溶液配制(个人总结).doc

溶液配制LB固体培养基（液体培养基不加琼脂）胰蛋白胨 1g酵母提取物 0.5gNaCl 1g琼脂 1.6g加蒸馏水水容至100 mL，摇动容器直至溶质溶解，用5mol/L NaOH调pH至7.0，在15psi高压下蒸汽灭菌20min. （1.05kg/cm3）。一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板 1.配制：100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55的水浴中，待培养基温度降到55时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4保存，一个月内使用。琼脂糖凝胶H2O 50 ml50TAE 1 ml琼脂糖 0.5 gEB 2.5 ul（胶不热时加入）微波炉加热30 s，倒入制胶盒。D-PBS杜氏磷酸盐缓冲液(Dulbeccos Phosphate Buffered Saline，D-PBS)也是一种磷酸盐缓冲液，与常规PBS的不同之处在于磷酸盐的含量稍低些，并含有 钙镁离子。D-PBS主要用于胚胎学方面的研究，多用于胚胎的冲洗液、冻存液和培养液。NaCl 0.8gKCl 0.02gNa2HPO4 0.115gKH2PO4 0.02gCaCl2.2H2O 0.0133gMgCl2.6H2O 0.01gD-glucose 0.1g溶解至100 ml ddH2O中，过滤除菌。胰酶（0.125%）胰酶 0.25gEDTA 0.02gPBS(1) 200 ml4过夜，0.22 um微孔滤膜过滤，分装。摇菌时抗生素浓度氨苄工作浓度50 ug/mL，配50 mg/mL的，用时稀释1000倍卡那工作浓度30 ug/mL，配30 mg/mL的，用时稀释1000倍pH4.75 50 mmol/L的醋酸缓冲液（含4 mM EDTA）：取27.22克NaAcH2O溶于1000 ml蒸馏水，即为0.2M NaAc，用冰醋酸配制0.2 M醋酸，然后取410 ml 0.2M HAC和590 ml 0.2M NaAc混匀，测pH值调到pH4.75，然后每1000 ml溶液加入5.95g EDTA-Na2溶解即可。此溶液为200 mM pH4.75的醋酸缓冲液，EDTA为16 mM。使用时将该溶液1：4稀释（1份该溶液加3份蒸馏水）即成50 mM pH4.75 50 mmol/L的醋酸缓冲液，含4 mM EDTA。刺激缓冲液：在100 ml MEM培养基中加入IBMX 0.0111 g，加入MgCl2 6H2O 0.2033 g，70加热溶解约1 h，至无絮状漂浮物。冷却至37 备用。双抗的配制：1. 所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。 2.具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。1单位1微克。可分别取4ml青链霉素配成混和液，这样青链霉素的浓度各为10