超声辅助提油茶皂甙的初步研究毕业论文.doc

北京林业大学本科毕业论文本科毕业论文(设计)文献综述超声辅助提油茶皂甙的初步研究摘要油茶(Camellia oleifera)是我国南方丘陵地区的一种重要油料植物。我国是世界上油茶籽产量最高、分布最广、品种最多的国家，年产油茶籽约5498万吨，油茶籽副产品 油茶饼粕的年平均产量约为3971万吨。经检测分析，油茶饼粕中富含蛋白质、脂肪、淀粉、茶皂素、粗纤维和灰分等。茶籽蛋白质含有18种氨基酸成分，其中8种是人体必需的氨基酸。因此，油茶饼粕是一种营养价值较高的潜在饲料来源。然而，由于油茶饼粕中含有1015左右的溶血性茶皂素(Thea saponin)，对鱼类等水生生物毒害性很强，茶皂素的存在又使饲料味苦且辛辣，因而限制了茶籽饼粕在饲料工业中的应用，造成巨大的资源浪费。矚慫润厲钐瘗睞枥庑赖。鉴于油茶资源的巨大浪费，本文从油茶饼粕中茶皂素的提取纯化着手，旨在实现茶皂素提取方法的改进和新方法的探索。聞創沟燴鐺險爱氇谴净。1.经过测定，试验用油茶种子的含水量为6.5%、出仁率为70.57%、出油率为25.05%，基本符合理论值。残骛楼諍锩瀨濟溆塹籟。2.通过正交试验得出利用超声波提取皂甙的最佳优化方法为：提取温度60，提取时间1h，料液比1：10，超声波功率60w，利用该工艺油茶皂素的提取量为7.9565g。酽锕极額閉镇桧猪訣锥。此试验结果降低了提取温度、减少了提取时间和试剂的耗费，初步解决了皂甙大规模生产的问题。关键词：油茶，超声波，皂甙22Ultrasonic support to tea-oil tree soapNetwork preliminary study Biotechnology 02-1 LiuSupervisorAbstract South Hills is one of our important oil plants. China is the highest in the world apply paint to growing production and distribution of the broadest, most varieties, growing oil output of about 549,800 tons, growing by-product of oil-tea-oil tree Bingpo the annual average output of about 397,100 tons. Upon detection analysis, tea-oil tree Bingpo protein, protein, fat, starch, tea Zaosu, crude fibre and ash content. Growing protein containing 18 types of amino acid composition, which is eight essential amino acids the human body. Therefore, the higher the nutritional value of a tea-oil tree Bingpo potential feed sources. However, the tea-oil tree Bingpo contains 10%15% hemolysis of tea Zaosu (Thea saponin), the fish and other aquatic noxious strong, and the existence of tea Zaosu feed and spicy taste, thus limiting growing Bingpo feed industry in the application, resulting in tremendous waste of resources. 彈贸摄尔霁毙攬砖卤庑。Given the tea-oil tree enormous waste of resources, this article from the tea-oil tree Bingpo Chinese tea Zaosu extraction to refining and extraction methods to achieve tea Zaosu improvements and new methods to explore. 謀荞抟箧飆鐸怼类蒋薔。