医学遗传学 第七章基因突变ppt课件

1 第七章基因突变第一节基因突变的概说第二节基因突变与性状表现第三节基因突变的分子基础第四节生物体的修复机制第五节基因突变的检出 2 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 3 一 基因突变率 突变的概念 基因突变 genemutation 基因突变 genemutation 是指一个基因内部可以遗传的结构改变 是基因分子内部在某种条件作用下所发生的一个或几个核苷酸的改变 导致结构蛋白或酶的改变 从而影响有机体的大小 品质 颜色 结构和生长率等性状的改变 基因突变一般在染色体结构上是看不到的 所以又称点突变 pointmutation 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 4 5 突变体 mutant 或称突变型 由于基因突变而表现突变性状的细胞或个体 突变率 mutationrate 的估算突变率的估算因生物生殖方式而不同 有性生殖的生物 是用每一配子发生突变的概率 即用一定数目配子中的突变配子数表示 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 6 举例 玉米子粒7个基因的自然突变率 彼此各不相同 表7 1 高等植物中基因突变率为1 10 5 1 10 8 即在十万至一亿个配子中只有一个发生突变 可见自然突变的频率很低 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 7 表玉米子粒7个基因的自然突变率基因表现的性状测定配子数观察到的每百万个配子突变数中平均突变率R子粒色554 786273492 0I抑制色素的形成265 39128106 0Pr紫色647 102711 0Su非甜粒1 678 73642 4Y黄胚乳1 745 28042 2Sh饱满粒2 469 28531 2Wx非糯性1 503 74400 8 无性繁殖的细菌 用每一细胞世代中每一细菌发生突变的概率 即用一定数目的细菌在分裂一次过程中发生突变的次数表示 举例 大肠杆菌链霉素抗性基因strR为4 10 10乳糖发酵基因lac 为2 10 7细菌一般基因突变率为1 10 4 1 10 10 变异幅度很大 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 9 二 体细胞突变与生殖细胞突变1 体细胞突变克隆 clone 一个祖先细胞由无性繁殖而产生的相同细胞群体 体细胞突变常形成一个 突变体区 体细胞突变发生愈早 突变体区 愈大 体细胞突变不能遗传给后代 可通过有性途径传递 2 生殖细胞突变发生在种系中 可通过参与受精而传给下一代 10 二 基因突变的时期 时期在任何时期都可发生 即体细胞和性细胞都能发生突变 基因突变通常是独立发生的 体细胞和性细胞突变频率性细胞的突变频率比体细胞高 这是因为性细胞在减数分裂末期对外界环境条件具有巨大的敏感性 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 11 性细胞和体细胞突变的传递与表现 性细胞如果是显性突变aa Aa 可通过受精过程传递给后代 并立即表现出来 如果是隐性突变AA Aa 当代不表现 只有等到第二代突变基因处于纯合状态才能表现出来 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 12 体细胞显性突变 当代表现 同原来性状并存 形成镶合体 突变越早 范围越大 反之越小 果树上许多 芽变 就是体细胞突变引起的 一旦发现要及时扦插 嫁接或组培加以繁殖保留 芽变 在育种上很重要 有不少新品种是通过芽变选育出来的 如温州早桔就是源于温州密桔的芽变 