乳腺癌放射治疗的临床和实验研究

乳腺癌放射治疗的临床和实验研究,放射治疗在乳腺癌治疗中的作用,保乳手术后 根治术后 晚期及复发乳腺癌,存在的问题,疗程长达56周化疗与放疗的衔接问题,剂量分割研究的意义,减少照射的次数，缩短疗程，方便患者优化资源利用优化放疗与化疗安排,乳腺癌放射治疗的特点,术后亚临床灶，肿瘤负荷低乳腺癌细胞的/值可能较低乳腺癌的Tpot较长，约14天,论文第一部分,乳腺癌根治术后放射治疗的剂量分割方案的临床研究,1987年1月至1993年1月,术后放疗应用3种剂量分割方案,乳腺癌根治术或改良根治术后 367例,入组条件,术后放疗三种剂量分割方案,3个剂量分割方案组的临床特点(1),3个剂量分割方案组的临床特点（2）,3个剂量分割方案组的放疗部位,结果,局部区域复发率（照射野内）,Cox多因素回归分析照射野内复发的相关因素 腋窝淋巴结转移个数有显著意义 （P 0.0008） 年龄、剂量分割方法、病理类型、 有无化疗均无显著意义,5年无瘤生存率,正常组织放射反应,3个剂量分割方案的等效生物剂量(BED),讨论,300 cGy/次组的特点,隔日照射总的治疗时间未缩短每周治疗次数减少对患者和设备资源来说都有利,快速照射法的特点,快速照射组的总剂量较低。 缩短了疗程时间，为高危患者尽早开始化疗赢得了时间。 照射的次数比常规大大减少，减少了住院时间或门诊放疗的往返不便。,结 论,300 cGy/次、隔日照射的方法 与常规分割疗效相似,快速照射法有待进一步研究,支持乳腺癌/值较低的观点,论文第二部分,亚临床灶放射治疗的动物模型研究,研究目的,应用动物模型比较亚临床 灶放射治疗的剂量分割方案,近交系BALB/C雌性小鼠小鼠乳腺癌EMT6细胞株肿瘤体外的倍增时间12小时,动物模型,实验设计,肿瘤细胞接种肿瘤亚临床灶生长的病理观察 实验分组, 不同方案照射观察肿瘤形成率 、肿瘤控制率,EMT6细胞接种,照射的固定示意图,照射的剂量分割方案,结果,肿瘤形成外观图及解剖图,1. 亚临床灶病理观察 （1）,接种后第一天,接种后第二天,1. 亚临床灶病理观察（2）,接种后第三天,接种后第四天,1. 亚临床灶病理观察（3）,接种后第五天,接种后第六天,3.不同剂量分割方案的肿瘤形成率,各组肿瘤形成率两两比较的P值,3.不同剂量分割方案的肿瘤控制率,各组肿瘤控制率两两比较的P值,讨论,小鼠亚临床肿瘤照射的特点,对照组可以100%形成肿瘤几乎不存在乏氧问题肿瘤形成率和控制率作为终点指标可靠、易于评价,临床和实验动物快速照射的差距的原因分析,小鼠肿瘤细胞增殖明显较快疗程中休息一周，肿瘤加速再群体化,结 论,对于细胞倍增快的肿瘤而言加速超分割的疗效最好,隔日照射和常规照射的疗效相似,快速照射疗效最差,下一步的研究,多种肿瘤模型验证正常组织损伤的验证 裸小鼠移植瘤 模型验证,论文第三部分,CDK抑制剂Flavopiridol增加放射效应的实验研究,探讨放射增敏的必要性,现代放射治疗技术提高疗效有限肿瘤的分子靶向研究进展迅速,分子靶向药物 Flavopiridol,新合成的黄酮类生物碱 cdk1 (cdc2)、cdk2、cdk4、cdk7的强力抑制物 诱导G1期的阻滞 诱导凋亡 下调c-erbB2的表达,对上皮细胞系（前列腺、食管、肺、头颈部癌有细胞毒作用。已进行 I-II 期临床试验,分子靶向药物 Flavopiridol,实验路线,药物对于细胞生长的影响克隆形成实验：观察放射增敏效应观察对细胞周期的影响彗星法测定DNA的初始损伤及修复Western blot：相关蛋白的表达变化,实验材料,肿瘤细胞：973肺腺癌细胞系Flavopiridol：用DMSO配成10mM原液 照射条件：6 MV X线,实验1.对细胞生长的影响,75cm2培养瓶 每瓶细胞接种细胞数3105个 贴壁后加入不同浓度的Flavopiridol 每天取各浓度的培养瓶，细胞消化，计数共计数5天,Flavopiridol对于生长曲线的影响,实验2.放射增敏效应的研究,在培养瓶中接种细胞 24小时后加入Flavopiridol照射剂量0、1、2、3、5、7和10Gy 实验分组：对照组、单纯药物、单纯照射、照射药物，Flavopiridol浓度均为100 nM。14天后计数各组的克隆形成绘制细胞存活曲线,细胞存活曲线,1 单纯照射,2 照射flavopiridol,1,2,Flavopiridol对放射敏感性的影响,实验3. 对细胞周期的影响,实验分组：1. 单纯照射2. 单纯药物3. 照射加药物照射后12小时收集细胞 流式细胞仪检测,对照组,4Gy 照射后12小时,Flavopiridol 200nM + 4Gy照射后12小时,Flavopiridol 400nM + 4Gy照射后12小时,Flavopiridol和照射对于G2期的影响,实验4.慧星法检测DNA损伤,实验分组：1. 对照2. 单纯照射 6 Gy3. 单纯药物 200 nM4. 照射加药物照射后不同时间行彗星法检测 慧星的尾力距（Tail Moment, TM）为DNA损伤指标,Flavopiridol和照射对于DNA初始损伤的影响,对照组,单纯照射,Flavo加照射,图示：慧星法检测的结果,Flavo对于照射后DNA损伤修复的影响,实验5.相关蛋白测定,实验分组：1. 单纯照射 4Gy2. 单纯药物 200nM3. 照射加药物 4. 对照,实验5.相关蛋白测定,照射后12小时提取总蛋白Western blot测定: Tyr 15 cdc2 c-erbB2actin作为内对照,照射 药物照射+药物对照,Tyr 15 cdc2,c-erbB2,actin,结 论,Flavopiridol具有放射增敏作