1.After measuring, testing the water content in tea-oil tree seeds to 6.5%, a rate of 70.57% Yan, a rate of 25.05% oil, consistent with the basic theory of value.厦礴恳蹒骈時盡继價骚。2. Derived from the use of ultrasound tests by orthogonal best soap Network optimization methods : extraction temperature of 60 degrees, from time 1h, Liu fluid than 1:10, ultrasound power 60w, using the techniques of extraction for the tea-oil tree Zaosu 7.9565g茕桢广鳓鯡选块网羈泪。This results from lower temperature, reduce the time and reagents from the time, the preliminary settlement of the large-scale production of soap Network. 鹅娅尽損鹌惨歷茏鴛賴。Keyword: Tea-oil tree, ultrasound, soap Network 目录1 前言1.1油茶粕的成分1.2油茶皂甙的性质1.3油茶皂甙的用途 1.3.1油茶皂甙用作洗涤剂 1.3.2油茶皂甙用作发泡剂 1.3.3油茶皂甙用作乳化剂1.3.4油茶皂甙用作粘胶剂1.3.5油茶皂甙用作植物杀虫剂1.3.6油茶皂甙在医药上的应用1.3.7油茶皂甙用作生物试剂1.3.8 油茶皂甙在食品工业中的应用 1.4油茶皂甙的提取1.5油茶皂甙的纯化 1.5.1正丁醇萃取法 1.5.2重结晶法 1.5.3吸附法 1.5.4聚酰胺柱层析法 1.5.5硅胶柱层析1.5.6离子交换树脂法1.5.7絮凝剂法1.5.8超滤膜法2 材料和方法2.1实验材料以及实验仪器2.2实验方法 2.2.1油茶油的提取 2.2.2油茶皂甙的提取3 结果分析与讨论 3.1实验结果与分析 3.1.1油茶籽的水分测定 3.1.2油茶出壳率的测定 3.1.3油茶含油量的测定 3.1.4超声波提取油茶皂甙 3.1.5超声波提取油茶皂甙的正交试验结果的直观分析 3.1.6正交试验的方差分析3.2讨论4 结论致谢参考文献1 前言油茶（Camelliaoleifera）茶科茶属常绿小乔木，因其种子可榨油(茶油)供食用，故名。茶油色清味香，营养丰富，耐贮藏，是优质食用油；也可作为润滑油、防锈油用于工业。茶饼既是农药，又是肥料，可提高农田蓄水能力和防治稻田害虫；果皮是提制栲胶的原料。叶部含有花黄素、茶碱等，是医药工业的原料；木材可做小型农具。 油茶分布区的北界在淮河-秦岭一线；南界大致在北回归线附近；东界为东南海岸和台湾；西界是云南的怒江流域和青藏高原的东缘。垂直分布在东部地区一般在海拔800m以下，西部地区可达海拔2000m。 油茶树高达46m，一般23m。树皮淡褐色，光滑。单叶互生，革质，椭圆形或卵状椭圆形，边缘有细锯齿。花顶生或腋生，两性花，白色。蒴果球形、扁圆形、橄榄形等。种子茶褐色或黑色，三角状，有光泽1。籟丛妈羥为贍偾蛏练淨。油茶喜温暖，怕寒冷，要求年平均气温1618，花期平均气温为1213。突然的低温或晚霜会造成落花、落果。要求有较充足的阳光，否则只长枝叶，结果少，含油率低。要求水分充足，年降水量一般在1000mm以上，但花期连续降雨，影响授粉。要求在坡度和缓、侵蚀作用弱的地方栽植，对土壤要求不甚严格，一般适宜土层深厚的酸性土，而不适于石块多和土质坚硬的地方。預頌圣鉉儐歲龈讶骅籴。油茶是我国特有的南方重要木本油料树种，有2300余年的栽培历史。据统计，全国现有油茶林面积为400万hm2 ，分布于南方16个省(区)1100多个县，年产茶油1.5亿kg，占我国木本食用油料树种栽培面积的80%以上。油茶经济价值高、用途广、适应性强，综合开发利用价值潜力大，是南方丘陵岗地重要的经济林树种，被林民称为“铁杆庄稼”、“绿色油库”。油茶在我国国民经济建设中起到了重要的作用。面对目前我国油茶生产呈现的机遇和强大的发展势头，回顾建国以来我国油茶的发展进程和成就，综合分析当前社会、经济和技术等各要素，找出油茶生产存在的问题和差距，是非常必要和及时的2-4。渗釤呛俨匀谔鱉调硯錦。我国自20世纪70年代之后，大力发展和推广浸出法工艺，发展较快，生产水平、产品质量以及主要技术经济指标逐年提高，已接近国际先进水平。