《高三生物复习资料》实验1-大肠杆菌的培养和分离

选修1 生物技术实践 微生物的利用 酶的应用 果酒的制作 泡菜的腌制 植物组织培养 选修1 生物技术实践 实验1大肠杆菌的培养与分离实验2分离以尿素为氮源的微生物实验4果汁中的果胶与果胶酶实验6 淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测实验8果酒及果醋的制作实验10泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定实验11植物的组织培养 浙科版 人教版 第一部分微生物的利用 一 微生物的类群 微生物是指结构简单 形体微小的单细胞 多细胞或没有细胞结构的低等生物 包括病毒 原核生物 原生生物和某些真菌 大约有10万种微生物 多数微生物对人类是有益的 任务1 请将中学阶段涉及的微生物进行分类 T2噬菌体 烟草花叶病毒 流感病毒 HIV病毒 劳氏肉瘤病毒大肠杆菌 乳酸菌 枯草杆菌 醋酸杆菌 肺炎双球菌 霍乱弧菌 幽门螺旋菌 放线菌 支原体 蓝细菌 酵母菌 青霉菌 黑曲霉 食用菌草履虫 变形虫 伞藻 绿藻 金鱼藻 衣藻 结构 细胞壁细胞膜细胞质拟核 特殊的结构 二 细菌 单细胞原核生物 形态 杆形 球形 弧形 螺旋形 荚膜鞭毛芽孢 主要成分是肽聚糖 可被某些溶菌酶水解 青霉素能抑制其合成 唯一的细胞器 核糖体 质粒 小型的环状DNA分子 控制抗药性等性状 由一个大型的环状DNA反复折叠缠绕而成 控制着细菌的主要遗传性状 细菌生长到一定阶段产生的一种抗逆性很强的休眠体 具厚壁 以度过不良的环境 主要成分为多糖 与其致病性有关 由蛋白质组成 与运动有关 主要以二分裂方式进行 细菌的繁殖方式 菌落可以作为菌种鉴定的重要依据 菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖形成的肉眼可见 有一定形态结构的细胞群 单菌落 单个细菌在固体培养基上大量繁殖形成的独立的单个菌落 细菌的鉴定 菌落和单菌落 异养需氧型异养厌氧型自养需氧型自养厌氧型 大多数细菌的代谢类型属于什么方式 在生态系统中处于什么地位 分解者或消费者 生产者 菌落在生态学上属于什么单位 大肠杆菌是革兰氏阴性 兼性厌氧的肠道杆菌 实验1大肠杆菌的培养和分离 由于易培养 繁殖快 被广泛用于基因工程 如何扩大培养 如何从可能污染的菌群中分离大肠杆菌并保存 革兰氏染色 细菌经紫色的革兰氏染液染色后 再用酒精脱色 可把细菌分为两大类 仍被染成紫色的即为革兰氏阳性菌 G 和脱去染色的为革兰氏阴性菌 G 这两种细菌的差别在于细胞壁的成分不同 知识要点 培养基的分类和成分无菌技术 消毒 灭菌两种分离纯化的方法 培养基的分类和成分 根据物理性质分类 根据培养基的用途分类 如何分离固氮菌 分离自养型微生物 培养基的分类和成分 培养基是适合微生物生长繁殖的营养基质 一般包括水 无机盐 碳源 氮源 生长因子 糖类 葡萄糖 蔗糖 淀粉等 蛋白质 核酸类 牛肉膏 蛋白胨 花生粉饼 明胶 氨基酸等 牛肉膏 蛋白胨 尿素 氨基酸等 酵母提取液 豆芽汁类 维生素 酶 碱基等 蔗糖等有机物 氨基酸等小分子有机物 维生素类 生长素 细胞分裂素 培养不同的微生物 所需成分 酸碱度不同 细菌喜荤 霉菌喜素 细菌中性偏碱 霉菌中性偏酸 灭菌是指用强烈的理化方法 杀死一定环境中所有微生物的细胞 芽孢和孢子 消毒是指用较为温和的理化方法 杀死部分微生物 不杀死芽孢和孢子 1 煮沸消毒法 100 煮沸5 6min 一般物品 2 巴氏消毒法 70 75 煮30min 不耐高温的液体 如牛奶 3 化学药剂消毒法 70 75 酒精 擦拭双手 1 灼烧灭菌法 酒精灯火焰 接种环 操作时试管口 2 干热灭菌法 160 170 1 2h 其他金属工具 3 高压蒸汽灭菌法 1kg cm2的压力下 121 15min 培养基及试管 培养皿 三角瓶等 如果培养基中有葡萄糖 为防止葡萄糖分解碳化 可在90 以上 500g cm2压力 的高压蒸气锅中灭菌30min 4 紫外线和过滤风灭菌 超洁净工作台 5 过滤灭菌法 G6玻璃砂漏斗 尿素溶液 无菌技术 消毒 灭菌 无菌操作的要求 1 各种器皿必须是无菌的 2 各种培养基必须是无菌 3 转移操作的过程及其它环境也应是无菌的 为什么要灭菌 若混有杂菌 将与菌种形成竞争关系 