论文实例：重组卡介苗诱导t细胞免疫应答的分子、细胞机理研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/4论文实例重组卡介苗诱导T细胞免疫应答的分子、细胞机理研究作者简介焦新安，男，1964年09月出生，1997年02月师从于扬州大学刘秀梵教授，于1999年12月获博士学位。摘要牛结核分枝杆菌BCG是世界上广泛使用的疫苗，亦被认为是表达与传递外源抗原的理想活载体之一，然而迄今对BCG或重组BCG与宿主免疫系统相互作用机理尚未阐明，而从免疫调节生物学角度探讨BCG或RBCG诱导T细胞应答的规律亦未涉足。为此，本研究以表达大肠杆菌麦芽糖结合蛋白的RBCG为模型，以期阐明RBCG与抗原提呈细胞相互作用的规律、RBCG表达产物抗原表位多样性、RBCG和BCG诱导的T细胞应答规律与调控因素。1重组卡介苗表达的MALE蛋白T细胞表位的鉴定在体外抗原提呈试验中，证实RBCGMALE成功表达MALE蛋白的四种T细胞抗原表位，即P6882、P100114、P151165和P277291。T细胞增殖试验和ELIOT试验结果均表明这种表达是功能性的，RBCGMALE可刺激小鼠精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/4产生MALE蛋白及其多肽特异的T细胞增殖和IFN应答。表位作图显示，BCG表达的MALE未形成新的抗原表位或使隐蔽表位暴露出来，并进一步证实MALEP6882多肽表位是MALEH2D限制性主要T细胞表位，而P100114、P151165和P277291多肽表位为次要表位。本研究结果表明，作为表达和运送外源抗原的BCG载体，它功能性地表达了外源抗原MALE蛋白，并能向宿主免疫系统有效地传递，这进一步证明BCG是一种优良的疫苗载体。2重组卡介苗感染早期树突细胞的作用具有抗原提呈细胞功能的吞噬性细胞，通过刺激T细胞应答可促进细菌清除，从而在抵抗细菌感染中起重要作用。巨噬细胞是胞内寄生菌的优选宿主细胞，并贮存大量的抗原物质，而树突细胞却是非常强势的APC。然而在体内针对细菌的T细胞应答中，这两种有吞噬活性的细胞之作用还未阐明。为此，本研究以RBCGMALE为材料，对M和DC诱导抵抗细菌的T细胞应答中的相对作用进行了探讨。在小鼠IV接种RBCGMALE12小时后，脾脏M和DC的感染率相当，但在来自体内的体外试验中，用针对MALE蛋白的特异T细胞杂交瘤仅测出DCS表面存在免疫原性的MALE多肽/MHC复合物，而M却没有。同样，在RBCGMALE感精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/4染后，仅在DCS观察到CD40、B71和B72分子表达水平升高，并分泌IL12P40，因而首次证实DC在激发针对分枝杆菌T细胞应答中的关键作用。进一步试验还显示，脾脏DCCD8和CD8亚群在体内是相同势能的APC，但IL12的产生主要来自CD8亚群。这表明在RBCG感染早期，DC在体内条件下不仅在针对分枝杆菌获得性免疫中发挥主导作用，而且还通过分泌IL12在自然免疫中起重要作用。研究中还首次发现，RBCG在其感染早期能在DC中存活，但数量没有增长。鉴于DC提呈RBCG抗原能力的迅速丧失，表明除M外DC亦是RBCG或BCG感染早期的贮存宿主细胞。这些结果为BCG感染与免疫机理提供了新认识，对结核病控制有重要价值，同时，为以BCG作载体研制新型疫苗提供了重要理论依据。3表达MALE重组卡介苗诱导T细胞应答的动力学应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏中CD4和CD8T细胞后，在ELIOT试验中证实，RBCGMALE诱导的T细胞应答是CD4T细胞依赖的。对MALE、D特异T细胞应答的动态分析结果表明，MALE、BCGWT诱导的特异CD4T细胞应答存在TH1/TH2平衡转换现象，即起始阶段为TH1应答，一段时间后出现TH2应答，并逐步形成精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/4TH1/TH2混合应答。在此基础上，进一步分析了RBCGMALE诱导针对MALE不同T细胞表位的应答规律，结果发现，随着感染与免疫过程的发展，针对MALEP6882和P277291的特异T细胞应答从起初的TH1应答向TH1/TH2混合类型变迁，非常有趣的是，针对P100114的特异T细胞应答呈现典型的TH1/TH2平衡转换，而针对P151165的T细胞应答仅是TH2类型，而且在免疫后较长时间才出现。这些结果不仅进一步验证RBCGMALE诱导的T细胞应答规律，而且还揭示MALE蛋白不同T细胞表位的功能多样性。此外，研究中证实RBCG不同表达构建产生的MALE及其表达量亦直接影响它们诱导免疫应答的质和量。这些结果亦为