油茶皂苷的加工、提取工艺先后经历了水、含水乙醇、含水甲醇等溶剂提取法，同时采取多种精制工艺，使油茶皂甙产品的加工成本、质量都有了较大程度的改善。油茶皂甙作为优良的非离子型表面活性剂在日用化工、医药、木工、建材和农药等领域的应用展开了较为系统的研究，取得了一定的成绩。我国在茶皂甙(包括油茶皂甙)表面活性的理论体系的建立并指导应用于实践是一大创举5。铙誅卧泻噦圣骋贶頂廡。1.1油茶粕的成分茶籽饼粕的成分6见表1.1。表1.1油茶粕的成分成分粗脂肪粗蛋白粗纤维粗皂甙灰分无氮浸出物鞣质油茶粕3.8516.3620.3222.466.3629.381.37去皂苷油茶粕3.6519.6226.381.487.9339.581.36从上表可看出，去皂苷茶籽饼可以作为一种能量饲料资源加以利用，但作为能量饲料而言，茶籽饼粕中蛋白质水平较高，无氮浸出物含量偏低，粗皂甙含量偏高，要提高茶籽饼粕的饲用价值，就必须提高茶籽皂甙的提取率。擁締凤袜备訊顎轮烂蔷。油茶籽饼中的氨基酸含量如表1.2。表1.2油茶粕中氨基酸的含量氨基酸含量（w%）氨基酸含量（w%）氨基酸含量（w%）赖氨酸1.03 *缬氨酸0.77 *酪氨酸0.52色氨酸0.60 *苯丙氨酸0.78 *天冬氨酸1.57蛋氨酸0.45 *苏氨酸0.68 *丝氨酸0.82亮氨酸1.52 *精氨酸2.06谷氨酸5.03组氨酸0.28甘氨酸0.81脯氨酸0.76异亮氨酸0.74 *胱氨酸0.55丙氨酸1.02从上表1.2可知，油菜籽饼中含有18种氨基酸，动物必需氨基酸（表中加*的氨基酸）含量较高， 尤其是赖氨酸和含硫氨基酸含量高于一般能量饲料，所以，虽然油茶籽饼中粗蛋白含量只有16.36%，但因有效赖氨酸和含硫氨基酸含量高，实际蛋白水平己达22.89%，其蛋白质的营养价值要明显高于玉米、小麦、米糠和麦麸，有很好的利用前景7。贓熱俣阃歲匱阊邺镓騷。综上所述，可以看出改进皂甙提取方法显得尤为重要。本试验从改进皂甙提取方法入手，利用超声波的破碎原理，改变以前费时、费料的提取方法，增加提取方法在工业上应用的可能性，将油茶的资源尽可能的开发出来。坛摶乡囂忏蒌鍥铃氈淚。1.2油茶皂甙的性质1.2.1油茶皂甙的物化性质油茶皂苷属于五环三甙萜类皂甙（结构如图1.1、1.2），油茶皂甙分子中由亲水性的糖体和疏水性的配位基及有机酸构成，分子式C57H90O26，分子量1191.28，熔点：224 。油茶皂甙具有苦辛味，纯品为白色微细柱状晶体。吸湿性强，对甲基红显酸性，难溶于无水甲醇、乙醇、不溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚等有机溶剂，易溶于含水甲醇，含水乙醇以及冰醋酸、醋酐、吡啶等。茶皂甙溶液中加入盐酸时，皂甙就沉淀。蜡變黲癟報伥铉锚鈰赘。图1.1皂甙的结构图1图1.2皂甙的结构图21.2.2 茶皂甙的表面性质茶皂甙具有乳化、分散、湿润、去污、发泡、稳泡等多种表面活性，是一种性能优良的天然表面活性剂。茶皂甙与水振荡后产生峰窝状泡沫，起泡力强，泡沫具有持久性，且不受水质硬度的影响。据称，0.05茶皂甙水溶液振荡后产生的泡沫经过30min而不消散，而优等肥皂0.06的水溶液振荡后产生的泡沫14min就消散了。茶皂甙作为表面活性剂，它的亲水亲油平衡值(HLB值)为10.6。因此是制备水包油型(OW)乳液的良好乳化剂8。据报道，以茶籽皂甙软化石蜡，其乳化力强，分散性良好，乳液颗粒度在1.54m左右，稳定性好，能在室温下长时间存放不分层，在40恒温条件下存放24h以上(10浓度)，其表面结皮厚度为0.5mm，下层析水度为1.5 ，且乳液的稳定性和乳化效果几乎不受水质硬度影响9。買鲷鴯譖昙膚遙闫撷凄。1.2.3 茶皂甙的生理活性茶籽皂甙还具有多种生理活性，溶血性是其中之一。经测定，他对家兔血液的溶血指数为100000。溶血作用也是茶籽皂甙的毒性，据推测，可能是由于它与血液中的大分子醇(如胆固醇等)结合成复盐所致。它对冷血动物毒性很大，但对高等动物口服无毒。綾镝鯛駕櫬鹕踪韦辚糴。茶籽皂甙的生理功效，许多方面与瓜参素G，海参素A、B、C、七叶素及马粟草素等植物皂甙的功能性质相近，它们具有明显的抗炎和抗渗透能力。茶皂甙有抑制霉菌生长的作用，但对革兰氏阴、阳菌的生长无影响。它对某些细胞的RNA生物合成也有明显影响。此外，它还具有去痰消炎、止咳镇痛、杀菌杀虫及促进植物生长等多种功效10。驅踬髏彦浃绥譎饴憂锦。1.3油茶皂甙的用途油茶皂甙是一种天然非离子表面活性剂，具有良好的乳化、分散、发泡、胶粘、润湿等作用，同时还具有消炎、怯痰、抗渗透、镇痛、健胃等药理，广泛应用于毛织、针织、日用化工、医药、农药方面11，具体性质及应用如下:猫虿驢绘燈鮒诛髅貺庑。