刘希红,伪狂犬

猪伪狂犬病,导师：张永红学生：刘希红班级：兽医硕士,猪伪狂犬病背景,该病最早发现于美国，后来由匈牙利科学家首先分离出病毒。由于本病的临床症状与狂犬病有类似之处，故在首次报告本病前曾误认为是狂犬病，也正是出于这个原因才采用了伪狂犬病这个名称。世纪中期，在东欧及巴尔干半岛的国家流行较广，20世纪60年代之前，猪被感染后其症状比较温和，在养猪业中未造成重大经济损失。20世纪6070年代，由于强毒株的出现，猪场暴发的数量显著增加，而且各种日龄的猪均可感染，其症状明显加剧。这种变化不仅存在于美国，在西欧各国如德国、法国、意大利、比利时、爱尔兰等国家也同样存在。,猪伪狂犬病背景,几年之后，此病相继传入新西兰、日本、我国的台湾，严重影响种猪场生产。我国自1947年刘永纯首次报道该病以来，随着养猪业集约化规模化的发展，已有20多个省市报道发生了该病，并在许多种猪场呈暴发流行趁势，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。猪感染伪狂犬病病毒后，免疫系统受到损害，因而易继发其它疾病，如猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍综合症和猪传染性胸膜肺炎。,猪伪狂犬病,猪伪狂犬（porcine pseudorabies，PPR）是由伪狂犬病病毒引起的一种急性传染病。该病可导致妊娠母猪流产，产死胎、木乃伊胎；初生仔猪具有明显的神经症状，并呈现急性致死性经过；成年猪多为隐性感染。本病也可发生于其他动物，主要表现为发热、奇痒及脑脊髓炎的致死性感染。,1、病原学,1、1形态结构伪狂犬病病毒属于疱疹病毒科( herpesviridae)疱疹病毒亚(Alphaherpesvirin- ae)，水痘病毒属的猪疱疹病毒I型(Suid herpes virus I)。病毒粒子为椭圆形或圆形，位于细胞核内无囊膜的病毒粒子的直径约110-150nm，位于胞浆内带囊膜的成熟病毒粒子的直径约为150-180nm，囊膜外面有呈放射状排列的8-l0nm长的纤突，病毒的囊膜与感染的发生有密切的关系，没有囊膜的裸露衣壳虽同样具有感染性，但其感染力较带囊膜的病毒约低80%。,1、病原学,1.2病毒基因组成： PRV病毒为线形双股DNA病毒，大小约180kb，基因组G+C含量在疱疹病毒中高达74%。 病毒基因组由长独特区（Unique long region，UL）、短独特区（Unique short region，SL）以及位于US两侧的末端重复序列（Terminal repeat，TR）与内部重复序列(Internal repeat，IR)组成。对PRV基因组序列测定发现其由72个阅读框组成，可编码70种蛋白，编码gc、gE、gG、gI、gM和gN的基因为病毒复制非必需的，gB、gC、gD、gE和gI与病毒的毒力有关，其中TK基因是PRv最主要的毒力基因；糖蛋白gB、gC、gD在免疫诱导方面最为重要。 PRV只有一种血清型，但不同毒株在毒力和生物学特性等方面存在差异。,病毒重要毒力/免疫原性相关基因（编码糖蛋白的功能）,基因名称 主要功能 备注 TK基因 在神经细胞中的增殖 主要毒力相关基因 并产生感染性粒子 gE基因 病毒在神经传递有关 病毒增殖非必须基因 RR基因 在急性感染和潜伏感 染中起关键作用gB基因 免疫原性基因 抗体检测靶标蛋白gC基因 免疫原性基因 病毒入侵所必须 gD基因 病毒入侵；保守性强 PCR诊断的靶蛋白,1、3 理化特性: PRV是疱疹病毒中抵抗力较强的一种。 1.2.1 在潮湿条件下：pH68之间保持稳定，温度介于4-37，pH为4.3-9.7时，PRV 1-7 d失活。 