血液病分子病理诊断

血液病分子病理诊断临床应用,北京海思特临床检验所 分子病理室2013.06,多层次检测平台综合应用,细胞遗传学,形态学 分子生物学 流式细胞学,染色体核型分析,荧光原位杂交,RT-PCR,测序,多重 荧光巢式PCR 定量PCR,直接测序 GeneScan,血液病诊断分型 定量监测MRD 白血病预后 靶向治疗 耐药及疾病进展监测 范可尼贫血 嗜血细胞综合症等,血液病分子病理检测,融合基因检测基因突变检测血液遗传病检测,大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性,个案 t(15;17) with t(9;22),46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21),BM morphology: APL FCM: M3 QPCR: PML/RARA + BCR/ABL(190)+,多重巢式RT-PCR 筛查 定性检测 用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。 荧光定量RT-PCR 定量检测 内参基因 c-abl 结果以比值表示，全程动态监测 融合基因的拷贝数/内参基因 c-ablPCR-测序,血液病分子病理检测,筛查 每月定量监测 3-6月定量监测 每月定量监测,CMPD-慢性骨髓增殖性疾病,*William V,Stefan N. A unique activating mutation in JAK2(V617F) is at the origin of polycythemia vera and allows a new classification of myeloproliferative diseases. Hematology . 2005,10-13:195-200,CMLBCR/ABL,约95%的CML5%的儿童ALL15%-30%的成人ALL,CMPD-慢性骨髓增殖性疾病,Molecular Pathology：the molecular basis of human disease by Willam B. Coleman,Gregory J. Tsongalis,激活JAK2基因使细胞对生长因子敏感性增高 PV、ET、CIMF 不是独立的诊断指标 MDS、3%CMML,JAK2V617F 缬氨酸 苯丙氨酸,MDS-骨髓增生异常综合症,分子方面的理论有限，但发现有5q31,7q31，20q12的反复缺失，提示可能这些区域存在肿瘤抑制基因。,白血病-31种融合基因筛查,55% L型5% V型 体外对ATRA的敏感度低 40% S型 低分化M3其他融合基因,M3: PML-RARA,t(5;17)(q32;q21),t(11;17)(q13;q21),t(11;17)(q23;q21),t(15;17)(q22;q21),PML-RARa,PLZF-RARa,NPM-RARa,NuMA-RARa,95%,A(p.E255K)和c.944CT(p.T315I)。,WT1表达量检测*约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志融合基因定量检测,MRD监测,*Current Opinion in Oncology 2010, 22:656663,WT1 (Wilms tumor gene),1.WT1基因在各类型白血病中均能表达(ALL，AML，CML，MDS).2.表达水平与白血病的进程相关，可作为化疗和骨髓移植后MRD检测敏感指标。3.鉴别白血病与反应性白细胞增高。,初诊 B-ALL; MLL-AF4 t(4;11)(q21;q23),WT1 (Wilms tumor gene),弟供姐异基因 造血干细胞移植+14d白细胞植活+27d血小板植活,嗜血细胞综合征相关基因突变 PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP LYST、AP3B1、RAB27A范可尼贫血基因突变FANCA 60% 、FANCC 15% 、FANCG 10% WASP综合征纯红再障 RPS19先天性角化不良 DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2,血液遗传病分子检测,PRF1 10q21-10q22 细胞杀伤功能缺陷,嗜血细胞综合征 Perforin,FANCA 16q24.3FANCC 9q22.3,范可尼贫血基因检测,RPS19 19q13.2 hot spot of missense mutations - codons 52 and 62常染色体1岁 女 Exon4发现点突变：c.184CT(p.R62W)，其他外显子未发现突变,纯红再障-RPS19基因检测,DKC1 Xq28X-连锁隐性7岁 男 DKC1基因Exon11发现错义突变：c.1058CT(p.A353V),先天性角化不良,PCR Secquence,送检标本要求,Molecular platform,谢谢！,耐药位点 伊马替尼 尼洛替尼 达沙替尼,17P13- 11q22-,12 13q14-,Simple