1.3.1油茶皂素用作洗涤剂油茶皂甙是天然活性剂，易酶解为无毒化合物，不会对环境产生污染。利用油茶皂甙作为洗涤剂洗涤丝绸、毛料以及棉麻织物，既能延长毛丝织物的使用寿命，不使织物产生缩绒现象，又能保持织物艳丽的色彩，不损害织物上染料色素。尤其是作为一种纯天然原料，它对皮肤不会产生刺激、过敏、加深色素和毒素积累等现象12。锹籁饗迳琐筆襖鸥娅薔。1.3.2 油茶皂甙用作发泡剂油茶皂甙的起泡能力优于上等肥皂，且起泡性质和稳泡性都相当好。由于其具有较强的吸收二氧化碳的能力，在橡胶工业上可用作泡沫橡胶的发泡剂，在消防上用作泡沫灭火器的发泡剂，同时还可以代替其它化工原料，作为稳定泡沫剂生产加气混凝土，大大降低了生产成本13。構氽頑黉碩饨荠龈话骛。1.3.3油茶皂甙用作乳化剂油茶皂甙形成的石蜡乳化液性能好，乳液颗粒度小，分布均匀，稳定性好，可用于地板光蜡液和药品乳化剂。石蜡乳化剂、油茶皂甙泡花板、油茶皂甙荧石选矿剂产品。目前市面上己有油茶皂甙、新型纤微板防水材料等14。輒峄陽檉簖疖網儂號泶。1.3.4 油茶皂甙用作粘胶剂油茶皂甙是一种复杂的化合物可用作烟草薄片的粘胶，其薄片具有良好的拉力、耐破度，含有丰富的有机糖，完全能满足切丝卷烟要求；同时该粘胶剂具有吸潮保润性，不需再加糖作保润剂，可大大降低成本15。尧侧閆繭絳闕绚勵蜆贅。1.3.5 油茶皂甙用作植物杀虫剂油茶皂甙的水溶液对动物血液的红细胞会有溶血作用，据报道，皂甙的溶血作用是通过它与红细胞膜上的胆固醇相互作用而造成细胞破裂，而对白细胞和虾血红细胞却无此作用，而溶血只限于注射药，口服不造成溶血，但皂甙由鳃进入微血管中产生溶血作用而毒害冷血动物，而非冷血动物由于在胃肠道的酸或酶的作用下皂甙己经水解断裂，故毒性己经大大降低，微量的油茶皂甙可以引起血清蛋白的大幅度降低，但并不影响血细胞。因此，以油茶皂甙为主要原料研制的植物杀虫剂对人畜无害，对植物安全，具有推广前景16。识饒鎂錕缢灩筧嚌俨淒。1.3.6 油茶皂甙在医药上的应用油茶皂甙具有较好的抗真菌、抗炎和扩张血管的作用，通过体外抗真菌试验表明，油茶皂甙对皮肤常见致病真菌都有明显的抑制作用，其中对白色念球菌抑制作用最强，可用其配制天然癣药17。同时，油茶皂甙具有消炎、祛痰、健胃和抗炎等药理作用，能刺激人体气管粘膜，增加分泌，不但具有止咳祛痰之功效，还可以作为利尿剂18。最近研究还表明，油茶皂甙具有抗突变、抗放射辐射和抗癌作用19-20，还可以影响钉螺生殖腺及肝脏21，可以杀灭血吸虫卵，体外有杀精子等作用22。凍鈹鋨劳臘锴痫婦胫籴。1.3.7油茶皂甙用作生物试剂精制的油茶皂甙各项指标达到生物实验(BR)标准，可应用于生物研究23。1.3.8 油茶皂素在食品工业中的应用茶皂素在食品工业上，因其具有较强的吸收二氧化碳的特性，可用在清凉饮料上如汽水和啤酒中作助泡剂。由上可知，油茶皂甙是一种非离子型的表面活性剂，其来源于天然，刺激性小，去污能力强，本身又具有抑菌的作用，因此，作为人体的洗涤用品和高级衣料的洗涤用品很合适，这与人们生活水平的提高，在吃、穿、用诸方面返朴归真，回归大自然的消费心理和消费要求又是十分吻合的。而这类产品开发的关键是必须有高质量的皂甙产品，即所得皂甙纯度要高，色泽要浅，无不良气味等。恥諤銪灭萦欢煬鞏鹜錦。1.4油茶皂甙的提取目前 ， 从油茶饼中提取茶皂甙的方法主要有两种:一种是水提法，即用热水多次浸泡脱脂后的饼渣，然后过滤、浓缩、干燥，得到深揭色的皂甙。该方法虽然提取剂易得，价廉且安全，但产品色泽、质量性能较差，这主要是因为茶饼粕中含有较高量的淀粉和糖分，热水浸泡时，淀粉、糖分等被浸出，造成淀粉糊化，形成一种胶状粘稠物，使得过滤十分困难，从而影响了茶皂甙提取物的纯度和色泽，使其用途受到了一定的限制:另一种是有机溶剂法，用此方法，产品纯度虽有提高，但提取剂消耗多，成本较高，工艺也较复杂。实验证明，用70%左右的乙醇(甲醇)回流，提取效率较高，杂质含量较少，是较好的溶剂提取条件24。本试验是应用超声波的破碎原理，提高了皂甙的提取率，而且这种方法具有提取成本低、提取时间短、操作简便等特点。鯊腎鑰诎褳鉀沩懼統庫。1.5油茶皂甙的纯化油茶皂甙色泽深、气味刺鼻、含量低，是限制其开发利用的主要质量原因，有报道显示：气味并不是皂甙所固有的，完全可以除去。显然，采用合适的纯化方法用于生产意义重大。经典的纯化方法往往需要多次工序“对症下药”，例如针对皂甙的脱色大多采用H2O2 氧化破坏色素、离子交换树脂或二者相结合的方法等。皂甙的纯化，常见的有醇一醚沉淀法、正丁醇萃取法、硅胶或聚酰胺柱层析法、明矾、壳聚糖等絮凝剂法和离子交换树脂法等。硕癘鄴颃诌攆檸攜驤蔹。