1.2.2 腐败条件下，病料中的病毒经11d失去感染力。 1.2.3 PRV对乙醚、氯仿等脂溶剂，福尔马林和紫外线照射等敏感。 1.2.4 5%石碳酸经2min灭活，5-10 g/L氢氧化钠使其灭活。 1.2.5 对热的抵抗力较强，55-60经30-50 min才能灭活，80经3min灭活。,1、4 感染特点: PRV感染的特点是在感染的急性后期有一个潜伏感染期。 1） 感染初期：PRV经口鼻感染后首先在上皮组织中复制，完成一个复制周期后子代病毒大量增加导致对一级神经元的扩大感染。 2） 在潜伏感染期中：病毒DNA持续存在于感染部位但不产生感染性病毒子。 潜伏感染的猪一直是使病毒话化、散毒和在易感猪群中传播的传染源。 应用敏感的检测方法如分子杂交和PCR方法可以检测到病毒基因组DNA的存在。,3）病毒激活： 受外界不良因素等应激造成猪免疫力减弱时，潜伏状态的病毒可转化为具有感染性的病毒。 猪是该病毒的主要保藏宿主和带毒者，该病毒能在猪的神经细胞中呈隐性状态，此时病毒基因组绝大多数基因并不表达，只有一小段仍然转录，即隐性状态相关转录物，但没有翻译产物，病毒DNA在细胞核内以附加体的形式存在，而带有隐性病毒的神经元功能仍是正常的，隐性病毒在一定条件下可以被激活。因此，猪对该病的传播起着重要的作用。,4）病毒潜伏感染的部位：野毒感染：分布于一级、二级和三级神经元中。弱毒：不能在三级神经元中。这是由于gE缺失，病毒在神经系统中的传递能力下降。,2、1 伪狂犬病毒的感染谱： PRV是感染动物种类多和致病性强的一种病毒。（1）家养动物： 猪：猪是PRV的储存宿主和传染源，尤其耐过的呈隐性感染的成年猪是该病的主要传染源。 牛羊：出现奇痒而死。（2）实验动物：家兔、犬、猫、小鼠，但以家兔最敏感。（3）野生动物：狐狸、水貂等,2、流行病学,2.2、伪狂犬病传播途径： 2、2、1水平传播 1）空气传播：从育肥猪经空气传入（2-3km），是目前大多数猪场发生伪狂犬病的风险点。需要监测90日龄猪的伪狂犬病gE抗体。 2）引入潜伏感染猪 3)引入带毒公猪精液 4）（蓝耳病）血清人工驯化技术的风险,2、2、2垂直传播：1）胎盘传播2）其他动物传播A：鼠类（如果在猪场周围发现鼠猫和猫死亡数量高于平时，需要注意伪狂犬传入的风险）B：野猪：,3、临床症状,临床症状以神经症状、流涎，呼吸困难，繁殖障碍，生长停滞，失重及高死亡率为主，其中，临床表现随年龄不同有很大差异。1）哺乳仔猪：出生后3天即可发病，症状表现为精神沉郁、不吃奶、腹泻、呕吐、呼吸困难、兴奋不安、鸣叫、运动障碍、共济失调、角弓反张等神经症状，死前尖叫、口吐白沫。仔猪可于发病后1-2天内死亡，死亡率高达100%。2）仔猪：仔猪（断奶后至kg阶段） 症状与乳猪相似，只是轻微一些，发病后主要表现为呼吸困难、呕吐、腹泻及一些神经症状。其发病率与死亡率比乳猪低。对发病的个猪场作粗略统计，发病率，死亡率以上。,仔猪死亡前游泳状、鸣叫、声音嘶哑,仔猪的瘙痒,运动障碍、共济失调、犬坐式,口吐白沫,结膜炎，呼吸困难、流涎,仔猪可于发病后1-2天内死亡，死亡率高达100%。,3）育肥猪：大多数伴有体温升高，呼吸困难，咳嗽、流鼻涕，有的呕吐、腹泻，部分病猪出现神经症状，一般不发生死亡，耐过后呈长期隐性感染、带毒或排毒。,腹泻,4）成年猪：一般不呈现可见临床症状或仅表现为轻微体温升高，一般不发生死亡。,5）母猪：妊娠初期，可在感染后的20d左右发生流产；在妊娠后期，经常发生死胎和木乃伊，或者产出弱胎和死胎；返情，屡配不孕。,母猪感染PPV，流产、死胎,母猪感染PPV，产下的死胎、木乃伊胎,母猪感染PPV，产下的死胎、木乃伊胎,6）种公猪：表现为睾丸肿硬、萎缩、性能低或丧失，精子活力差等。