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文档简介

实验三质粒DNA的转化 转化 将外源DNA分子导入到受体细胞 宿主细胞 使之获得新的遗传特性的过程 实验原理 宿主细胞 大肠杆菌 E coli DH5a菌株 感受态 细胞处于容易吸收外源DNA的状态 质粒 是存在于细菌染色体以外的小型环状双链DNA 能自主复制和表达其携带的遗传信息 TRV2 PDS质粒图谱 质粒的转化原理 将对数生长期的细菌置于0 CaCl2低渗溶液中 菌细胞膨胀成球形 感受态细胞 外源DNA分子在此条件下与Ca2 结合形成抗DNA酶的羟基 钙磷酸复合物粘附在细菌表面 经42 短暂热激处理 使细胞膜通透性增大 促进细胞吸收DNA复合物 单菌落 克隆 转化子的筛选 含Kan的选择性培养基 已转化的细菌 工程菌 能在含Kan的选择性培养基上生长并形成菌落 克隆 而未转化的细菌则不能生长 培养皿 实验流程 注意事项 1 感受态DH5 细菌很脆弱 加入TRV2质粒5 l后 要轻轻旋转混合 禁止剧烈振摇或吹打 2 42 水浴90秒 时间和温度要准确 中途不能摇动离心管 注意事项 3 无菌操作要严格 防止外界细菌污染 4 细菌铺板密度不能过高 倒置培养时间不能过长 12 16h内 思考题 转化实验中在含Kan的选择性培养基上实验组出
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