1.5.1 正丁醇萃取法：将粗皂甙用少量水溶解，水溶液用正丁醇萃取，即可得到正丁醇层，浓缩至干，得到棕红色粘稠固体。此法得到的皂甙颜色太深，且杂质较多阌擻輳嬪諫迁择楨秘騖。1.5.2重结晶法：将粗皂甙加入热乙醇中，溶后过滤，重复操作23次，合并滤液后加入盐酸，放置冷却使其结晶析出，如果颜色不合要求，再用乙醇重结晶，即可得到高纯度的茶皂甙。但此法油荼皂甙得率较低，且不适用于工业生产。氬嚕躑竄贸恳彈瀘颔澩。1.5.3吸附法：在粗皂甙的水溶液中，加入新煅制的氧化镁粉，然后向蒸发至干的粉末中加入乙醇，使吸附在氧化镁上的皂甙溶解出来，放冷后，皂甙析出，得到纯品，得率大约为粗皂甙的50%，且纯度不高。釷鹆資贏車贖孙滅獅赘。1.5.4聚酰胺柱层析法：将粗皂甙进行聚酰胺柱层析，分别用水，不同浓度的乙醇水溶液依次洗脱，在某一合适浓度即可得到皂甙组分。此法得到的皂甙纯度不高，且聚酰胺柱回收不易，不适合工业生产。怂阐譜鯪迳導嘯畫長凉。1.5.5硅胶柱层析：硅胶柱采用干法上柱，干法上样。用饱和的正丁醇洗脱，收集皂甙部分，直至洗脱液在薄层上无皂甙点出现，减压浓缩至干，得纯化皂甙。干法装柱既可以省时，也可以节约溶剂而且干柱在分离条件上更接近薄层层析，这样就更容易找到合适的分离条件，此方法得到的皂甙较好，但不适用于工业生产。谚辞調担鈧谄动禪泻類。1.5.6离子交换树脂法：将粗皂甙利用离子交换树脂可去除滤液中的可溶性盐类。阴、阳离子交换树脂的型号，可选用磺酸型阳离子交换树脂(732型)和季铵盐型阴离子交换树脂(717型)。此方法纯化效果不佳，可与其它方法配合使用。嘰觐詿缧铴嗫偽純铪锩。1.5.7絮凝剂法：本法是采用絮凝剂对水提取液的杂质进行沉淀，沉淀剂主要有两类：一类为沉淀杂质，另一类为沉淀油茶皂甙。第一类沉淀剂主要有：乙醇，硫酸铝钾，聚丙烯乙酰胺(PAM)，聚三氯化铁(PAC)以及硫酸铝钾(活性三氯化铁)+可溶性甲壳素等；第二类沉淀剂主要有铅盐，丙酮，明矾，乙醚等。据报道，用硫酸铝钾(活性三氯化铁)+可溶性甲壳素的方法，沉淀速度快，对皂甙无影响，价格便宜，和用乙醇处理过的滤液效果相当，且比乙醇更安全，效果更好。如能找到合适的絮凝剂，则此法适合于工业生产。熒绐譏钲鏌觶鷹緇機库。1.5.8超滤膜法：此技术是在水提技术的基础上，使用超滤膜分离技术，通过水溶液中物质分子量的差别而使糖类、盐类、色素等杂质被分离除去，从而达到浓缩、精制及脱色的目的。鶼渍螻偉阅劍鲰腎邏蘞。其基本工艺路线如下：粗皂甙一级分离二级分离脱色干燥精制皂甙据报道，此法提取的皂甙的得率高，一般在90%左右，且工艺路线由于不使用有机溶剂，大大降低了生产投资和运行成本，并提高了生产的安全性。精制皂甙具有理想的色泽，有利于产品的进一步开发，故此技术适用于工业生产。纣忧蔣氳頑莶驅藥悯骛。本试验是用水进行提取皂素的，而且乙醇沉淀法比较安全，所以采用的是乙醇沉淀法和阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂法相结合来进行纯化的。颖刍莖蛺饽亿顿裊赔泷。2 材料和方法2.1试验材料及仪器2.1.1材料未脱壳的油茶籽2.1.2仪器及试剂仪器：秤、天平、烘箱、液压榨油机、水浴锅、分液漏斗（400ml）、量筒（10ml、100ml）、烧杯（200ml、400ml）、pH试纸、离心机、旋转蒸发仪、红外灯烘箱、超声波仪濫驂膽閉驟羥闈詔寢賻。试剂：氨水、95%乙醇、阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂、活性炭、乙醚2.2试验方法2.2.1油茶油的提取（1）取100g未脱壳的油茶籽放入红外灯烘箱中，105下进行脱水处理，待油茶恒重，称其重量测含水量。銚銻縵哜鳗鸿锓謎諏涼。（2）将剩余的油茶籽进行烘干，烘干后的油茶籽进行脱壳，称其重量G1。（3）将脱壳的油茶籽放入液压榨油机中，60MPa压榨至恒重。另取1kg单独压榨，测油茶的出油率。2.2.2油茶皂甙的提取（1）将油茶粕用粉碎机粉碎，然后放入乙醚中浸泡24h，去除剩余油脂。（2）取9份浸提过的油茶饼，每份50g，然后按温度、时间、超声波功率、料液比四个因素进行正交试验。正交表L9（34）如下：挤貼綬电麥结鈺贖哓类。表2.1 影响因素与水平设计表123A.温度（）607080B.时间（h）0.51.01.5C.料液比（w/v）1：61：81：10D.功率（w）406080表2.2 L9（34）正交试验设计表列 号影 响 因 素ABCD试验号111112122231333421235223262311731328321393321（3）超声波处理以后，用氨水调pH值为10，使浸提液的蛋白质、树脂、有机酸、色素等杂质形成沉淀，离心分离沉淀。