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文档简介

动物细胞的原代培养 组织块法 无菌室 下风口 上风口 液氮罐 安全柜 着装 操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手 然后用1 新洁尔灭浸泡消毒5分钟 将小白鼠断颈处死 然后用75 酒精或1 新洁尔灭浸泡消毒 迅速进入无菌室 将小白鼠置超净工作台上 打开腹腔 用眼科剪和镊 将肾外膜剪破 并将其剥向肾门 去肾外膜及脂肪 剪碎组织 接种组织块 移入培养箱中 注意贴有组织块的一面朝上 静止2 3小时 然后将细胞培养瓶轻轻翻转 继续静止培养 观察 24 48小时后若培养液变成黄色且混浊 表示已被污染 若培养液变成紫色 一般细胞生长不好 则培养液pH过高 若培养液显为橙黄 橘红且清澈 一般显示细胞生长良好 在相差显微镜下观察 若此时见细胞自组织边缘长出 继续培养3 5日 再换部分或全部培养液 待多数组织块的生长晕相接 小心挑掉组织块 继续培养3 4天 细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养 骨髓瘤细胞的培养 骨髓瘤细胞 消化数分钟 中止消化 吹散细胞 收集细胞 离心 计数 细胞传代 37 5 CO2培养 小鼠的免疫实验 市售绵羊血 血球计数板计数 调整细胞浓度 抓小鼠的方法 腹腔注射免疫 尾静脉免疫 皮下免疫 足垫免疫 脾脏免疫 1 所需器具 称重 脾脏免疫 2 注射麻药 脾脏免疫 3 打结固定小鼠 脾脏免疫 4 酒精消毒 去毛 碘酒消毒 脾脏免疫 5 剪开外皮 剪开腹膜 找到脾脏 脾脏免疫 6 注射抗原 脾脏免疫 7 注射双抗 缝合伤口 每隔15天重复注射作加强免疫 共重复2次 第三次免疫之后10天 将小鼠断尾取血 用ELISA方法 检测血
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