去甲斑蝥素纳米粒药代动力学LC-MSMS代谢物论文.doc

去甲斑蝥素纳米粒药代动力学LC-MS/MS代谢物论文：PVP包衣去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒的制备及动物体内药动学研究【摘要】 目的本文研制了一种新颖的剂型PVP包衣去甲斑蝥素-壳聚糖纳米粒(polyvinylpyrrolidone-coated norcantharidin chitosan nanoparticles, PVP-NCTD-NPs)，以提高去甲斑蝥素(NCTD)的生物利用度以及降低其肾毒性;同时建立高效液相色谱(HPLC)法和高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定生物样品中NCTD浓度，旨在研究PVP-NCTD-NPs在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，为其进一步研究与开发提供科学依据。方法(1)等温吸附法考察载体壳聚糖(CS)浓度、NCTD浓度以及pH等因素对包衣纳米粒载药特性的影响，推断其吸附规律;原子力显微镜(AFM)验证纳米粒形态学特征。(2)正交设计优化PVP-NCTD-NPs的制备;动态激光散射法测定平均粒径与粒度分布;红外光谱(FT-IR)、X-射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)对其进行表征;并考察纳米粒在体外不同pH介质中的释药性质。(3)大鼠血液中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的建立及药代动力学研究：以高氯酸和甲醇双重沉淀生物样品中蛋白质，多重反应离子(. 更多还原【关键词】 去甲斑蝥素; 纳米粒; 药代动力学; LC-MS/MS; 代谢物;中文提要4-6Abstract6-8引言14-23一. 去甲斑蝥素简介14-15二. 缓、控释靶向制剂简介15-19三. 血药浓度监测方法学研究进展19-22四. 确定本课题的主要考虑22-23第一章 PVP 包衣去甲斑蝥素纳米粒吸附机制研究23-33仪器与试药23-24方法与结果24-32一、 去甲基斑蝥素 HPLC 体外分析方法的建立24-251. 色谱条件242. 标准曲线243. 精密度24-254. 回收率25二、 吸附方式的探讨25-321. 纳米粒的制备方法252. 两种加入药物方式25-263. 吸附因素的考察26-32讨论与小结32-33第二章 PVP 包衣去甲斑蝥素-壳聚糖纳米粒的制备与优化33-43仪器与试药33-34方法与结果34-41一、 纳米粒制备的工艺优化34-401. PVP-包衣纳米粒的制备方法342. 纳米粒的质量评价34-353. 单因素优化纳米粒的制备工艺35-384. 正交设计优化纳米粒制备工艺38-40二、 优化的纳米粒制备工艺40-411. 优化的制备工艺402. 优化工艺制备的纳米粒的质量评价40-413. 回收率的测定41讨论与小结41-43第三章 纳米粒的体外释放特性及其表征43-50仪器与试药43方法与结果43-49一、 纳米粒胶体的体外释放43-45二、 纳米粒冻干粉的体外释放45-46三、 纳米粒结构的表征46-491. 红外光谱(FT-IR)分析462. X-射线衍射(XRD)分析46-473. 差示扫描量热(DSC)分析47-484. PVP-NCTD-NPs 的扫描电镜图(SEM)485. PVP-NCTD-NPs 的原子力显微镜图(AFM)48-49讨论与小结49-50第四章 PVP-NCTD-NP 在大鼠体内的药动学研究50-59仪器与材料50-51方法与结果51-58一、 体内含量测定方法的建立51-551. 色谱与质谱条件512. 标准品与内标溶液的配制513. 血浆样品处理与测定514. 标准品的质谱分析51-525. 标准曲线的制备52-536. 方法专属性考察53-547. 回收率及精密度考察54-55二、 实验设计及统计学处理55-581. 实验设计552. 药物浓度-时间曲线55-563. 药动学参数的计算以及模型拟合56-58讨论与小结58-59第五章 PVP-NCTD-NP 在小鼠体内分布及肝靶向作用59-66仪器与试药59-60方法与结果60-64一、 体内含量测定方法的建立60-611. 标准品储备液的配制602. 生物样品的处理方法603. 分析方法的专属性604. 标准曲线的制备60-615. 回收率与精密度61二、 组织分布研究61-641. 实验设计612. 组织分布图61-623. 靶向性研究62-64讨论与小结64-66第六章 NCTD 在大鼠体内排泄和代谢物研究66-78仪器与试药66-67方法与结果67-76一、 体内含量测定方法的建立67-701. 标准品储备液的配制672. 生物样品的处理方法673. 标准品的质谱分析67-684. 分析方法的专属性685. 标准曲线68-706. 回收率与精密度70二、 体内排泄物的分析70-721. 实验设计70-712. 累积排泄率-时间曲线71-72三、 体内代谢物分析72-761. 实验设计722. 代谢物质谱分析72-76讨论与小结76-78第七章 PVP-NCTD-NPs 在大鼠肝微粒体中代谢研究78-88仪器与试药78-79方法与结果79-87一、 大鼠肝微粒体的制备79二、 Lowry 法测定肝微粒体蛋白浓度79-811. 溶液的配制79-802. 检测波长的确定803. 标准曲线的制备80-814. 回收率与精密度815. 大鼠肝微粒体样品中蛋白浓度测定81三、 NCTD 在大鼠肝微粒体中含量测定方法的建立81-831. 标准溶液的配制81-822. 温孵条件823. 生物样品的处理方法824. 分析方法的专属性825. 标准曲线的制备826. 回收率与精密度82-83四、 NCTD 在大鼠肝微粒体中代谢酶动力学83-8