茵陈蒿汤对庆大霉素抗菌作用的影响.doc

茵陈蒿汤对庆大霉素抗菌作用的影响摘要 目的：探讨茵陈蒿汤是否干预庆大霉素的抗菌作用，为临床上的用药提供依据。方法：体外实验是用浸有不同药剂（即庆大霉素、茵陈蒿汤、庆大霉素混和茵陈蒿汤）的圆纸片法进行大肠杆菌的培养，观察是否有抑菌圈及不同药剂所形成的抑菌圈的不同来得出结论。如体外实验结果为阳性，再进一步进行体内实验。体内实验中，先制作家兔急性胆管炎的模型，再分别用庆大霉素、茵陈蒿汤、庆大霉素和茵陈蒿汤相结合进行治疗，观察治疗效果得出结论。结果：庆大霉素注射液抑菌效果最好（即浸有庆大霉素的圆纸片所在的象限中完全没有大肠杆菌生长），而庆大霉素与茵陈蒿汤混合同用后抑菌效果降低（即浸有庆大霉素和茵陈蒿汤混合液的圆纸片周围只形成了极小的环形抑菌圈）。茵陈蒿汤没有抑菌的作用（即在只浸有茵陈蒿汤的圆纸片周围完全没有抑菌圈，布满了细菌）。结论：茵陈蒿汤能干预庆大霉素的抗菌作用。 关键词 茵陈蒿汤；庆大霉素很多人认为中药中没有什么有毒成分，而且和西药一起使用没有什么毒副作用，应该没有什么大的影响。随着对中药研究的深入，我们越来越的发现中药在使用中的禁忌，特别是中西药同用时所出现的问题。有研究表明，中药有一定程度的抑菌作用，而且有些中药和抗菌素一起使用，会影响抗菌素的抗菌作用。我们觉得有必要通过实验来进行论证。因此，我们选取了庆大霉素与茵陈蒿汤这组药物进行实验。据不完全研究表明，茵陈蒿中所含茵陈色原酮对庆大霉素的抗菌作用有拮抗的影响，但没有具体的研究数据和记录。故我们试图通过体外实验和体内实验两方面进行，探讨茵陈蒿汤是否干预庆大霉素的抗菌作用，为临床上的用药提供依据。1 材料与方法1.1 动物：成年家兔只（来源：学校实验动物中心）1.2 实验器材1.2.1 药品牛肉膏蛋白胨培养基：由学校实验室提供。茵陈蒿汤： 茵陈162g, 栀子81g，生大黄54g ；共297g生理盐水：由上海华源长富制药有限公司生产，批号为0408036 大肠杆菌溶液：为1.5107个菌数/ml庆大霉素注射液：2ml:万单位：由上海中西制药有限公司生产1%戊巴比妥钠溶液：3ml/kg1.2.2 器材高温灭菌锅，37度的培养箱，培养皿（4个），涂菌棒（1根），电子称（1台），滴管（3支） 手术器械：手术刀（4把），组织剪（4把），眼科镊（16把），止血钳（16把），持针钳（4把），缝合针，缝线，动脉夹（8把），玻璃分针（6根） 注射器(1ml的8支)1.3 实验方法1.3.1制备茵陈蒿汤的步骤。取茵陈162g，栀子81g，生大黄54g ；共297g用适量蒸馏水浸泡1小时，然后煎煮。先大火烧开，后文火烧40分钟，到出药液，再加水煎煮。水开后，文火烧20-30分钟，将2次药液用纱布过滤。将药液转移至水浴锅中，100水浴, 挥干至297ml，得到生药含量为100%的茵陈蒿汤溶液。1.3.2体外实验：（1）从297ml茵陈蒿汤药液中提取70ml，浓缩至7ml，另作圆纸片浸液备用（圆纸片均已消毒）。 （2）培养基的制备将已配制的培养基加热，熔化，均匀地铺于4个平板上，待凝固后即成培养基。 （3）将滤纸片分别浸入：.生理盐水.庆大霉素溶液（ml） .茵陈蒿汤ml的浓缩液.庆大霉素和茵陈蒿汤混合液（庆大霉素ml,茵陈蒿汤4ml），一小时后取出纸片，分开置于培养箱中烘干。（2），（3）步在无菌室内完成。（4） 取出大肠杆菌冷冻液，室温培养24h待用（5）涂菌取一接种环的大肠杆菌溶液，均匀地涂于培养基表面。重复制作四个平板。（6）用记号笔将培养皿底均匀分成4个象限，各为四分之一圆的面积，并作标记I，II，III，IV。（7）将已烘干的滤纸片取出若干（每种片），转移至序号相对应的象限内，培养基放入培养箱内，培养24h。1.3.3 体内实验：(1)动物分组：4只家兔分为四组，分别标记、。(2)手术方法：家兔急性胆管炎模型的制备：参照李仪奎主编的中药药理实验方法学1991年6月出版，P477478，兔急性化脓性胆管炎造模法A.家兔称重。B.麻醉：在家兔的耳缘静脉内注射1%戊巴比妥钠溶液，剂量为3ml/kgC切开、分离和止血：a. 家兔腹部被毛 b. 在腹中线上（剑突下开始）切一纵行的切口，约34cm。切开时用左手拇指和食指撑平皮肤，刀刃与切开的组织要垂直，组织要逐层切开。 c. 切开腹腔后，进行钝性分离，用盐水纱布推开肝叶，牵引胆囊，分离总胆管。