上清液按1:0.5的比例加入95%的乙醇，搅拌均匀，静置2h，离心取上清液。赔荊紳谘侖驟辽輩袜錈。（4）利用旋转蒸发仪将上清液浓缩，回收乙醇。（5）浓缩液冷却后加入阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂，搅拌均匀，静置2h，得粘稠液体。（6）用纱布过滤后，烘箱烘干，称产品重量，计算提取量。3 结果与讨论3.1试验结果与分析3.1.1油茶籽的水分测定未烘烤油茶籽重=100g，2h后油茶籽恒重94.5g油茶籽的含水量=（100-94.5）/100*100%=6.5%。3.1.2油茶出仁率的测定未脱壳的油茶籽G=4152g，脱壳后的油茶籽重G1=2930g油茶籽的出仁率= G1/G=2930/4152*100%=70.57%。3.1.3油茶含油量的测定 未压榨的油茶籽重=1000g，压榨后的油茶重=749.5g 油茶籽的含油量=（1000-749.5）/1000*100%=25.05%。3.1.4超声波提取油茶皂甙 9份油茶粕，每份50g，分别按照表2.2 L9（34）正交表进行试验，得数据填入下表。表3.1皂素的提取量（g）试验号123456789皂素产量9.000010.00011.18156.56717.95655.21966.68084.48811.65873.1.5超声波辅助提取油茶皂甙的正交试验结果分析见表3.2表3.2正交试验结果的直观分析列 号影 响 因 素皂素产量（g）ABCD试验号111119.00002122210.0003133311.1815421236.5671522327.9565623115.2196731326.6808832134.4881933211.6587T130.181522.247918.707715.8783T=62.7523T219.743222.444618.225824.6373T312.827618.059825.818822.2367X110.06057.41606.23595.2928X26.58117.48156.07538.2124X34.27596.01998.60637.4122R5.78461.46162.53102.9196从表3.2可以看出，温度和超声波的功率的极差分居第一、二位，是影响皂素提取的关键因素，其次是料液比，超声波提取时间的影响程度最小。塤礙籟馐决穩賽釙冊庫。根据各试验因子的总计数或平均数可以看出：A取A1，B取B2，C取C3，D取D2为好，即皂素提取的优化方案是A1、B2、C3、D2的组合。裊樣祕廬廂颤谚鍘羋蔺。3.1.6正交试验的方差分析(1)平方和与自由度C=（x）2/n=62.75232/9=437.539SST=x2-C=9.00002+10.0002+11.18152+6.56712+7.95652+5.21962+6.68082+4.48812+1.65872仓嫗盤紲嘱珑詁鍬齊驁。-437.539=69.6913SSA=x2/3-C =488.4214-437.539=50.8824SSB=x2/3-C =441.6285-437.539=4.08948SSC=x2/3-C =449.5894-437.539=12.0504SSD=x2/3-C =451.1959-437.539=13.6569因为此正交表是四因素三水平的L9（34），表中的任意两列的互作作用出现在另外两列，所以做以下组合分析,列方差分析表进行F检验：绽萬璉轆娛閬蛏鬮绾瀧。（2）考虑A、B因素，C作为A*B的互作SSe=SST-SSA-SSB-SSC=2.6690dfT=9-1=8dfA=dfB=dfC=3-1=2dfe=dfT-dfA-dfB-dfC=8-2-2-2=2表3.3温度和时间两因素正交方差分析影响因素dfSSx2FF0.05F0.01温度A250.882450.882419.064219.0099.00时间B24.089484.089481.532219.0099.00影响因素dfSSx2FF0.05F0.01温度*时间C212.050412.05044.514519.0099.00试验误差22.66902.6690总误差869.6913由3.3可知，温度的F值显著，而温度与时间的互作作用不是很明显。