兔巴氏杆菌_0

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/5兔巴氏杆菌文章标题兔巴氏杆菌波氏杆菌二联蜂胶疫苗的研制及安全、效力试验兔巴氏杆菌波氏杆菌二联蜂胶疫苗的研制及安全、效力试验兔多杀性巴氏杆菌病和兔支气管败血波氏杆菌病是家兔的两种主要细菌性传染病,它们传播迅速,一旦在兔场暴发流行,很难根除,经济损失惨重。进行疫苗接种是预防这两种疾病的最有效的措施。免疫原性好的菌种和良好的免疫佐剂是保证疫苗免疫效力的必要条件。因此,在PM和BB基础菌种研究的基础上,对蜂胶的提取工艺进行了研究,选取了蜂胶乙醇提取液的水溶物作为佐剂,研制疫苗,并进行了疫苗的安全及效力试验。现将该研究结果报告如下。1材料与方法11仪器及材料精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/5111菌种兔多杀性巴氏杆菌PM90株兔支气管败血波氏杆菌BB82株。112试验动物不同日龄的健康大耳白兔113培养基含3小牛血清的马丁琼脂平板、马丁肉汤、硫乙醇酸盐培养基、酪胨琼脂、葡萄糖蛋白胨汤等。114细胞瓶115蜂胶116仪器GQ75管式分离机、索氏回流装置、温控式旋转蒸发器12试验方法121PM90菌液的制备及检验1211一级种子的繁殖与鉴定用灭菌生理盐水适当稀释PM90株第9代冻干菌种,接种于01绵羊血红素的马丁精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/5琼脂平板上,37培养18H,然后选取510个典型菌落,分别接种于10绵羊鲜血琼脂斜面若干,同上培养后,作为一级种子。在4保存,可使用7日。继代次数不超过3代。1212二级种子的繁殖及鉴定将PM90株一级种子接种于适量马丁肉汤中,置37振荡培养18H,取样用SMS培养基作纯粹检验置4保存,可使用3日。1213制苗用菌液的培养将PM90株二级种子接种于SMS培养基,37培养18H,无菌水洗下菌苔,取样做纯粹检验,同时用平板菌落计数法计算菌液浓度,将菌液浓度调整为200108个/ML。1214菌液的灭活加入04的甲醛溶液于菌液中,容器密封后,37灭活48H,其间振摇68次,然后进行灭活检验。本研究灭活检验及无菌检验用的培养基为SMS、TG、GA和GP。置37条件下培养48H,无细菌生长说明已完全灭活。1215菌液的离心、冻融灭活检验合格的菌液用管式分离机离心除去甲醛,无菌刮下菌苔,用等量的灭菌生理盐水配成原浓度的菌液。小量分装后反复冻融3次,再次进行精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/5无菌检验。122BB82菌液的制备与检验将BB82株第7代冻干菌种接种于BMS培养基上,37条件下培养24H,然后选510个典型菌落,分别接种于10绵羊鲜血琼脂斜面若干,同上培养后,作为一级种子。置4保存,可使用7日。继代不超过3代。二级种子的繁殖以及制苗用菌液的培养、灭活、离心及冻融参照121123蜂胶佐剂的制备经过工艺优化选择,我们采用了醇提水溶法来制备蜂胶佐剂。蜂胶原胶在20冰柜中冷冻过夜使变脆,取出后研磨粉碎,放入深色瓶中,按14的比例加入80的乙醇,充分搅拌,置70索氏回流2H,然后于旋转蒸发器中50浓缩成浸膏状。通过试验,选择合适的助溶剂,将蜂胶浸膏溶于PH74的磷酸盐缓冲液,然后配制成40MG/ML的溶液4避光保存备用。124配苗将上述PM90菌液与BB82菌液等量混匀后作为水相,蜂胶乙醇提取液作为佐剂相,水相与佐剂相等量混匀后加入终浓度为001的硫柳汞,置胶体磨中以8000R/MIN搅拌5MIN,然后12000R/MIN搅拌5MIN。无菌检验合格的,即可分装至疫苗瓶中,加塞、封蜡置4保存备用。实验室精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/5共生产兔巴氏杆菌波氏杆菌二联蜂胶疫苗6批,批号分别为010510、010521、010615、010628、010709和010720。125成品检验6个批次的兔巴氏杆菌波氏杆菌二联蜂胶灭活疫苗均进行了物理性状、无菌检验以及安全检验。其中安全检验分3组进行,每组均使用了不同日龄的健康大耳白兔各20只。接种后观察3周,记录家兔的临床反应、体温以及是否有组织病变。3个组的试验设计如下一次单剂量接种组的疫苗接种量为2ML/只单剂量重复