pH缓冲液及配制.doc

此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除【引用】常用pH缓冲溶液的配制和pH值2011-05-13 20:01:24|分类：生物|字号订阅本文引用自DSC常用pH缓冲溶液的配制和pH值) 整理：zfg序号溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与25.0 ml 0.2 mol/L KCl混合均匀后，加水稀释至100 ml1.72氨基乙酸-盐酸在500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g，加480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至1 L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至100 ml3.65邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至1 L5.47磷酸二氢钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml8.09氯化铵-氨水把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2：1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢氧化钠把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml12.013氯化钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制（文章来自： 医药园 () 整理：zfg） （一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP）和实验试剂（Laboratory reagent，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。21/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO42H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。3按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO4pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.88.092.07.166.690.17.272.028.06.012.287.87.376.884.77.480.881.47.522.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.837.562.57.943.556.58.049.64.26.955.444.68.297.03.07.098.02.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH0.15Mol/L Na2HPO4（ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。Na2HPO412H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaH2PO4H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。NaH2PO42H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。（四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法pH0.2 Mol/L Na2HPO4（ml）0.2Mol/L NaH2PO4（ml）5.88.092.06.012.381.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.8Mol/L Na2HPO42 H2O溶液35.61g/L Na2HPO412 H2O溶液含71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含27.60g/L NaH2PO42 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2） NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4 1.15g（如为Na2HPO412H2O，则为2.89g） KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。) 整理：zfg1硼酸（3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。2硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）pH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.41.09.07.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥缓冲液1pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液 巴比妥钠 47.6g 蒸馏水 3 000ml 1.17N HCl 55.0ml （1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水） 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。 加1.17 N HCl 55ml。 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。 2pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml 3pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液 巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）pH0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）233723379.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（TrisHCl缓冲液）不同pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 TrisHCl缓冲液配制法 pH0.2Mol/LTris(ml)0.1MHCl(ml) pH0.2Mol/LTris(ml)0.1MHCl(ml)233723379.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222502552545.08.148.002525.025三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制pH8.0磷酸缓冲液 0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml 0.1N NaH2PO4 5.50ml 混合即可29份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hanks液1贮存液 NaCl 80.00g KCl 4.00g Na2HPO412 H2O 1.52g KH2PO4 0.60g 葡萄糖 4.00g 0.4酚红液 50.00ml 双馏水加至 100.00ml115高压灭菌15min，冰冻保存。2工作液 贮存液 1份 双馏水 9份115高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（Nesslers reagent）配方1：氯化汞 6.0g 碘化钾 12.4g 20NaOH 30ml 加蒸馏水至 100ml配方2：碘化汞 11.5g 碘化钾 8g 蒸馏水 50ml （完全溶解后）过滤，加20NaOH 50ml。 用途：检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsevers）液 葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.80g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml 溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称SP液或双抗液） 青霉素（40万U） 5支 链霉素（200万g） 1支 分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10-20冰箱保存备用（1万单位g/ml）。 