(3)考虑A、D因素，B作为A*D的互作SSe=SST-SSA-SSB-SSD=1.0625dfT=9-1=8dfA=dfB=dfD=3-1=2dfe=dfT-dfA-dfB-dfD=8-2-2-2=2表3.4温度和功率两因素正交方差分析影响因素dfSSx2FF0.05F0.01温度A250.882450.882419.064219.0099.00功率D213.656913.65695.116919.0099.00温度*功率B24.089484.089481.532219.0099.00试验误差22.66902.6690总误差869.6913由表3.4可知，温度的F值最高，温度与功率的互作作用也不是很明显。(4)考虑B、D因素，C作为B*D的互作SSe=SST-SSB-SSC-SSD=39.8945dfT=9-1=8dfD=dfB=dfC=3-1=2dfe=dfT-dfD-dfB-dfC=8-2-2-2=2表3.5时间和功率两因素正交方差分析影响因素dfSSx2FF0.05F0.01时间B24.089484.089481.532219.0099.00功率D213.656913.65695.116919.0099.00时间*功率C 212.050412.05044.514519.0099.00试验误差22.66902.6690总误差869.6913由表3.5可知，功率的F值最高，而功率和时间的互作作用也很明显。由于功率较为显著，浸提时间作用不明显，时间*功率互作显著，功率和时间的最优水平应根据时间*功率互作而定，即在D2确定为最优水平后，在D2水平上比较B，确定时间的最优水平。骁顾燁鶚巯瀆蕪領鲡赙。D2B1 的平均数=6.6808D2B2的平均数=(10.0000+7.9565)/2=8.97825因此，时间B还是B2水平较好；温度A取A1水平较好；料液比水平差异不显著，取哪个都可以，所以最佳组合方案是：A1B2C1D2或A1B2C2D2 或A1B2C3D2，符合直观分析中得出结论，既皂素提取的优化方案是A1、B2、C3、D2的组合。瑣钋濺暧惲锟缟馭篩凉。3.2讨论3.2.1在茶饼浸提过程中，如果只用水来浸提，得到的茶皂甙颜色深，含量和得率低，但如果在增加一道乙醇浸提过程，则得到的茶皂素相对来所颜色浅，含量和得率亦高。而如果只用乙醇作为浸提液，虽然得到的产品质量尚可，但要消耗大量有机溶剂(乙醇)，成本高，工艺复杂，所以采用醇水溶液法较为可行。鎦诗涇艳损楼紲鯗餳類。3.2.2本试验中过滤所得的滤渣经脱毒处理，绝大部分的有毒物质可以除掉，因而可以作为生畜的饲料。 3.2.3本试验中采用阳离子型聚丙酰胺作为絮凝剂，因为阳离子型聚丙烯酰胺的分子中含有大量正电荷，能吸附杂质微粒，起到电性中和作用，而它的长碳链又可以起到架桥作用，所以用它作絮凝剂可以形成大而连续的絮团，加速沉降速度，缩短过滤时间，提高溶液澄清度。栉缏歐锄棗鈕种鵑瑶锬。3.2.4采用本工艺可以从原来被废弃的油茶籽饼中得到多用途的化工原料茶皂素和家畜与生畜的饲料，真正做到了变废为宝，对提高经济效益和社会效益具有重要作用。辔烨棟剛殓攬瑤丽阄应。3.2.5试验中存在的问题（1）油茶种子的质量是影响试验的一个关键因素，如果种子的质量很差，出仁率较低，提取的皂素含量就会受到影响。峴扬斕滾澗辐滠兴渙藺。（2）在进行压榨之前，应控制种子的含水量，含有过多的水会对压榨有一定的影响，从而给后面的试验带来不必要的麻烦，也可能会对皂素的产量有影响。詩叁撻訥烬忧毀厉鋨骜。（3）对种子中茶油的提取也是关键的一步，压榨得不好就会在茶粕中含有一定的油脂，再进行皂素的提取时，就会影响皂素的提取量，操作也会很繁琐。则鯤愜韋瘓賈晖园栋泷。（4）在提取皂素的过程中，分离产物也是很重要的，由于试验条件的限制，仅能用纱布过滤，这样操作会使一部分皂素损失，所以应改进分离技术，提高皂素的提取率。胀鏝彈奥秘孫戶孪钇賻。3.2.6问题的解决方法（1）油茶种子质量的好坏，主要取决于品种的优劣，优良品种的产量高，种子质量好，所以改良油茶品种也是解决油茶开发的一个问题。现在有很多科技人员开始着手进行研究，将生物技术应用于改良品种是很好的方法。鳃躋峽祷紉诵帮废掃減。油茶常规育种是在自然林分中选育出优良品系，能够尽快获得增益的育种方法。传统上油茶多采用实生繁殖。明朝徐光启的农政全书对油茶选种、贮藏、育苗、整地和造林等作了记载：种楂法(秋间收籽时，简取大者，掘地作一小窖，勿令及泉，用沙土和了置窖中。至次年春分取出畦种，秋分后分栽，三年结实，属于较早的自然选种了。而进入生物时代后，育种就应从组织培养、分子标记、基因表达等方面进行研究25-28。稟虛嬪赈维哜妝扩踴粜。油茶组织培养29 油茶与山茶属其它植物一样，细胞不易诱导分化产生再生植株，导致油茶组织培养的难度较大。饮料茶叶和观赏茶花的组织培养在国内外已有报道，但对油料用的普通油茶方面报道还很少。