影响菌种的生长或不能分离到所需的微生物 在培养微生物时必须进行无菌操作 培养基的配制 高压蒸汽灭菌 称量 溶化 调pH 分装 大肠杆菌的LB液体培养基 步骤1 大肠杆菌的LB培养基配制及相关器具和培养基的灭菌 加封口膜 超净台灭菌 酒精消毒桌 手 酒精灯旁操作 步骤2 细菌以 二分裂 的方式繁殖 约20min分裂一次 在液体培养基进行扩大培养 步骤3 用划线分离法进行分离纯化 LB固体培养基需加琼脂1克 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 步骤4 划线分离法需要制作固体培养基 倒平板 超净台的环境下操作 在冷却到60 时倒平板 两种分离纯化的方法 划线分离法 涂布分离法 划线分离法 1 划线分离法 方法 用烧红后冷却的接种环蘸取带菌的液体培养物 在固体培养基的平板上划线 原理 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少 并逐步分散开来 经培养后 可在平板表面得到单菌落 2 涂布分离法 方法 将培养的菌液稀释 通常稀释10 5 10 7倍 取0 1mL稀释度不同的菌液 加在培养皿的固体培养基上 用玻璃刮刀涂布在培养基的平面上 然后进行培养 在某个稀释度下 可培养得到相互分开的菌落 通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适 划线分离法 方法简单 涂布分离法 单菌落更易分开 但操作复杂些 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法 也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 划线分离法 涂布分离法 实验小结 操作细节的思考 一 实验内容1 用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌 2 在固体平面培养基上划线进行分离 二 操作细节1 倒平板时 为什么需使锥形瓶瓶口通过火焰 接种操作为什么要在火焰旁进行 空气中存在有大量的微生物 而接种灯的火焰旁能形成一个无菌的区域 在这里操作 可以避免杂菌的污染 2 如何使接种环冷却后再挑取菌体 为什么要冷却 让环先接触培养基上未长菌的部位 使环冷却 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 为什么在划线分离法操作时 第一步要灼烧接种环 为了避免接种环上可能存在的微生物造成污染 4 若用分离划线的方法 为什么每次划线前都要灼烧接种环 为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使一次划线时 接种环上的菌种直接来自上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目减少 以便得到单菌落 5 为什么在划线操作结束时仍需灼烧接种环 及时杀死接种环上残留菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 6 进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置 恒温培养时 培养基中的水分会以水蒸汽的形式蒸发 倒放培养皿则会使水蒸汽所凝结的水滴留在盖上 如果正放培养皿 则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开 则菌落中的菌会随水扩散 菌落间相互影响 很难再分成单菌落 达不到分离的目的 在酒精灯火焰旁 将单菌落用灭菌的接种环取出 用划线法接种在斜面上 37 恒温培养箱中培养24h后 置于4 冰箱中保存 7 分离纯化后的大肠杆菌如何保存 9 实验完成后 接触过细菌的器皿应如何处理 所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤 特别是培养基 使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃 8 接种斜面画线时要注意什么 1 由里向外画 2 线条要细且密 3 不要重复划线 4 不要画破培养基 不要接触到管壁或管口 下列关于微生物培养基的说法中 正确的是A