,4、病理变化,新生仔猪和哺乳仔猪在自然感染和人工感染PRV时均表现出较为明显的眼观病变: 上呼吸道黏膜及扁桃体出血水肿，胃肠黏膜可见卡他性或出衄性炎症;中枢神经系统症状明显时，脑膜充血、出血、水肿，脑脊髓液增多;组织学病变主要是中枢神经系统的弥散性非化脓性脑膜脑炎及神经节炎，有明显的血管套及胶质细胞坏死。在脑神经细胞内、鼻咽黏膜、脾及淋巴结的淋巴细胞内可见核内酸性包涵体。仔猪人工感染PRV强毒后出现了特征性的扁桃体坏死，淋巴结轻度充血或周边出血，肝和脾的浆膜面下有时可见散在的黄白色疱疹样坏死灶，肾脏柔软肿胀，表面小点出血。成年猪感染PRV发生了坏死性肠炎。母猪感染PRV后可见轻微子宫内膜炎和坏死性胎盘炎，公猪可发生阴囊炎。,软脑膜充血，其下脑沟积有出血性水肿液,胃底区粘膜出血性卡他,伪狂犬患猪剖检淋巴结肿大,伪狂犬患猪剖检肺部病变,伪狂犬患猪剖检肝脏白色坏死点,肾上腺切面坏死点,肾上腺皮质及隋质部可见散发性的坏死点,3、伪狂犬病诊断,本病仅根据临床症状及流行病学特点很难作出诊断，确诊需要借助实验室诊断技术。为了建立适合本病诊断和流行病学调查的方法，国内外许多学者进行了大量的研究。猪伪狂犬病检疫、诊断常用的方法有以下几种：3.1 抗体检测1) 中和试验：国际贸易制定方法效价1:2 即可判为感染阳性；但是，阴性血清未必是真阴性，因为孢疹病毒的免疫原性弱。,3、伪狂犬病诊断,2）ELISA（含鉴别诊断ELISA）：鉴别诊断标记：gE，gG，gC感染后9-14天可检测到gBgE抗体，均可持续5-6个月。母原抗体可维持到60-70日龄。个别场达到106天。gE抗体可从乳汁获得，在血清中变为阳性。3）乳胶凝集试验：可在现场操作灭活病毒致敏乳胶而成为抗原，主要检测IgM抗体（早期抗体）。感染或免疫后40天之内为IgM阳性。尚未研制成功检测gE抗体的乳胶凝集试验。,3、伪狂犬病诊断,3.2 病原分离鉴定1）采集：活猪： 口咽液、鼻拭子。 病死猪：脑组织、扁桃体、肺脏；匀浆。2）接种细胞：原代或传代猪肾细胞：PK-15，SK-5细胞。此外， BHK-21、IBRS-2细胞用于病毒的培养。3) 病变细胞鉴定：免疫荧光；PCR(gD、gE)；（已知血清的）中和试验,3、伪狂犬病诊断,3.3 动物接种试验1）本动物接种：常用2周龄一下的抗体阴性仔猪2）实验动物：小鼠、家兔：奇痒（啃咬注射部位）。3）人工感染时，注意生物安全，防止病原扩散,4、 预防,一旦受到伪狂犬病毒的攻击，会给猪场（尤其有母猪的猪场）带来严重的损失。可令大量母猪流产、死胎和仔猪死亡；疫情停止后猪群可长期带毒。因此，必需加强对伪狂犬病的预防和控制，降低伪狂犬病的发病率，降低减少经济损失。,4、1 疫苗免疫 4.1.1、伪狂犬病疫苗发展历程1）灭活疫苗：在体外培养病毒强毒株，用甲醛等灭活病毒制成疫苗。 基因缺失灭活疫苗：伪狂犬病根除计划后期使用（法国与德国使用）。旨在减少环境中的病毒。2）弱毒疫苗：通过非猪源细胞或鸡胚传代致弱，或在突变剂的作用下获得。 Bartha株、BC株、BUK株、MK-21株、MK-35株、ALFORT-26株及NIA-4株等。,3）基因缺失疫苗：-第1代基因缺失疫苗：TK基因缺失。-第2代基因缺失疫苗：TK-/gG-、TK-/gE-、TK-/gC-第3代基因缺失疫苗：多价基因工程疫苗,不同疫苗毒株的基因缺失背景,疫苗公司 毒株 缺失（失活）的基因 辉瑞 AuskipraBUK gE梅里亚 Akipor 6-3 Bartha gE勃林格 Bartha K-61 gE海博莱 Bartha K-61 gE英特威 Nobi-Vac Begonia TK，gE富道 Suvaxun AujeszyNIA3-783 TK，gE先灵葆雅 PrV Marker Gold S-PrV TK，RR ， gE，gG,4.1.3 疫苗的免疫程序,免疫途径：1）肌肉注射：免疫日龄大的猪2）滴鼻免疫（适用于出生仔猪：避免母原抗体干扰；提升粘膜免疫）3）免疫剂量：只能多，不能少。