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 13 表7 1玉米子粒7个基因的自然突变率基因表现的性状测定配子数观察到的每百万个配子突变数中平均突变率R子粒色554 786273492 0I抑制色素的形成265 39128106 0Pr紫色647 102711 0Su非甜粒1 678 73642 4Y黄胚乳1 745 28042 2Sh饱满粒2 469 28531 2Wx非糯性1 503 74400 14 基因突变的时期与表现 1 生物个体发育的任何时期均可发生 性细胞 突变 突变配子 后代个体 体细胞 突变 突变体细胞 组织器官 体细胞突变的保留与芽变选择 2 性细胞的突变频率比体细胞高 性母细胞与性细胞对环境因素更为敏感 3 等位 基因突变常常是独立发生的 某一基因位点发生并不影响其等位基因 一对等位基因同时发生的概率非常小 突变率的平方 4 突变时期不同 其表现也不相同 15 高等生物基因突变时期与性状表现 16 四 突变的类型1 根据突变的分子机理 突变可分为以下三种 转换 transition 指 分子中的嘌呤为另一种嘌呤或嘧啶为另一种嘧啶所取代而引起的突变 颠换 transversion 指DNA分子中的嘌呤被嘧啶取代或嘧啶被嘌呤取代所引起的突变 移码突变 frameshiftmutation 指 分子中插入或缺失一个或少数几个核苷酸 使整个阅读框改变而引起的突变 17 根据突变引起的表型特征 可将突变分为 形态突变 morphologicalmutation 或称可见突变 是泛指能造成外形改变的突变 致死突变 lethalmutation 是指能造成个体死亡的突变 致死突变型又可分为全致死突变型 以上死亡 亚致死突变 50 90 死亡 半致死突变 10 50 死亡 和弱致死突变 10 以下死亡 3 条件致死突变 conditionallethalmutation 指在一定条件下表现致死效应 而在其它条件下可以存活的突变 4 生化突变 biochemicalmutation 指没有形态效应 但导致某种特定生化功能改变的突变 18 与突变有关的几个概念 同义突变 samesenseorsynonymousmutation 指虽然基因已发生突变 但仍编码同一种氨基酸 这是因为密码子有简并性 无义突变 nonsensemutation 是指由于突变而使其某一编码子突变为终止密码子 UGA UAG UGG 错义突变 mis sensemutation 又称歧义突变 是指由于突变而导致多肽链上氨基酸的改变 大多数的突变属于此类 延长突变 elongationmutation 这是一类刚好与无义突变相反的突变 是由于终止密码子突变为编码子 使肽链延长 19 回复突变 backorreversemutation 是指由突变型四复为野生型的突变 抑制基因突变 suppressormutation 是指一个基因的突变表型可因另一基因的突变而发生改变 后一个基因就称为抑制基因 极性突变 polarityorpolarmutation 指操纵子中靠近操纵基因的结构基因发生突变 无义突变 除了影响它自身外 还将影响下游基因听编码的蛋白质的量 这种现象称为极性效应 这种突变就称为极性突变 20 五 基因突变的一般特征1 突变的重演性和可逆性2 突变的多方向性和复等位基因3 突变的有害性和有利性4 突变的平行性5 突变的稀有性 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 21 1 突变的重演性和可逆性 重演性同一突变可以在同种生物的不同个体间多次发生 称突变的重演性 表7 1列举玉米子粒的7个基因的前6个在多次试验中都出现过类似的突变 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 22 可逆性显性基因A可以突变为隐性基因a 反之亦可 