临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾 150g 蒸馏水 300ml 浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。配方2：浓硫酸 50% 蒸馏水 50% 重铬酸钾 5%此为中等强度洗液。配方3：重铬酸钾 100g 蒸馏水 1 000ml 加热溶解，冷却后缓慢加入 工业硫酸 100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。10.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）试剂： NaH2PO4?2H2ONa2HPO4?12H2O配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。（1） 0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4?12H2O 31.2g(或 NaH2PO4?H2O 27.6g)加二次水至1000ml溶解。（2） 0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.?12H2O 71.632g（或 Na2HPO4?7H2O 53.6g或 Na2HPO4?2H2O 35.6g）加二次水至1000ml溶解。（3） 0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4?12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.47.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。20.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）试剂：0.2mol/L PB 50mlNaCl 8.59g(约0.15mol/L)二次水 至1000ml配制方法：称取NaCl 8.59g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加二次水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.257.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。3Karasson Schwlts磷酸盐缓冲液试剂： NaH2PO4?H2O3.31gNa2HPO4?7H2O33.77g二次水 至1000ml配制方法：同前该缓冲液主要用于配制Zambonis固定液。40.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl 约420ml二次水 至1000ml配制方法：先以少量二次水（300500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加二次水至1000ml。此液为储备液，于4冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。5Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered,Saline,TBS）试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液100mlNaCl 3.59g(0.15mol/L)二次水至1000ml配制：先以二次水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加二次水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。6Tris-TBS(PBS)试剂：Triton X-100 10ml(1%)或3ml(0.3%)0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6） 1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)NaCl 8.59g二次水至1000ml配制方法：先以二次水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加二次水至1000ml，充分摇匀。该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。0.01M PBSPBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)PBS缓冲液（pH7.27.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.5 6.55.8 92 8 5.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19ml 81ml7.5 16 847.6 13 877.7 10.5 90.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.70.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH 7.6 7.4 7.2 7.0H2O 1000 1000 1000 1000NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。PBST缓冲液取300l Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次PH8.0的PBS配方详细1. NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制： 甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液 ：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸 馏水至1000ml ; 乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。 将甲乙液分装在棕色瓶内，于4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI5.29 2.5 97.55.59 5.0 95.05.91 10.0 90.06.24 20.0 80.06.47 30.0 70.06.64 40.0 60.06.81 50.0 50.06.98 60.0 40.07.17 70.0 30.07.38 80.0 20.07.73 90.0 10.08.04 95.0 5.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。1、哪种浓度的酒精消毒效果最好？75%酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在35分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（95100%）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。2、试剂的等级有哪些？根据化学试剂的纯度，按杂质含量的多少可分为四级：一级试剂为优质纯试剂，通常用GR表示；二级试剂为分析纯试剂，通常用AR表示；三级试剂为化学纯试剂，通常用CR表示；四级试剂为实验或工业试剂，通常用LR表示。此外，根据特殊的工作目的，还有一些特殊的纯度标准，例如光谱纯、荧光纯、半导体纯等。使用时应按不同的实验要求，选用不同规格的试剂。3、固体试剂的溶解知多少？较大的固体颗粒溶解前，应该先粉碎固体。固体的粉碎是在洗净和干燥的研钵中进行的。研钵中所盛固体的量不要超过研钵总容量的三分之一。溶解固体时，常用搅拌，加热等方法来加快溶解速度。搅拌液体应手持搅拌棒并转动手腕，转动速度不要太快，也不要使搅拌棒碰在器壁上。搅拌试管中的液体时，搅拌棒可以转动，也可轻轻上下搅动，但不要用力过大，以免将试管弄破。还可用振荡试管的方法代替搅拌。加热以加速固体溶解的方法与加热液体时相同，即一般有直接加热方法和水浴加热方法等。要视被加热物质的稳定性，而选用不同的加热方法。另外还要注意在容器上盖表面皿，以防止液体蒸发。4、下面这些你注意了吗？称量试剂的天平应保持清洁、干燥，避免潮湿及腐蚀性气体的侵蚀。在进行称量操作时，被称取的试剂应置于称量纸上或其它器皿内，不可在盘中直接称量。在配制强酸、强碱溶液或接触有毒性药物时，应严格按操作规程进行。如稀释硫酸时，应谨慎的将浓硫酸缓缓倾注水中，切不可把水倒入浓硫酸中。在配制药物溶液时，某种动物注入药液的最大容量决定所配药物溶液的浓度。如静脉注射药液容量过大，可影响其循环系统的正常功能。故静脉注射容量最好在体重的1/100以下；静脉外（皮下、肌肉及腹腔）注射容量最好在体重的1/40以下；因此，可根据动物的体重，选择所配药物溶液的适当浓度。