第10章巴比妥与苯并二氮杂卓类镇静药物分析

第十章巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析 AnalysisofBarbituretiesand 广西医科大学 药物分析教研室 Contents 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 环状丙二酰脲类化合物 一 基本结构 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 典型药物 Phenylbarbital barbital 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 Secobarbital 戊巴比妥 Pentobarbital 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 一 基本结构 酰胺键的水解 酸性 与醛加成反应 侧链反应 双键 苯环 络合反应 与金属离子反应 紫外吸收 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 二 主要性质 性状 白色结晶或结晶性粉末溶解度 微溶或极微溶于水 易溶于乙醇等有机溶剂钠盐易溶于水 难溶于有机溶剂 1 弱酸性 pKa 7 3 8 4 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 一级电离 二级电离 烯醇互变 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 2 水解反应 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌 须制成粉针剂 临用时溶解 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 3 与金属离子反应 a 与银盐的反应 巴比妥类药物分子结构中含有酰亚胺基团 在碳酸钠溶液中生成钠盐而溶解 因而可与硝酸银反应 广西医科大学 药物分析教研室 白色难溶性二银盐 与银盐的反应 用这种形式表示也是一样的 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 3 与金属离子反应 b 与铜盐的反应 巴比妥类药物在吡啶溶液中生成烯醇式异构体 可与吡啶试剂反应形成稳定的配位化合物 产生类似双缩脲的呈色反应 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 3 与金属离子反应 b 与铜盐的反应 巴比妥类 铜吡啶 显色 巴比妥类 紫色或紫色沉淀 硫巴比妥类 绿色 广西医科大学 药物分析教研室 水 吡啶 部分离子化 有色配位化合物 与铜盐的反应 用这种形式表示也是一样的 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 c 与钴盐的反应 Co NO3 2 CoO Co Ac 2 异丙胺 无水甲醇或乙醇 广西医科大学 药物分析教研室 d 与汞盐的反应 一 基本结构与主要性质 巴比妥类药物 汞盐 白色 可溶于氨试液 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 4 香草醛反应 Vanillin 戊巴比妥鉴别 取戊巴比妥10mg 加香草醛约10mg和硫酸2ml 混合后在水浴上加热2min 显棕红色 放冷 小心加入乙醇5ml 即显紫色并变成蓝色 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 5 紫外吸收光谱特征 240nm 255nm A H2SO4液 0 05mol L 未电离 B pH9 9缓冲液 一级电离 C pH13NaOH液 1mol L 二级电离 1 5 5 三取代巴比妥类药物不存在二级电离 最大吸收波长不变 广西医科大学 药物分析教研室 一 基本结构与主要性质 硫代巴比妥的紫外吸收光谱A HCl液 0 1mol L B NaOH液 0 1mol L 6 薄层色谱行为特征 广西医科大学 药物分析教研室 7 显微结晶 一 基本结构与主要性质 药物本身晶形 反应产物晶形 