通常把A a称为正突变 a A为反突变 通常用u表示正突变频率 v表示反突变频率 则 正突变uA a反突变v 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 23 正反突变的频率不一 一般正 反 即U V 原因野生型内基因座都可能发生突变 但回复只有已改变的基因再返回 第一节基因突变的概说一 基因突变率二 体细胞突变与生殖细胞突变三 基因突变的时期四 突变的类型五 突变的特征 24 2 突变的多方向性和复等位基因 多方向性A a1 A a1 A a2 A an 复等位基因 定义 位于同一基因座位上的各个等位基因 25 如上 A a1 a2 an彼此组成一对等位基因 它们全体组成复等位基因 复等位基因存在于同一类型的不同个体里如AA Aa1 a2a3 aman 举例玉米自交不亲和性有25个复等位基因 S1S2 S15 26 人类的ABO血型遗传三个等位基因IA IB iIA IB对i为显性 IA和IB无显性隐性关系 可各自发生作用 组成6种基因型和4种表现型表现型 血型 基因型AIAIA IABIBIB IBABIAIBOii 27 PO O血型AB O血型iiiiIAIBii 配子ii配子IAIBiF1iiO血型IAiIBiA型B血型 28 人类ABO血型的复等位基因人类红细胞表面抗原的特异性由3个复等位基因IA IB i决定 其中IA IB对i均为显性 IA IB间为共显性 3种基因两两组合可能形成6种基因型 4种红细胞表面抗原反应类型 如下表所示 其中用IO表示i 29 3 突变的有害性和有利性 有害性 大多数是有害的 致死突变例 植物的白化突变绿株WW 绿株Ww 1WW 2Ww 1ww3绿苗 1白苗 死亡 30 多数为隐性致死 recessivelethal 也有少数显性致死 dorminantlethal 伴性致死 sexlinkedlethal 即致死突变发生在性染色体上 致死突变一般不利 但也有利 如用于检测基因突变和控制 个体的平衡致死品系 31 中性突变控制一些次要性状基因 即使发生突变 也不会影响生物的正常生理活动 因而仍能保持其正常的生活力和繁殖力 为自然选择保留下来 称之 如水稻芒的有无等 32 突变的有害有利性的相对性突变有害性是相对的 在一定条件下可以转化 如矮杆雄性不育 对人或其他条件却有利 如落粒性 对生物有利 但对人不利 33 4 突变的平行性 定义亲缘关系相近的物种因遗传基础比较近似 往发生相似的基因突变 称突变的平行性 与瓦维洛夫提出 遗传变异的同型系 说一致 意义根据以上学说 当了解到一个物种或属内具有那些变异类型 就能预见近缘的其他物种或属也同样存在相似的变异类型 34 表7 2禾本科部分物种的品种 族 子粒性的变异遗传变异的性状黑小大燕黍高玉水冰麦麦麦麦梁米稻草白色 红色 颜色绿色 灰绿色 黑色 紫色 圆形 形状长形 玻璃质 品质粉质 蜡质 35 5 突变的稀有性正常情况下突变率很低 高等生物中的自发突变率 1 10 51 10 10细菌中的自发突变率1 10 44 10 10 36 第二节基因突变与性状表现一 显性突变和隐性突变的表现二 大突变和微突变的表现 37 一 显性突变和隐性突变的表现 显性突变表现早纯合慢 当代 第一代 就能表现 第二代能纯合 而检出纯合突变体则需到第三代 如图 体细胞显性突变 当代以嵌合体表现 要选出纯合体 须通过有性繁殖自交两代 38 显性突变的表现dd第1代 M1 Dd第2代 M2 1DD 2Dd 1dd第3代 M3 DD1DD 2Dd 1dddd 自交 自交 突变发生 39 隐性突变表现得晚纯合快 第二代表现 第二代纯合 检出在第二代 体细胞隐性突变 当代不表现 要使其表现只需有性繁殖自交一代 突变的表现与植物繁殖方式自花授粉作物 只要自交即可分离出来 异花授粉作物 要进行人工自交或互交 否则长期保持异质 40 隐性突变的表现DD第1代 