在配制药物溶液时，应考虑到实验动物内环境的稳定性以及动物离体器官或组织在实验条件下的正常功能。应力求达到与血液及体液呈等渗与等张以及等pH值和离子平衡状态，应使用生理盐水配制（温血动物用0.9NaCl，冷血动物用0.6NaCl）。离体器官灌流液或营养液因用量大，应严格计算渗透压、pH值与各种离子浓度，有时还要考虑营养成分如葡萄糖的含量等，根据动物离体器官的不同而使用不同的生理溶液。5、常用的抗凝剂有哪些？肝素（Heparin）肝素的抗凝血作用很强，常用来作为全身抗凝剂，特别是在进行微循环方面动物实验时的肝素应用更有重要意义。纯的肝素10mg能抗凝100ml血液（按1mg等于100个国际单位，10个国际单位能抗凝1ml血液计）。如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大23倍。用于试管内抗凝时，一般可配成1%肝素生理盐水溶液，取0.1ml加入试管内，加热80烘干，每管能使510ml血液不凝固。作全身抗凝时，一般剂量为：大鼠2.53mg(200300g体重)-1，兔或猫10mgkg-1，狗510mgkg-1。如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大23倍。草酸盐合剂配方：草酸铵 1.2g草酸钾 0.8g福尔马林 1.0ml蒸馏水加至 100ml配成2%溶液，每1ml血加草酸盐2mg（相当于草酸铵1.2mg，草酸钾0.8mg）。用前根据取血量将计算好的量加入玻璃容器内烤干备用。如取0.5ml于试管中，烘干后每管可使5ml血不凝固。此抗凝剂量适于作红细胞比容测定。能使血凝过程中所必须的钙离子沉淀达到抗凝的目的。枸橼酸钠常配成3%8%水溶液，也可直接用粉剂。枸橼酸钠可使钙失去活性，故能防止血凝。但其抗凝作用较差，其碱性较强,不适作化学检验之用。一般用1：9（即1份溶液，9份血）用于红细胞沉降和动物急性血压实验（用于连接血压计时的抗凝）。不同动物，其浓度也不同：狗为6%，猫为2%+硫酸钠25%，兔为5%。草酸钾每1ml血需加1-2mg草酸钾。如配制10%水溶液，每管加0.1ml则可使5-10ml血液不凝固。bioshow2008-12-25 13:441、30%丙烯酰胺(1)配制方法：将29G丙烯酰胺和1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml，用Nalgene滤器（0.45um孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置之不理棕色瓶中保存于室温。（2）说明：小心丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具螺积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。2、10%过滤酸铵（1）配制方法：把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4 保存数周。3、1mol/L 氯化钙（1）配制方法：在20ml纯水中（Milli-Ce水或相当级别的水）溶解54g Cacl2 ? 6H2O用0.22um滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20 。（2）说明：制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45um孔径）过滤除菌，然后聚冷至0。4、1mol/L二硫苏糖醇（DTT）（1）配制方法：用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20 。（2）说明：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。5、0.5mol/L EDTA（pH8.0）（1）配制方法：在800ml水中加入186.1g=水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na ?2H2O ），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g Naoh颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。（2）说明：EDTA二钠盐需加入NaoH将溶液的pH值调至接近8.0时，才能完全溶解。6、10mg/ml溴化乙锭（1）配制方法：在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容光焕发器或转移至棕色瓶中，保存于室温。（2）说明：小心：溴化乙锭 是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应按附录E提供的方法之一进行净化处理。7、100mmol/L IPTG配制方法：IPTG为异丙基硫式- -D-半乳糖苷（分子量为238.3D），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22um滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20。8、1mol/L硫酸酶（1）配制方法：在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L，过滤杀菌。9、巯基乙醇（BME）（1）配制方法：一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4 ；（2）说明：BME或含有BME的溶液不能高压处理10、酚/氯仿（1）配制方法：一般得到的是14.4mol/L Tris ?Cl（pH7.6）抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/L Tris?Cl（pH7.6）液层，保存于4。（2）说明：小心，酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的皮肤部位应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。11、10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）（1）配制方法：用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20 ，如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。（2）说明：小心：PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸和，吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触3PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣服应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率高于4。pH值为8.0时，20umol/L的PMSF溶液的半寿期大约为35分钟（James，1978），这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。12、磷酸盐缓冲溶液（PB S）（1）配制方法：在800ml蒸馏水中溶解8g Nacl、0.2gKcl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，用HCL调节溶液的pH值至7.4加水定容至IL，在15 16f/in 2 （1.034 10 5 Pa ）高压下蒸汽灭菌20分钟，保存于室温。13、乙酸钾溶液（用于碱裂解）（1）配制方法：在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L，而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。14、3mol/L乙酸钠（1）配制方法：在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或同稀乙烯调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。15、5mol/L氯化钠（1）配制方法：在800ml水中溶解292.2g Nacl加水定容至1L，分装后高压灭菌。16、10%十二烷基硫酸钠（SDS）（1）配制方法：在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68 助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。（2）说明：SDS的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴口罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。17、20SSC