实验五 大肠杆菌与沙门氏菌(精选PPT)

实验六细菌生化特性试验 扬州大学兽医学院2020年4月20日星期一 1 实验原理 各种细菌在其新陈代谢中 由于利用营养物质的能力有所差异 排泄的代谢产物亦不同 所以利用这点进行生化试验 可达到鉴定细菌种的目的 尤其在鉴定肠道杆菌时 生化试验是极其常用的一种方法 2 一 目的要求 学习常用的生化实验方法 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点 3 个体为杆状 散在或成对 G 二 背景知识介绍 大肠杆菌 中等大小0 4 0 7 2 3 m 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原 与广泛的兽医临床病征有关 如 犊牛的肠道感染和水泻 幼猪的水泻和腹泻 断奶仔猪水肿病 狗的尿道感染 鸡 脐炎 眼炎 肠炎 肝周炎 肺炎 气囊炎 腹膜炎 肉芽肿等 4 5 6 个体为杆状 散在或成对 G 沙门氏菌 是一大群寄生于人和动物肠道内 生化特性和抗原结构相似 G 兼性厌氧的无芽胞直杆菌 在医学 兽医和公共卫生上均十分重要 绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性 能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病 人类食物中毒的主要病原之一 7 8 伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 除雏沙门和鸡沙门氏菌外 其余各菌具有周生鞭毛 9 三 实验材料 常规接种工具 接种棒 酒精灯等革兰氏染色液 玻片 滴管等菌种 大肠杆菌的普通琼脂 或麦康凯 培养物 1个 组 沙门氏菌的普通琼脂 或麦康凯 培养物 1个 组 大肠杆菌 沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物 大肠杆菌 沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物 培养基 三糖铁斜面 1支 人 生化管 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸 1套 人 试剂 吲哚试剂 M R试剂 V P试剂等 10 四 实验内容 观察大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现 大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现 沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现 沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现 大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色 镜检 记录结果 11 三糖铁琼脂接种 挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面 置37 培养 12 生化管接种培养 糖发酵试验 葡乳麦甘蔗H2S试验 尿素酶试验 枸橼酸盐利用试验 葡乳麦甘蔗H2S尿枸 13 葡乳麦甘蔗H2S尿枸 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 置37 培养 14 吲哚试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中 置37 培养3 5d 静置分层后 沿试管壁加入吲哚试剂1mL 上层变为红色者为阳性反应 15 吲哚试验原理 蛋白质中的色氨酸 红色 先用乙醇溶解试剂后加盐酸 避光保存 16 M R试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中 置37 培养3 5d 于培养物中加入几滴试剂 变红色者为阳性反应 桔红到黄色则为阴性 17 V P试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中 置37 培养3 5d 于培养物中加入0 5mLV P甲液 随后加V P乙液0 5mL 轻摇 静置10 15min 15min内变红者为阳性 18 M R与V P试验原理 M R试验 甲基红是一种pH指示剂 当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性 pH4 4 6 2红 黄 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2 3 丁二烯醇 某些细菌能发酵 二乙酰 碱 V P试验 胨中的胍基化合物 注意 通常M R和V P试验是密切相关 如果一个微生物M R是阳性 则V P是阴性 或者相反 粉红色化合物 19 M R试剂 V P试剂 甲基红0 02g95 酒精60mL蒸馏水40mL 甲液 萘酚酒精溶液 萘酚5g无水乙醇100mL 乙液 KOH溶液 KOH40g 水100ml 将甲液和乙液分装棕色瓶中 于4 10 保存 20 五 结果观察 大肠杆菌的生长表现 普通琼脂 形成圆形 光滑 湿润 半透明 灰白色菌落 直径约2 3mm 麦康凯 琼脂上形成红色菌落较大的菌落 21 三糖铁琼脂 反应模式表示 22 沙门氏菌的生长表现 普通琼脂 生长不良 麦康凯 琼脂上形成灰白色菌落 23 三糖铁琼脂 反应模式表示 24 细菌的染色 镜检 大肠杆菌 沙门氏菌 G 直杆菌 大小0 4 0 7 2 3 m 无芽胞 两端钝圆 散在或成对 25 生化管接种培养 葡乳麦甘蔗H2S尿枸 葡乳麦甘蔗H2S尿枸 大肠杆菌 沙门氏菌 26 吲哚 M R V P试验结果 大肠杆菌 沙门氏菌 吲哚试验 M R试验 V P试验