M1 Dd第2代 M2 1DD 2Dd 1dd 自交 突变发生 41 二 大突变和微突变的表现 大突变突变效应表现明显 容易识别 质量性状的突变大都属之 42 微突变效应表现微小 较难察觉 数量性状的突变属之 微突变可以积累 大的变化微突变中出现的有利突变 大突变 所以微突变对育种有利 43 第三节基因突变的分子基础一 自发突变二 诱发突变三 诱发突变与人类癌症 44 一 自发突变在自然状况旧产生的突变 一 在DNA复制中造成错误1 错义突变 指DNA分子中碱基的替换 使蛋白质分子中某一种氨基酸转换为另一种氨基酸的突变类型 碱基替换有两种类型 转换 一个嘧啶碱取代另一个嘧啶碱 或一个嘌呤碱取代另一个嘌呤碱 这种置换方式称为转换 颠换 一个嘧啶碱取代另一个嘌呤碱 或一个嘌呤碱取代另一个嘧啶碱 这种置换方式称为颠换 例如人的正常血红蛋白 HbA 变成廉形红细胞贫血 HbS 以及地中海贫血 HbC 到人的血红蛋白的 链的第六位氨基酸一个碱基改变引起的基因突变 45 46 2 移码突变移码突变 在DNA链中插入或缺失一个或几个碱基引起阅读框改变 造成氨基酸改变或终止密码子位置改变 这种突变成为移码突变 现在知道低等生物大肠杆菌 噬菌体Mu 1 转座子就有插入DNA碱基序列之间引起移码突变 3 缺失和重复大片段的缺失和重复 超过几个碱基对 如E colir的lacI基因中4个碱基序列在野生型中重复了3次 47 48 二 自发损伤自然产生的对DNA的损伤引起的基因突变 1 脱嘌呤 碱基和脱氧核糖间的糖苷键受损 引起一个嘌呤从DNA上脱落 2 脱氨基 胞嘧啶脱氨基后变为尿嘧啶 形成G C对变为A T对 3 氧化性损伤碱基 活泼氧化物对DNA本身的氧化损伤 也能引起突变 49 HHAHCCTTAGTC 50 自发突变的原因 一 DNA复制错误 二 自发的化学变化1 脱嘌呤 depurination 2 脱氨 基 deamination 作用3 氧化作用损伤碱基 oxidativelydamagedbases DNA复制错误 脱氨基 51 二 诱发突变 一 物理因素诱变只限于各种电离辐射和非电离辐射1 电离辐射诱变 包括 射线 射线和中子等粒子辐射 还包括r射线和 射线等电磁波辐射 中子的诱变效果最好 根据辐射 照射 的方法 可分为 内 和 外 照射 52 外照射即辐射源与接受照射的物体之间要保持一定的距离 让射线从物体之外透入物体之内 在体内诱发基因突变 射线 r射线和中子都适用于 外照射 内照射即用浸泡或注射的方法 使其渗入生物体内 在体内放出 射线进行诱变 53 和 射线的穿透力很弱 故只能用 内照射 实际应用时 一般不用 射线 只用 射线 射线常用辐射源是P32和S35 尤以P32使用较多 电离辐射致变的机理照射 原发电离 次级电离 基因分子结构改组 基因突变 辐射剂量及表示方法 定义 单位质量被照射的物质所吸收的能量数值 称为辐射剂量 54 射线和r射线 用 伦琴 r 表示 即在1克空气中吸收83尔格 erg 辐射的能量 中子 单位是 积分流量 即每平方厘米的截面上通过的中子数 n cm2 射线 用 微居里 表示 具体是每克物质吸收多少 微居里 cu 的放射性同位素 微居里是放射强度单位 表示每秒钟有3 7 104个原子核发生蜕度 55 基因突变的频率与辐射剂量成正比 即剂量增加一倍 突变频率增加一倍 但突变率不受辐射强度的影响 辐射强度是指单位时间内照射的剂量数 即剂量率 倘若照射剂量不变 不管单位时间内所照射是多还是少 基因突变率总是保持一致 原理 物理激发 产生自由基和自由原子 造成核酸和蛋白质分子损伤 DNA或染色体变化 56 2 非电离辐射诱变 种类 UV 作用机理激发作用 离折 配对差错 突变主要是在相邻的两个碱基之间产生光生成物 嘧啶二聚体 如胸腺嘧啶二聚体 从而影响DNA的复制 适用微生物 配子 57 二 化学因素诱变 