广西医科大学 药物分析教研室 二 鉴别试验 一 丙二酰脲类的鉴别试验 取供试品约0 1g 加碳酸钠试液1ml与水10ml 振摇2min 滤过 滤液中逐滴加入硝酸银试液 即生成白色沉淀 振摇 沉淀即溶解 继续滴加过量的硝酸银试液 沉淀不再溶解 取供试品约50mg 加吡啶溶液 1 10 5ml 溶解后 加铜吡啶试液1ml 即显紫色或生成紫色沉淀 银盐反应 铜盐反应 广西医科大学 药物分析教研室 二 测定熔点 二 鉴别试验 巴比妥类的钠盐 酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点 三 利用特殊取代基或元素的鉴别试验 利用不饱和取代基的鉴别试验 司可巴比妥钠 利用芳环取代基的鉴别试验 苯巴比妥钠 硫色素反应 硫代巴比妥类 广西医科大学 药物分析教研室 二 鉴别试验 1 司可巴比妥钠的鉴别 I2 褪色 Br2 KMnO4 广西医科大学 药物分析教研室 二 鉴别试验 2 苯巴比妥的鉴别 a 硝化反应 b 硫酸 亚硝酸钠反应 苯巴比妥与NaNO2 H2SO4反应生成橙黄色 橙红色 c 甲醛 硫酸反应 苯巴比妥与甲醛 H2SO4反应生成玫瑰红色环 区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物 广西医科大学 药物分析教研室 二 鉴别试验 3 硫代巴比妥类的鉴别 硫色素反应 硫代巴比妥类与巴比妥类的区别 以前 广西医科大学 药物分析教研室 三 特殊杂质试验 一 苯巴比妥 广西医科大学 药物分析教研室 三 特殊杂质试验 广西医科大学 药物分析教研室 三 特殊杂质试验 1 酸度 中间体 乙酰化不完全时 与尿素缩合产生的杂质 苯基丙二酰脲 酸性较强 检查方法取本品0 20g 加水10ml 煮沸搅拌1min 放冷 滤过后 取滤液5ml 加甲基橙指示液1滴 不得显红色 广西医科大学 药物分析教研室 2 乙醇溶液澄清度 三 特殊杂质试验 检查中间体 等乙醇中不溶物 取本品1 0g 加乙醇5ml 加热回流3min 溶液应澄清 3 中性或碱性物质 提取重量法 溶解度差异 副产物 2 苯基丁酰 胺 脲或分解产物不溶于NaOHT S 而溶于醚 广西医科大学 药物分析教研室 含量测定 银量法Argentometry 酸碱滴定法Acid basetitrationmethod 紫外分光光度法uv 广西医科大学 药物分析教研室 一 银量法 Argentometry 巴比妥类药物在适当的碱性溶液中 易与重金属离子反应 并可定量地形成盐 因而可用银量法进行滴定 在滴定过程中 可以通过生成沉淀进产生的混浊指示滴定终点 但容易出现误差 改用甲醇及3 的无水碳酸钠溶剂系统 采用Ag 玻璃电极系统电位法指示终点 方法改善 为chp2010所用 四 含量测定 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 一 银量法 Argentometry 指示电极 Ag 参比电极 玻璃 甘汞 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 二 溴量法 溴过量 再用KI反应 再用硫代硫酸钠滴定 司可巴比妥钠测定 取本品约0 1g 精密称定 置250ml碘瓶中 加水10ml 振摇使溶解 精密加溴滴定液 0 05mol L 25ml 再加盐酸5ml 立即密塞并振摇1min 在暗处静置15min后 注意微开瓶塞 加碘化钾试液10ml 立即密塞 摇匀后 用硫代硫酸钠滴定液 0 05mol L 滴定 至近终点时 加淀粉指示液 继续滴定至蓝色消失 并将滴定结果用空白试验校正 每1ml溴滴定液 0 05mo1 L 相当于13 01mg的C12H17N2NaO3 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 三 酸碱滴定法 Acid basetitrationmethod 水 乙醇混合溶剂中滴定胶束水溶液中滴定非水滴定法 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 1 水 乙醇混合溶液 广西医科大学 药物分析教研室 2 胶束水溶液 四 含量测定 正胶束 溴化十六烷基三甲基苄铵Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide