核磁共振基本原理.ppt

16 52 55 第六章核磁共振波谱分析法 第一节核磁共振基本原理 nuclearmagneticresonancespectroscopy NMR principlesofnuclearmagneticresonance 16 52 55 核磁共振波谱学的发展 1946年 Purcell和Bloch观察到核磁共振现象 于1952年获得诺贝尔物理奖 16 52 55 1945 1951年间 化学位移和自旋偶合的发现 NMR技术的化学应用 1953年世界上第一台商品化NMR谱仪 1964年世界上第一台超导磁场的NMR谱仪1971年世界上第一台脉冲傅立叶变换NMR谱仪 16 52 55 1976年R R Ernst发表了二维核磁共振的理论和实验的文章 获得1991年诺贝尔化学奖 16 52 55 1 原子核的自旋 atomicnuclearspin 一 基本原理 如果放在外磁场中 原子核和电子一样 存在自旋 从而有自旋角动量 和磁矩 16 52 55 核的自旋角动量 是量子化的 不能任意取值 可用自旋量子数 I 来描述 I 0 1 2 1 h 普朗克常数 I 0 0 无自旋 不能产生自旋角动量 不会产生共振信号 只有当I O时 才能发生共振吸收 产生共振信号 I的取值可用下面关系判断 16 52 55 16 52 55 2 自旋核在外加磁场中的取向 旋转方向 取向数 2I 1在没有外磁场时 自旋核的取向是任意的 并且自旋产生的磁场方向也是任意的 如果把H核放在外磁场中 由于磁场间的相互作用 氢核的磁场方向会发生变化 如 H的I 1 2 则 16 52 55 每一种取向都对映一个能级状态 有一个ms 如 1H核 标记ms为 1 2和 1 2 16 52 55 1 E2 m H0 E E2 E1 2m H0E1 m H0 自旋核在磁场中的行为 16 52 55 能级分布与弛豫过程 不同能级上分布的核数目可由Boltzmann定律计算 磁场强度2 3488T 25 C 1H的共振频率与分配比 两能级上核数目差 1 6 10 5 弛豫 relaxtion 高能态的核以非辐射的方式回到低能态 饱和 saturated 低能态的核等于高能态的核 16 52 55 讨论 共振条件 0 H0 2 1 对于同一种核 磁旋比 为定值 H0变 射频频率 变 2 不同原子核 磁旋比 不同 产生共振的条件不同 需要的磁场强度H0和射频频率 不同 3 固定H0 改变 扫频 不同原子核在不同频率处发生共振 图 也可固定 改变H0 扫场 扫场方式应用较多 氢核 1H 1 409T共振频率60MHz2 305T共振频率100MHz磁场强度H0的单位 1高斯 GS 10 4T 特拉斯 16 52 55 氢核 1H 14092G共振频率60MHz2 305T共振频率100MHz磁场强度H0的单位 1高斯 GS 10 4T 特拉斯 16 52 55 讨论 在1950年 Proctor等人研究发现 质子的共振频率与其结构 化学环境 有关 在高分辨率下 吸收峰产生化学位移和裂分 如右图所示 由有机化合物的核磁共振图 可获得质子所处化学环境的信息 进一步确定化合物结构 16 52 55 四 核磁共振波谱仪nuclearmagneticresonancespectrometer 1 永久磁铁 提供外磁场 要求稳定性好 均匀 不均匀性小于六千万分之一 扫场线圈 2 射频振荡器 线圈垂直于外磁场 发射一定频率的电磁辐射信号 60MHz或100MHz 16 52 55 核磁共振波谱仪 16 52 55 16 52 55 16 52 55 3 射频信号接受器 检测器 当质子的进动频率与辐射频率相匹配时 发生能级跃迁 吸收能量 在感应线圈中产生毫伏级信号 4 样品管 外径5mm的玻璃管 测量过程中旋转 磁场作用均匀 16 52 55 NMR谱仪 磁体 探头 机柜 RF产生RF放大信号检测数据采集控制数据信息交流运行控制磁体控制 前置放大器 计算机 数据储存 数据处理 总体控制 16 52 55 NMR谱仪 探头 RF接口 RF线圈 调谐元件 电容器 Helmholtz Solenoid 16 52 55 RF CoilinNMRProbes 16 52 55 傅立叶变换核磁共振波谱仪 不是通过扫场或扫频产生共振 恒定磁场 施加全频脉冲 产生共振 采集产生的感应电流信号 经过傅立叶变换获得一般核磁共振谱图 类似于一台多道仪 16 52 55 16 52 55 超导核磁共振波谱仪 