简史1941年Auerbach和Robson第一次发现芥子气可以诱发基因突变 1943年Oehlkers第一次发现氨基甲酸乙酯 NH2COO2H5 可以诱发染色体结构的变异 化诱的特点某些化学药物的诱变作用是有特异性的 即一定性质的药物能够诱发一定类型的变异 58 化诱物质的种类与作用机理 烷化剂 甲基磺酸乙酯 EMS CH3SO4 OC2H5 硫酸二乙酯 DES SO2 OC2H5 2 乙烯亚胺 EI 等 它们都有含有一个或多个不稳定的烷基 C2H5 这些烷基能移到电子密度较高的其他分子中去 这种通过烷基置换其它分子的氢原子的作用 叫做烷化作用 烷化剂就是通过这种烷化作用而改变基因的分子结构 从而造成基因突变 59 如甲基黄酸乙脂 EMS 氮芥 NM 甲基黄酸甲脂 MMS 亚硝基胍 NG 等 它们的作用是使碱基烷基化 EMS使G的第6位烷化 使T的第4位上烷化 结果产生的O 6 E G和O 4 E T分别和T G配对 导致G C对转换成A T对 T A对转换成C G 60 碱基类似物 5 溴尿嘧啶 Bu 5 溴脱氧尿核苷 BudR 2 氨基嘌呤 Ap 等 前二者是胸腺嘧啶 T 的类似物 后一种是腺嘌呤 A 的类似物 其作用机理是它们的分子结构与基因分子的碱基相似 它们在不妨碍基因复制的情况下作为组成基因的成分参入到基因分子中去 由于它们与碱基不同 它们会在复制时发生偶然配对上的差错 从而导致基因突变 61 如 5 溴尿嘧啶和T很相似 仅在第5个碳元子上由Br取代了甲基5 BU有 酮式 烯醇式两种异构体 可分别与A及G配对结合 62 抗生素 重氨丝氨酸 丝裂霉素C 它们具有破坏基因分子结构的能力 因而造成染色体的断裂 目前少用 诱变方式 妨碍DNA某一成分的合成 DNA结构变化 如5 氨基尿嘧啶 妨碍嘧啶的合成 如6 巯基嘌呤 妨碍嘌呤合成 碱基类似物替换DNA分子中的不同碱基 碱基对改变 碱基类似物 5 溴尿嘧啶 5BU 替换 直接改变DNA某些特定的结构烷化剂 烷基 与碱基结合 改变氢键的结合能力 T 烷基鸟嘌呤 TGT 腺腺嘧啶 AT GC AT的替换 63 三 生化突变1 红色面包霉的生化突变型Beadle红色面包霉的生化突变型 野生型 基本培养基 突变型 a 基本培养基 精氨酸 突变型 c 基本培养基 瓜氨酸 精氨酸 突变型 o 基本培养基 鸟氨酸 精 瓜 推理 红色面包霉在合成它生活所需物质时 要经过一系列的生化过程 而每一个系列化过程又由一定的基因所控制 64 根据以上实验 可以推论精氨酸的合成步骤与基因的关系大致为 o鸟氨酸c瓜氨酸a精氨酸 蛋白质由此可以看出 从鸟 精的合成至少需要A C O三个基因 其中一个基因发生突变 精氨酸是不会合成的 这个实验证明了基因与新陈代谢的关系 Beadle1941年根据这个实验研究 阐明基因是通过酶的作用来控制性状的 于是提出 一个基因一个酶 的假说 把基因与性状两者联系起来 65 几个基本概念 生化突变 由于诱变因素的影响导致生物代谢功能的变异 营养缺陷型 auxotroph 诱变而导致生物在特定的营养下才能生长 野生型或原养型 prototroph 2 红色面包霉生化突变的鉴定方法 66 1 2 3 4 5 11 10 9 8 6 7 12 13 14 15 8 维生素9 氨基酸12 硫胺素13 吡醇素14 泛酸15 肌醇 67 三 诱发突变与人类癌症AFB1 肝癌 UV 皮肤癌肿瘤抑制基因发生突变则会致癌现代生活中的致癌物 药品 化装品 食物防腐 杀虫剂 工业试剂等 现已发现有175种致癌剂 68 四 基因的人工定点突变 定点诱变 随着寡聚脱氧核糖核酸化学合成法的最新进展 应用合成的寡聚核苷酸片段作为诱变剂 诱发基因或DNA片段中特定的核苷酸发生突变的所谓定点突变技术 已成为研究基因结构与功能关系的最精确 最有效的手段之一 它可以根据人们的设计高频率地诱发某一特定的核苷酸部分发生突变 而且此发生突变的类型可以严格地取决于人们的预先设计 