉，等.膜控型微丸的研究与应用进展J.药学与临床研究，2011，19（1）：42-46.5陈宴，郎朗天，操锋，等.微丸制备工艺研究进展J.药学进展，2012，36（8）：362-369.6何艳，王晓波，杨晓波