注意用纱布保护腹腔。 d. 在切开、分离过程中所造成的出血用灭菌纱布或棉球压迫出血部位。对于较大血管的出血，可用动脉夹。D.注射菌液和结扎：a. 在总胆管紧靠十二指肠处穿线做双道结扎。 b. 向胆囊内注射大肠杆菌菌液0.1ml。 c. 在针头退出胆囊前，用止血钳夹住针尖下面的组织，带针头退出后，用缝合线绕过止血钳所夹住的部位进行结扎，以防出现胆汁性腹膜炎。E.缝合：缝合腹膜、皮下组织和皮肤。缝合前要彻底止血，并清除缝合口内的血凝块及游离组织。 手术后四组家兔分别给药治疗：为静脉注射生理盐水，为肌内注射庆大霉素（0.2ml/kg）,同时用茵陈蒿汤灌胃（3.3ml/kg）,为灌胃茵陈蒿汤，为肌内注射庆大霉素注射液。2 实验结果2.1 体外实验 第一次：在所做的四个平板中都出现生理盐水抑菌圈范围最大现象，庆大霉素其次，庆大霉素与茵陈蒿汤的混合液再次，茵陈蒿汤无抑菌作用。讨论：结果与理论不符合。考虑可能的因素有：所使用的生理盐水是实验室中剩余的，可能已被污染圆纸片在浸过药液后再经过烘干，可能会影响实验结果。仅用接种环涂菌无法使培养基表面均匀地铺上薄薄的一层大肠杆菌。重新进行体外实验：(1) 将200ml茵陈蒿汤浓缩至40ml备用(2) 省去烘干浸药圆纸片的步骤，只是将纸片从药液中取出时稍捋去些过多的液体，使纸片不至于太湿使其在培养皿中滑动。(3) 分别在各培养基表面滴入0.1ml的大肠杆菌悬溶液，并用涂菌棒将菌液涂布均匀。(4) 重新开启一瓶生理盐水。其余步骤皆与第一次相同。 第二次的结果：所在象限序号圆纸片所浸药液圆纸片周围抑菌圈面积（mm2）平板A平板B平板C平板D生理盐水无无无无庆大霉素注射液5805.86(半径为43mm)5538.96(半径为42mm)6644.24（半径为46mm）6079.04（半径为44mm）茵陈蒿汤溶液无无无无庆大霉素注射液和茵陈蒿汤的混合液113.04（半径为6mm）160.77(半径为8mm)但其中五分之一的圆中有细菌209.33(半径为10mm)但只形成了三分之二的抑菌圈153.86(半径为7mm)（注：培养皿的底面直径为90mm，可知其底面积基本为6358.5 mm2，3.14；以上所得的抑菌圈的面积均包括了圆纸片的面积，圆纸片的半径为3mm）综合表格中的数据来看：在标记为的象限中，即贴有浸生理盐水的圆纸片的象限中均匀地生长着一层大肠杆菌菌落，说明在培养基内生长的大肠杆菌量较适宜。在标记为的象限中情况与前者基本相同，说明茵陈蒿汤并无抑菌效果。经初步计算：1.庆大霉素抑菌圈面积的平均值为6017.03 mm2，平均半径为43.75mm，其方差为2.1，说明四块平板之间的差异不大。2.庆大霉素和茵陈蒿汤混合液的抑菌圈面积为159.25mm2，平均半径为7.75mm，其方差为2.2，说明四块平板之间的差异不大。以上两者的抑菌圈面积有显著差异。 在标记为的象限中，整个象限中完全没有细菌生长，说明庆大霉素抑菌的效果最为明显。庆大霉素与茵陈蒿汤的混合液抑菌效果没有单用庆大霉素的好，在标记为的象限中，以圆纸片的圆心为中心，在其周围形成平均半径为7.75mm的抑菌圈，除去纸片的面积（注：圆纸片的半径为mm），其实际的抑菌区域为平均宽度为4.75mm的环形，有一半的环形是不完整的，即没有形成完整的抑菌圈。虽然号和号纸片中含有相同量的庆大霉素溶液，但是号纸片中同时含有一定量的茵陈蒿汤溶液，说明茵陈蒿汤会影响庆大霉素的抗菌作用。2.2 体内实验号肌注庆大霉素的家兔术后存活天：月日下午时手术完毕。月日中午时见其巩膜黄染，阻塞性黄疸造模成功。月日上午时其巩膜黄染消退。其余三组家兔在月日手术后，均于月日上午死亡。3 讨论3.1 体外实验在体外实验中，我们一共进行了两次，第一次的结果完全与理论不符合，故在改进的基础上进行了第二次实验。第二次实验结果发现作为抑菌剂的庆大霉素注射液抗菌效果最好，符合它作为静止期快速杀菌剂的特点。而它与茵陈蒿汤混用后，抑菌效果降低，可推测茵陈蒿汤能干预庆大霉素的抗菌作用。3.2 体内实验庆大霉素有抗菌作用，可治疗家兔实验性急性化脓性胆管炎。可能号家兔的胆总管结扎不牢，松脱，胆汁引流再通，所以黄疸消退。由于其余三只家兔都在小时内死亡，所以今后需要进一步增加实验样本量重复此实验，以深入研究。4 结论 体外实验证实茵陈蒿汤能干预庆大霉素的抗菌作用。体内实