《实验一细胞形态》PPT课件.ppt

坎坎坷坷 细胞生物学实验生命科学学院 实验一细胞形态 细胞器的显微结构的观察 一 实验目的 1 了解普通光学显微镜的工作原理 掌握光学显微镜的使用方法 2 熟悉光学显微镜下细胞的基本形态与结构 二 实验原理 细胞是生物体的基本结构单位 构成生物机体的细胞是多种多样的 要对细胞进行研究 首先要从其形态结构人手 所以 要借助显微镜的成像及放大原理 在显微镜下 才能观察到细胞的基本形态结构 经物镜形成倒立实像 经目镜进一步放大成像 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数 还与显微镜的分辨力有关 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1 65 1 78 所用介质的折射率越接近玻璃的越好 对于干燥物镜来说 介质为空气 镜口率一般为0 05 0 95 油镜头用香柏油为介质 镜口率可接近1 5 普通光线的波长为400 700nm 因此显微镜分辨力数值不会小于0 2 m 人眼的分辨力是0 2mm 所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X 显微镜的分辨率 也称为分辨力 它是指能把两个物点辨清的最小距离 分辨距离越大 则分辨率越低 所以 分辨率是以分辨距离来表示的 其计算公式为 D 0 61 N AN A n sina 2式中D为分辨率 A为光波波长 n 介质折射率 镜口角 标本对物镜镜口的张角 N A 为物镜的数值孔径 镜口率 镜口角总是要小于180 所以sina 2的最大值必然小于1 在物镜上 有镜口率 N A 的标志 它反应该镜头分辨力的大小 其数字越大 表示分辨率越高 各物镜的镜口率如下表 物镜镜口率 N A 工作距离 mm 10 0 255 4040 0 650 39100 1 300 11显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积 公式为 M K1xK2焦点深度 显微镜调焦到看清标本某一点时 不仅是这一物点 而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度 看到标本的全厚度 必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察 厚标本和薄标本 4 5um 2um 基础知识 基础知识 三 显微镜概述显微镜是观察细胞的主要工具 根据光源不同 可分为光学显微镜和电子显微镜两大类 前者以可见光 紫外线显微镜以紫外光 为光源 后者则以电子束为光源 1 光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成 照明系统 包括光源和聚光器 光学放大系统 由物镜和目镜组成 是显微镜的主体 机械装置 用于固定材料和观察方便 包括镜台 载物台 调节器和 物镜转换器 旋转器 等 尼康E 600显微镜 数码互动显微镜 2 体视显微镜 可直接进行解剖及观察并具有正像立体感 3 荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片 微管呈绿色 微丝红色 核蓝色 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别 1 照明方式通常为落射式 即光源通过物镜投射于样品上 2 光源为紫外光 波长较短 分辨力高于普通显微镜 3 有两个特殊的滤光片 光源前的用以滤除可见光 目镜和物镜之间的用于滤除紫外线 用以保护人目 4 激光共聚焦扫描显微镜 具有高分辨率可进行显微断层扫描 LCSM照片蓝色为细胞核 绿色为微管 能观察活细胞 5 暗视野显微镜暗视野显微镜 darkfieldmicroscope 的聚光镜中央有当光片 使照明光线不直接进人物镜 只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜 因而视野的背景是黑的 物体的边缘是亮的 利用这种显微镜能见到小至4 200nm的微粒子 分辨率可比普通显微镜高50倍 6 相差显微镜 一种介壳虫的染色体 7 偏光显微镜 对于双折射物质进行结构研究 偏光显微镜 polarizingmicroscope 用于检测具有双折射性的物质 如纤维丝 纺锤体 胶原 染色体等等 8 微分干涉差显微镜 图像具有浮雕感 DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像 与相差显微镜相比 其标本可略厚一点 折射率差别更大 故影像的立体感更强 DIC显微镜下的硅藻 伪彩色 9 倒置显微镜 组织培养中长工作距离的 组成和普通显微镜一样 只不过物镜与照明系统颠倒 前者在载物台之下 后者在载物台之上 右图 用于观察培养的活细胞 具有相差物镜 10 显微操作技术 尼康NT 88NE显微操作 注射仪 四 实验用品 各种组织切片 五 实验步骤 一 显微镜的使用1 观察前的准备工作 1 观察者要养成显微镜镜检的工作习惯 观察时要双眼同时睁开 一边观察一边进行记录或描绘 2 观察时所用的材料 药品和各种器具要预先准备好 3 显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常 并对载物台 目镜 物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作 然后进行合轴调节 学生操作规程及注意事项一 观察前准备检查 底座右侧的光源亮度旋钮是否在 1 位置 即顺时针选到最底位 开机 1 打开后座主电源开关 绿色按钮2 打开后座CCD电源开关 红色按钮白平衡调整 不放切片 在10倍物镜下将电源调整到最亮 然后按底座右方的白平衡按钮 红色 3 5秒之后将光源亮度调回到适中状态 二 观察操作放上切片 将光源调到自己习惯的亮度 视度补偿 调节目镜双筒找到自己的瞳距 此时两眼镜下的图象重合在一起 横拉板上的数字 例如 64 就是自己的瞳距 然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置 调焦 将绿色光标移至视野中央 开始观察 如需提问 按呼叫按钮 三 下课时的操作1 将光源亮度调到最低 1 刻度 2 关掉红色CCD电源开关 再关绿色主电源开关 3 套上显微镜套 4 耳机及凳放整齐 瞳距调节 2 显微镜的调节 屈光度调节 调节 粗调松紧调节旋钮 聚光镜中心调节 孔径光栏调节 N A聚 0 6 0 8 N A物 孔径光