4）免疫程序： 母猪一年3-4次 后备猪：出生滴鼻+50日龄免疫（出栏）；配种前再免疫。,4.1. 2 疫苗接种的目的,1）提供最高的临床。2）极大地降低病情的严重性。3）极大地减少排毒量、降低病毒循环，缩短排毒期。4）通过血清检测，辨别受感染猪群。,4.1.3 种猪的免疫接种计划,母源免疫目的： 1）保护母猪、胎儿 透过母源抗体保护仔猪达10周龄；确保母猪通过初乳，将母源抗体传给仔猪，而保护仔猪。 2）降低猪群中的排毒量。,种猪免疫计划,弱毒疫苗AKIPOR 6.3 (猪克伪)2 ml 2 次注射 (3-4 周间隔) ：第一次配种前1 次注射 ：产前 2-3 周,3-4周,2-3周,2-3周,肥育猪的免疫计划,目的:确保肥育猪有主动免疫，以代替们母原抗体的临床保护预防猪只临床症状在受強毒感染的猪群里，縮短排毒期及減低排毒量,肥育猪的免疫计划,弱毒疫苗: AKIPOR 6.3 (猪克伪) 未被感染的育肥猪群; 母猪已有免疫力再育肥开始阶段免疫一针，也就是至少要在10周龄以后。,断奶猪,大肉猪,10 周龄,肥育猪的免疫计划,断奶猪,育肥猪,10周龄,14 周 龄,弱毒疫苗: AKIPOR 6.3 (猪克伪) 未被感染的育肥猪群; 母猪已有免疫力再育肥开始阶段免疫一针，也就是至少要在10周龄以后，间隔4周免疫第二针，或者根据血清学情况进行免疫。,5、治疗：,目前，PRV尚无药物治疗方法，疫苗的免疫接种是预防和控制猪伪狂犬病的根本措施。我国在学习和借鉴国外PRV检测、控制和防治经验的基础上，通过免疫监测，疫苗注射，逐步淘汰阳性猪，加强生产管理，加强引进种猪管理等措施，使PRV发病率大大降低。,6、猪场净化,为了解决当前国内猪伪狂犬病出现的上述新变化，从根本上减少猪伪狂犬病给养猪业带来的经济损失，我们还应该回归到“伪狂犬病的净化”措施上来。相对其他猪传染性疾病而言，猪伪狂犬病是比较容易消灭或净化的一种疾病，目前，世界上有多个国家和地区已经消灭或净化了猪伪狂犬病。我们不奢求在全国范围内、短时间净化伪狂犬病，但我们可以在一定时间内以“猪场”为单位净化伪狂犬病。猪伪狂犬病的净化措施大致有四种：,1）、“淘汰扩群法”：即在气候比较温暖的季节，或者在猪价比较低的时候淘汰猪场内所有猪只，然后对栏舍内设施设备进行整理、清扫、彻底消毒，对栏舍的周围场地、道路清扫、彻底消毒，空置一段时间后再进行第二次消毒，最后再引进经检测无伪狂犬病毒感染的种猪进行扩群。该方法操作简单、成功率大、费用高；,2）、“后代隔离法”：即仔猪提早断奶，然后将断奶仔猪转移至确定的“无伪狂犬病毒的清洁区”内饲养。该方法可阻断多种传染因子的传播，有利于多种疾病的净化，但要求母猪必须不感染伪狂犬病毒或伪狂犬阳性母猪不在排毒期，对管理要求高；,3）、“检测淘汰法”：即反复多次对全场猪群逐只进行伪狂犬野毒抗体检测，淘汰伪狂犬野毒抗体阳性猪只，再引进伪狂犬野毒阴性种猪扩群。该方法对管理影响小，实施方便，但是对伪狂犬野毒阳性率比较高的猪场不适用，需多次检测，检测费用比较高；,4）、“管理免疫法”：即加强饲养管理，做好生物安全措施，确保每次引进的种猪都是伪狂犬阴性猪，同时对全场猪群进行伪狂犬基因缺失弱毒疫苗（伪狂静）免疫接种。该方法操作简单、费用低，比较切合中国实际。到目前为止，我国有多个规模养猪场多年一直采用这种方法，取得了明显效果，部分猪场如，广东长江食品集团有限公司、广东农科院畜牧所种猪场和（福建）漳州长泰联胜核心