69 体外定点突变 1985年加拿大的MichaelSmith建立 于1993年获得了诺贝尔化学奖 具体方法有三种 1 聚核苷酸介导的用单链模板定点突变 2 双引物法定点突变 3 用掺入U的单链为模板进行聚核苷酸介导的体外定点突变 70 71 用Ames法检测诱变剂 72 1 载体法原理 M13载体法的原理是利用人工合成带突变位点的寡聚核苷酸作为引物 利用M13噬菌体载体系统合成突变基因 具体地说就是将待诱变的基因克隆在M13噬菌体载体上 另外 人工合成一段改变了碱基顺序的寡核苷酸片段 8 18bp 以此作为引物 在体外合成互补链 再经体内扩增基因 经此扩增出来的基因即是突变了的基因 73 74 2 法 法的原理也是利用人工合成带突变位点的诱变引物 通过 扩增而获得定点突变的基因或 片段 PCR定点诱变法可分为重组PCR定点诱变法和大引物诱变法两种 重组PCR定点诱变法 该方法是利用四种引物 三轮PCR反应来进行的 操作较为繁琐 大引物诱变法 该方法是利用三种引物 两轮PCR反应来进行的 75 76 第四节生物体的修复机制 1 DNA防护机制 1 简并密码子CUA UUA亮氨酸 2 回复突变 3 抑制 4 致死和选择 77 2 DNA的修复 1 光修复 2 暗修复 切除修复 3 重组修复 4 SOS修复 78 1 光复活作用 photoreactivation 经UV照射后的细菌等细胞如果暴露在可见光下时 存活数显然大于在黑暗中培养的同一处理物 这是因为细胞中含有一种可见光激活的酶 称光复合酶 这种酶可与经UV照射过的 的黑暗中结合 如果经可见光激活便可将二聚体分开来 同时酶脱离 光复活过程已在细菌 酵母 原生动物 哺乳动物乃至人类细胞中发现 79 80 2 暗复活 darkreactivation 又称切补修复 excisionrepair 所谓的暗复活是指修复 的损伤并不需要光的激活作用 而不是指修复过程必须在暗中进行 这一过程大约有四个酶参与 即首先由核酸内切酶的作用下在 损伤部位造成单链断裂 然后在核酸外切酶的作用下切除二聚体及周围的少数几个核苷酸 而后在DNApolI或 的作用下修补缺口 最后由连接酶连接成一个完整的 双链 81 82 3 重组修复 recombinationrepair 重组修复是在DNA复制的情况下进行的 所以又称复制后修复 过程大致是 带有二聚体的 单链仍可做为模板进行DNA复制 但是子代DNA链中在与二聚体对应的部位出现空隙 有缺口的子代DNA链与另一完整的母链进行重组 空隙由母链来的片段弥补而将空隙转移给母链 重组后 空缺已不再对着二聚体部位 而是面对着另一正常的单链 此时在 多聚酶和连接酶作用下便可完成修复过程 83 这种重组修复并没有从亲代 中除去二聚体 在以后的复制中还必须经过重组修复的过程 但是随着复制的继续 损伤的 链将在群体中逐步 稀释 84 4 修复系统 这是一种倾向于基因突变的修复过程 如果将经UV照射的 噬菌体感染经UV轻度照射的E coli可以看到噬菌体的存活数和突变型都比感染不经UV照射的E coli为高 这一事实说明经UV轻度照射的E coli细胞中出现一种对于噬菌体DNA损伤修复的功能 可是在修复的过程中却带来了基因突变 这是一种带来差错的修复 认为是细菌对外界环境的应急反应 故称 修复系统 SOS修复系统也作用于细菌本身的DNA 85 DNA损伤修复的缺陷 DNA损伤修复的缺陷将带来严重的后果 可导致细胞的突变 甚至死亡 人的DNA损伤修复的缺陷也将带来多种疾病 如着色性干皮病 xerodermapigmentosum XP 是一种常染色体隐性遗传病 AR 该病的病人是因为与DNA损伤修复相关的基因突变引起的 90 的病人在20岁之前就已经发生了皮肤癌 86 87 第五节基因突变的检出1 微生物突变子的筛选 微生物突变子的筛选大多采用选择培养法 选择培养法的方法很多 应根据具体筛选的突变型的特性而定 例