MS培养基配方

ms培养基母液的配制：20 ms大量元素 (1 l) ：38 g kno3， 33 g nh4 no3， 8.8 g cacl 22h2o，7.4 g mgso47h2o，3.4 g kh 2po4 。200ms微量元素 (1 l)： 0.166 g ki， 1.24 g h 3bo3 ，4.46 g mnso44h2 o，1.72 g znso47h2o， 0.05 g na2moo42h2o，0.005 g cuso4 5h2o， 0.005 g cocl26h2o。200ms维生素和氨基酸 (1 l) ：20 g 肌醇， 0.1 g烟酸， 0.1 g 盐酸吡哆醇(vb6) ，0.02 g盐酸硫胺素 (thiamine hydrochloride, vb1)，0.4 g甘氨酸。200ms 铁盐(1 l)： 5.56 g feso 47h2o， 7.46 g na 2edta2h2 o，先溶于500 ml ddh2o，加热，调ph至 5.5 ，定容至 1 l 。注意：配制大量元素母液时， 为避免产生沉淀， 要用纯度高的重蒸馏水溶解， 药品采用分析纯。 化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合， 混合时需注意边搅拌边混合。 cacl22h2o要在最后单独加入，在溶解 cacl22h2o 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 co2，以防沉淀。配制铁盐母液时， feso4 和 na2-edta 应分别加热溶解后混合， 并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色 ( 约加热 20-30 min) ，调 ph 值至 5 .5 ，室温放置冷却后，再冷藏。使用上述配好的母液，按照稀释倍数，配制基础 ms培养液：1ms大量元素， 1ms微量元素， 1ms维生素和氨基酸， 1ms铁盐，蔗糖 30 g/l ，定容后调节 ph 至 5.8 ，高温高压灭菌。固体培养基含植物凝胶 3.5 g/l 或 琼 脂 9 g/l 。另 ms 基 本 培 养 基 可 用 murashige and skoog basal salt mixture (sigma-aldrich) 快速配制。播种方法：将烟草种子在自然条件下进行浸种处理（无菌水中浸泡 100h），自然晾干后依次用酒精（ 70%）和汞（ 0.1%）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤 3-5 次，彻底清除残留于种子表面的汞。将消毒后的种子在无菌条件下播于 ms固体培养基上，放入 (25 2) 的光照培养箱中培养。培养 30d 后取样测定。配制培养液 :精品资料1. 溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖 30 g，放入1 000 ml 的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 ml，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 ml ，搅拌均匀2. 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤3. 调 ph 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/l的 naoh溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，一直到培养基的ph 为 5.84.培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。分装时， 先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 ml或 100 ml)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5 1/4 。每 1 000 ml 培养基，可分装25 30 瓶。高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。第一， 码放锥形瓶。 将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，间放一块玻璃板隔开。再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶要用牛皮纸封口) ，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kpa、121.3