最早是广西自治区林科所于1980年报道通过油茶组织培养诱导出胚状体；他们从1979年开始研究油茶胚状体、假珠芽成苗过程及腋生枝快速繁殖等再生方式，建立了油茶组织培养及其上山造林的技术，给油茶无性系繁育工厂化开辟了新的途径。1981年与1982年，湖南省邵阳地区林科所隆振雄和卢天玲先后分别通过油茶未成熟的子叶幼胚离体培养获得了完整的再生小植株，随后油茶组织培养基本停滞。2002年，中南林学院张智俊、毕方铖等通过油茶优良无性系的腋芽培养，诱导出现再生小植株，并筛选出了再生丛芽、子叶形成胚性愈伤组织及其不定芽分化的最适培养基配方；还通过RAPD鉴别，发现分子水平上的变异，为油茶优良无性系组培扩繁和生物技术育种的再生体系建立打下了基础。陽簍埡鲑罷規呜旧岿錟。油茶分子标记30 对油茶进行分子标记的目的是建立油茶不同品系的分子鉴别体系，并从中筛选与主要经济性状相关的特殊基因片段，有利于分子标记辅助选择育种。首先由中南林学院谭晓风等建立了改良CTAB法提取山茶属植物总DNA的技术方法，张自俊等在此基础上进行改良为同时提取DNA与RNA方法，改进了油茶RAPD反应体系。福建林学院张云等也对油茶随机扩增多态DNA条件作了研究。张自俊等以22个引物对12个油茶优良无性系进行RAPD标记，得到了141条多态性谱带，并通过引物将优良无性系与自然植株区别开来。雷治国等通过18条引物对90个油茶优良无性系进行RAPD标记，得到569条多态性谱带，其多态比率达到94.7 ，还找到了32条特异性谱带。湖南省林业科学院陈永忠等也对油茶“雄性不育”优良无性系进行鉴别标记，为建立比较完备的油茶优良无性系鉴别体系积累了丰富的技术与资料。沩氣嘮戇苌鑿鑿槠谔應。油茶分子图谱的构建与基因的分离30 20世纪90年代中后期，中南林学院经济林育种与栽培国家林业局重点实验室谭晓风教授等在山茶属植物分子鉴别的基础上开展油茶cDNA文库和EST文库的构建研究，得到了106库容量的油茶种子油脂转化高峰期的从DNA文库；在所构建的从DNA文库中挑选了2000多个克隆进行测序分析，从中分离出油茶种子中与脂肪酸、蜡合成和代谢有关的主要基因脱酰ACP硫酯酶(FatB1)基因、硬脂酰一ACP脱饱和酶(SAD)基因、油酸脱饱和酶(FAD2)基因、FAD 8基因、ACP基因等；还对中国沙梨自交不亲和等位基因进行了分离研究，分离出7个SNase新等位基因，以上这些基因已部分登陆到了GenBank，为油茶转基因育种与定向培育研究奠定了基础。钡嵐縣緱虜荣产涛團蔺。油茶功能表达检测和转基因育种30 油茶育种的目标是提高产油量，为了从更深层次探索油茶油脂转化过程中其功能基因的作用情况，湖南省林科院的陈永忠博士利用基因芯片技术对油茶果实的功能基因进行检测，旨在绘制各功能基因在油茶果实油脂转化过程中的表达谱，为进一步深入开展高产油量、高含油量和油茶优良的油茶新品种的定向培育作前期探索研究。懨俠劑鈍触乐鹇烬觶騮。上述这些方法都能够很好的用于油茶品系的改良，提高油茶的产量和质量，对工业化的生产有很大的益处。不仅仅是规模的扩大，而且提取的茶油和皂素的产量和质量均得到相应的改进和提高。謾饱兗争詣繚鮐癞别瀘。（2）针对于油茶种子中的含水量的问题，可以从采收、晾晒和加工三方面考虑。对油茶适时的采摘能够时期的含水量控制在一定的范围内有利于加工，在进行油茶油提取前，应对其进行蒸烤，使种子的含水量达到一定的水平，这样就可以保证后续加工的顺利进行。呙铉們欤谦鸪饺竞荡赚。（3）本实验中没有按照一般的提取方法进行提取茶油，结果是茶粕中含有一定的油脂，所以在进行皂素提取前一定要做好油脂的提取。一般的精炼方法是碱炼、水洗、脱色、滤压、脱臭和皂角处理几部分。按照这种方法可以得到较好的茶油，还能够提高皂素的提取率，所以在以后的研究中也该对茶油的提取方法进行改进。莹谐龌蕲賞组靄绉嚴减。（4）皂甙是易溶于水的，而且在提取的过程中它与糖类、蛋白质等有机物同时存在水溶液中，分离纯化皂素是关键的一步。本实验中应用乙醇沉淀法，除去部分糖类、蛋白质，但是在分离的过程中因为它们都是大分子物质，很难用一般的方法过滤除去，所以应用较好的分离纯化的方法是很必要的。麸肃鹏镟轿騍镣缚縟糶。目前，低压、中压、高压液相色谱以及反相高压液相色谱(RP-HPLC)己经成为分离皂甙的常用方法。DCCC(Droplet CountercurrentChromatography)是应用于皂甙分离的新的技术31，分离效能高，有时可将结构极为相似的皂素分开。该技术的原理是移动相液滴在通过与之不相容的固定液相的过程中产生连续分配，从而达到分离的目的。納畴鳗吶鄖禎銣腻鰲锬。层析法是比较经典的分离方法，由于皂甙极性较大，采用分配柱层析来分离的效果要比吸附层析好。常以硅胶为支持剂， 以不同比例的CHCl3(CH2C12)-CH3OH-H2