CTMA氯化四癸基二甲基苄铵Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride TDBA 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 3 非水滴定法 溶剂 二甲基甲酰胺 甲醇 丙酮 三氯甲烷 无水乙醇 苯 吡啶 甲醇 苯 乙醇 三氯甲烷滴定剂 甲醇钠 钾 氢氧化四丁基胺指示剂 麝香草酚蓝 也可以用电位法指示终点 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 四 紫外分光光度法 直接测定的UV法提取分离后的UV法 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 注射用硫喷妥钠含量测定 取装量差异项下的内容物 混合均匀 精密称取适量 约相当于硫喷妥钠0 25g 置500ml量瓶中 摇匀 量取此溶液用0 4 NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5 g的溶液 另取硫喷妥对照品 精密称定 加0 4 NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5 g的溶液 用1cm吸收池 于304nm波长处分别测定吸收度 以0 4 NaOH溶液作空白 根据每支的平均装量计算 每1mg的硫喷妥钠相当于1 091mg的C11H19N2NaO2S 广西医科大学 药物分析教研室 四 含量测定 USP24法测定苯巴比妥含量 巴比妥类药物适量 加水使其溶解后 加酸酸化 用三氯甲烷提取巴比妥类药物 三氯甲烷提取液加入pH7 2 7 5的缓冲液 振摇 分离弃去水相缓冲液层 再用氢氧化钠自三氯甲烷中提取巴比妥类药物 调节碱提取液的pH值 然后选用相应的吸收波长进行测定 提取后的UV分光光度法 消除干扰 广西医科大学 药物分析教研室 五 HPLC法五 体内药物分析 广西医科大学 药物分析教研室 第二节苯并二氮杂卓类药物的分析 地西泮 diazepam 七元亚胺内酰胺环 奥普唑仑 奥沙西泮 Oxazepam 氯氮卓 Chlordiazepoxide 2 官能团与分析方法 二氮杂卓环为七元环 环上氮原子具有碱性 苯基的取代使碱性降低 可与生物碱试剂反应 可进行非水滴定法测定 本品多为游离碱 不溶于水 而溶于甲醇 乙醇和氯仿中 定量 UV吸收 用于含量测定 环比较稳定 在强酸性下水解 形成相应的二苯甲酮衍生物 可用于鉴别和比色测定 氯氮卓水解生成芳伯胺基 地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸 鉴别 芳伯胺基反应 氯氮卓水解生成芳伯胺基 重氮化偶合反应鉴别 茚三酮反应 地西泮水解生成甘氨酸 茚三酮反应 鉴别 硫酸荧光反应 本类药物 加硫酸 在紫外灯下 呈荧光鉴别 含有氯元素 氧瓶燃烧 广西医科大学 药物分析教研室 理化性质 通常为白色或微黄色结晶或结晶性粉末 具有一定的熔点 一般不溶或极微溶于水 溶于丙酮或三氯甲烷等有机溶剂 具有弱碱性 水解性 UV吸收特性 广西医科大学 药物分析教研室 第二节苯并二氮杂卓类药物 一 鉴别试验 一 化学鉴别试验1 沉淀反应氯氮卓橙红色沉淀阿普唑仑 KBiI4盐酸氟西泮也生成橙红色沉淀氯硝西泮放置后 沉淀颜色变深 因此可以相互区别 阿普唑仑 遇硅钨酸白色沉淀 药典中也用于鉴别 广西医科大学 药物分析教研室 第二节苯并二氮杂卓类药物 2 水解后呈芳伯胺反应氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液 1 2 缓缓加热煮沸 放冷 加亚硝酸钠和碱性 萘酚试液 生成橙红色沉淀 后者放置后颜色变暗 广西医科大学 药物分析教研室 地西泮ChP 2005 鉴别 2 取本品20mg 用氧瓶燃烧法 附录 C 进行有机破坏 以5 氢氧化钠溶液5ml为吸收液 燃烧完全后 用稀硝酸酸化 并缓缓煮沸2分钟 溶液显氯化物的鉴别反应 附录 3 分解产物的反应本类药物多为有机氯化合物 用氧瓶燃烧法破坏 生成HCl 以5 氢氧化钠溶液吸收 硝酸酸化 显氯化物反应 Ch P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别 