a和b地中海贫血遗传筛查和产前诊断

和 地中海贫血的遗传筛查和产前诊断GeneticScreeningandPrenatalDiagnosisfor and thalassemiainGuangdongMeizhou2006 December07诊断技术中心SouthernMedicalUniversity 地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一 中国南方不同高发地区人群携带率1 23 研究背景 中国南方 和 地贫的人群携带率 珠海 韶关 广州 汕头 湛江 广东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查 西 南 东 北 中 JournalofClinicalPathology 2004 57 5 517 22 广东省人群中 地贫的携带者频率 广东省人群中 地贫的携带者频率 广东省年高风险妊娠预测数据 95 CI 重型或中间型 地贫 645 480 835 Bart s胎儿水肿综合征 1714 1498 1945 血红蛋白 Hb H病 1677 1467 1901 广州市主要出生缺陷的发生率 1998 2001 地贫纯合子 致死性出生缺陷 重型 地贫 胎儿水肿综合征 早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症 无理想治疗方法 重型 地贫 出生后1年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持 代价昂贵 研究地中海贫血的意义 重症地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题 通过产前诊断阻止重症患儿出生是首选预防措施 WHO优先推荐在发展中国家实施预防的遗传性疾病 预防地贫是中国南方高发区减少出生缺陷的战略需求 研究背景 应用于地贫控制的人群筛查策略 基于医院水平的预防计划 基于社区水平的预防计划 扩展的家系筛查计划 中国南方地贫人群预防的首个前瞻性筛查计划 时间 1993 01 01 2003 12 31 基于医院的预防计划 广州市妇婴医院占广州市出生数的1 17 策略 孕期杂合子筛查 结合现行的孕期健康产科检查实施 地贫携带者筛查及产前诊断流程 筛查结果 异常血红蛋白筛查结果 广州市妇婴医院1993 2003筛查计划的结果 cont d 筛查发现的阳性孕妇或阳性夫妇 地贫1 地贫 地贫 地贫5 7 3 6 4 4 1 8 Totalof4503couplesscreened 54例Bart s水肿儿和HbH病 18例重型 地贫 28041783198对83对 产前诊断 187例 地贫82例 地贫 广州市妇婴医院1993 2003筛查计划的结果 产前诊断结果 地中海贫血的产前诊断 胎儿取样技术 DNA诊断技术 地贫的诊断 地贫的诊断 羊膜穿刺 amniocentesis 抽取胎儿样品示意图 DNA诊断技术 多重PCR multiplexPCR 等位基因特异性性寡核苷酸杂交 ASO 反向点杂交 RDB 变性高效液相色谱 DHPLC 多重引物延伸DHPLC multiplexPE DHPLC 用于 和 地贫产前诊断的方法 1993 2003 胎儿脐带血血红蛋白电泳图谱 DiagnosisPatient1Bart shydropsfetalisPatient2HbHdiseasePatient3 thaltrait 本实验室应用的主要技术 采用Gap PCR进行 SEA 地贫基因缺失的基因分型 SEA 地贫缺失的基因分型结果 与美国商品化UBI试剂盒的对比研究 中国南方 地贫突变的变异类型和位置 EXON1 IVS1 EXON2 EXON3 IVS2 Fragmentsize A 453bpB 364bpC 423bp OnesetofPCRconditions DHPLC分析人 珠蛋白基因 三个PCR片段扩增 IVS2 3 UTR A B C DHPLC的三种操作模式 非变性分析 50 C 双链DNA大小测定 半变性分析 52 78 C 突变鉴定 全变性分析 78 80 C Oligo和RNA分析 PCR产物的半变性分析 52 78 C WildtypeMutantHeteroduplexesHomoduplexes ReferenceSamples PCRProducts DHPLC检测 地贫突变的结果 DHPLC检测 地贫突变的结果 DHPLC检测 地贫突变的结果 RDBanalysis applicationtorapidprenataldiagnosisforeight thalassaemiamutations GenotypeFatherCDs41 42 CTTT NMotherIVS 2 654 C T NFetusCDs41 42 IVS 2 654NormalcontrolN N 83例 地贫高风险胎儿产前诊断结果 cont d 266例高风险妊娠的产前诊断结果 ThreeHbHdiseaseinvolved 269 95 7 孕妇实施产前诊断 187 地贫 83 地贫 1双胞胎 72 26 7 孕妇要求终止妊娠 54重型 地贫 18重型 地贫 1双胞胎 69重型地贫被预防 51水肿胎 18重型 地贫 1双胞胎 12孕妇不接受产前诊断 197例孕妇继续妊娠 3例HbH病出生 2例水肿胎出生 广东省 和 地中海贫血预防模式研究现场 广东省四会市时间 2001 1 2005 12人口 40万目标 为制定2006年广东省全境地贫预防计划提供方法和经验 产前遗传学的临床和公共卫生问题利用有效的公共卫生教育资源 首先使医生和公众了解更多的地贫知识和知晓选择遗传服务及其对待产前诊断的态度是我们面临的一个重要课题 2 为满足大规模预防工作的需要 我们须大力加强专科医生 遗传咨询师 及其他相关专业人员的培训工作 3 预防监测系统建立过程中 要特别注重转诊 病例登记 实验室质量控制的把关 4 政府