永久磁铁和电磁铁 磁场强度100kG开始时 大电流一次性励磁后 闭合线圈 产生稳定的磁场 长年保持不变 温度升高 失超 重新励磁 超导核磁共振波谱仪 200 400HMz 可高达600 700HMz 16 52 55 16 52 55 90年代末核磁共振波谱技术的新进展 高场超导核磁谱仪的使用900MHz800MHz 16 52 55 样品的制备 试样浓度 5 10 需要纯样品15 30mg 傅立叶变换核磁共振波谱仪需要纯样品1mg 标样浓度 四甲基硅烷TMS 1 溶剂 1H谱四氯化碳 二硫化碳 氘代溶剂 氯仿 丙酮 苯 二甲基亚砜的氘代物 16 52 55 NMR图 16 52 55 1 化学位移 吸收峰所在的相对不同位置 在照射频率确定时 都是H核 所以吸收峰的位置应该是相同的 而实际不是这样 1 化学位移的由来 屏蔽效应化学位移是由核外电子的屏蔽效应引起的 16 52 55 H核在分子中是被价电子所包围的 因此 在外加磁场的同时 还有核外电子绕核旋转产生感应磁场H 如果感应磁场与外加磁场方向相反 则H核的实际感受到的磁场强度为 式中 为屏蔽常数 核外电子对H核产生的这种作用 称为屏蔽效应 如果产生磁场与外加磁场同向 称之为去屏蔽效应 16 52 55 显然 核外电子云密度越大 屏蔽效应越强 要发生共振吸收就势必增加外加磁场强度 共振信号将移向高场区 共振信号将移向低场区 16 52 55 2 化学位移的表示方法 化学位移的差别约为百万分之十 精确测量十分困难 现采用相对数值 以四甲基硅 TMS 为标准物质 规定 它的化学位移为零 然后 根据其它吸收峰与零点的相对距离来确定它们的化学位移值 16 52 55 为什么选用TMS 四甲基硅烷 作为标准物质 1 屏蔽效应强 共振信号在高场区 值规定为0 绝大多数吸收峰均出现在它的左边 2 结构对称 是一个单峰 3 容易回收 b p低 与样品不反应 不缔合 16 52 55 3 影响化学位移 电子云密度 的因素 a 电负性 元素的电负性 通过诱导效应 使H核的核外电子云密度 屏蔽效应 共振信号 低场 例如 16 52 55 b磁各向异性效应 A 双键碳上的质子 双键碳上的质子位于 键环流电子产生的感生磁场与外加磁场方向一致的区域 称为去屏蔽区 去屏蔽效应的结果 使双键碳上的质子的共振信号移向稍低的磁场区 9 4 10 4 5 5 7 16 52 55 c 共轭效应 电子云密度增加 磁屏蔽增加 d Vanderwaals效应 在空间中两个氢核靠的很近时 核外电子会互相排斥 这时氢核电子密度下降 值变大 16 52 55 第六节核磁共振碳谱 13C 简介 有机化合物中C元素的重要性 核磁共振碳谱与氢谱的差别信号强度低 13C丰度为1 1 磁旋比比1H小四倍 为1H谱图的1 6000 化学位移范围宽 0 250 350 有利于结构分析 耦合常数大13C与直接相连的1H的耦合常数在125 250Hz 一般通过质子噪声去耦 得到单峰 16 52 55 弛豫时间长比1H慢 可得到较多信息 不能用于定量共振方法多 信息多质子噪声去耦 偏共振去耦 门控去耦 谱图简单一般为一级谱图 16 52 55 16 52 55 16 52 55 第七节二维核磁共振谱 二维谱是两个独立频率变量的信号函数S 1 2 目前 主要是先得到以独立时间为变量的信号函数S t1 t2 再经过傅立叶转换成为两个独立频率变量的信号函数 16 52 55 二维谱图的表示方法 16 52 55 二维谱图举例1 16 52 55 谱图举例2 16 52 55 生物大分子空间结构的测定方法 X射线晶体学 多维核磁共振波谱学 16 52 55 16 52 55 核磁共振的特点 蛋白质处于溶液状态适合研究蛋白质 蛋白质 蛋白质 核酸 蛋白质 配基相互作用可研究蛋白质分子内部运动可研究膜蛋白 核磁共振基本原理11讲吴季辉 16 52 55 NMRstructureoftherecombinantmurineprionprotein 核磁共振基本原理11讲吴季辉 16 52 55 核磁技术和应用范围 16 52 55 蛋白质三维空间结构测定 样品制备记录核磁共振谱谱峰归属确定二级结构单元约束条件的建立从NMR数据到分子模型 核磁共振基本原理11讲吴季辉 16 52 55 药物设计和筛选 16 52 55 16 52 55 hr MASofbiologicaltissue 相同强度 放大 人前列腺组织 prostatetissu 良性vs 恶性 癌症组织给出更多的脂类