广西医科大学 药物分析教研室 广西医科大学 药物分析教研室 第二节苯并二氮杂卓类药物 4 硫酸 荧光反应 苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸 稀硫酸在紫外光 365nm 下显不同的颜色 广西医科大学 药物分析教研室 5 UV 第二节苯并二氮杂卓类药物 广西医科大学 药物分析教研室 取本品 加硫酸甲醇溶液 1 36 制成每1ml中约含10ug的溶液 照紫外 可见分光光度法 在239nm 284nm与360nm的波长处有最大吸收 在239nm与284nm处的吸光度比值为1 95 2 50 UV法 盐酸氟西泮 BP2005 IR法 氯硝西泮 BP2005作为该品种唯一的鉴别方法 IR法一般是USP首要的鉴别手段 广西医科大学 药物分析教研室 红外吸收光谱 已用于地西泮 阿普唑仑 艾司唑仑 盐酸氟西泮 氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别 广西医科大学 药物分析教研室 第二节苯并二氮杂卓类药物 四 TLC与HPLC 硅胶G薄层板 苯 丙酮 3 2 为展开剂 稀硫酸喷雾 105 干燥30min 紫外灯下检视荧光斑点 s m w分别表示荧光的强 中 弱 广西医科大学 药物分析教研室 有关物质检查其检查方法除了采用GC法 三唑仑 TLC法HPLC 特殊杂质检查 广西医科大学 药物分析教研室 1 地西泮中有关物质的检查地西泮在合成过程中因其副反应 可能引入N 去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质 可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查 2 氯氮卓中有关物质的检查USP 24 用TLC法检查氯氮卓中的有关物质 并规定其分解产物2 氨基 5 氯 2 苯甲酮含量不得过0 01 中间体7 氯 1 3 二氢 5 苯基 2H 1 4 苯并二氮杂卓 2 酮 4 氧化物含量不得过0 1 TLC法 广西医科大学 药物分析教研室 3 氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法色谱条件 色谱柱为250mm 2 6mm i d C18柱 n 3000 流动相为甲醇 磷酸液 0 05mol L 60 40 40 氢氧化钠溶液调pH为6 0 流速为1ml min 紫外检测器波长为254nm 检测结果 氨基物 的tR为12 0min 氧化物 的tR为4 3min 痕量杂质 的tR为13 8 3 6 4 7min 广西医科大学 药物分析教研室 HPLC 广西医科大学 药物分析教研室 Test 盐酸氟西泮中氟化物的检查 对照品溶液 精密称取NaF221mg 置100ml量瓶中 加水20ml使溶解 加NaOH溶液 1 2500 1ml 加水稀释到刻度 摇匀 贮于密封的塑料容器内备用 每1ml相当于1mg的F 供试品溶液 取本品1g 精密称定 置100ml量瓶中 加枸橼酸钠缓冲液 pH5 25 溶解并稀释到刻度 摇匀 电位法 氟离子选择电极 广西医科大学 药物分析教研室 测定法 取对照品溶液适量 加枸橼酸钠缓冲液 pH5 25 分别制成每1ml中含1ug 3ug 5ug和10ug的溶液 另取供试品溶液 置150ml塑料瓶中 在搅拌下 用装有氟离子选择电极和SCE系统的电位计 测定上述各溶液的电位 根据不同的氟离子浓度 ug ml 和相应电位值 mv 用半对数坐标纸绘制标准曲线 根据测得的供试品溶液电位 在标准曲线上求得氟离子含量 含量不得过0 05 为何要加枸橼酸盐缓冲液 广西医科大学 药物分析教研室 第六节含量测定 非水溶液滴定法非水酸量法非水碱量法紫外分光光度法对照品法吸收系数法高效液相色谱法 广西医科大学 药物分析教研室 第六节含量测定 一 非水溶液滴定法 当HA酸性较强时 反应不能定量完成 必须除去或降低HA的酸性 使反应顺利地完成 游离碱类盐 被置换出的弱酸 广西医科大学 药物分析教研室 第六节含量测定 供试品 冰醋酸 10ml 30ml 若供试品为氢卤酸盐再加5 醋酸汞的冰醋酸液3ml 5ml 结果 HClO4滴定 空白试验校正 指示剂 碱性溶液pKb 10 冰醋酸中滴定突跃不明显 需加入醋酐 使碱性增强 突跃更明显 广