如何实现不同检测系统检验结果的可比性

如何实现不同检测系统检验结果的可比性,广州中医药大学第二附属医院广 东 省 中 医 院张秀明,学习和讨论要点,定义和术语分析质量指标的设定可报告范围核实实验精密度核实实验比对试验设计方案要点不同检测系统检验结果可比性的评估自建检测系统的校准方法,术语和定义,检测系统：完成一个检测项目所需要的仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序等的组合。配套检测系统：整个检测系统由同一厂商或仪器的指定厂商提供并配套使用，若该系统经FDA认可,使用这样的检测系统对病人标本进行检验，其结果具溯源性。 自建检测系统：实验室根据自己的意愿自行建立的检测系统，其检验结果往往不可溯源，不同检测系统间缺乏可比性。,溯源性和可比性,溯源性:通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。可比性:不同检测系统或不同检验方法对一批病人标本测定结果的一致程度。溯源性是可比性的基础，可比性是溯源性的目标。追求检验结果的可比性是最大的质量。,CLIA88对检测系统的要求,在一个新检测系统用于病人标本检测前必须评价检测系统的六大分析性能检测系统经FDA认可后，用户若完全按照厂商要求，使用相应配套试剂、校准品，操作程序，开展质量控制，定期保养，则该系统各项目的操作分析性能完全由厂商提供，承担责任。在开展检验期间不得对检测系统作任意变动或修改,CLIA88,方法性能确认TEST METHOD VALIDATION,Checklist Requirements Prior to reporting patient test results, the laboratory must verify or establish, for each method, the performance applications for the performance characteristics.,CLIA88,检测系统的分析性能,PrecisionAccuracy analytic sensitivity （lower detection limit）analytic interferences（specificity）reportable range（AMR and CRR） reference intervals （normal values）,CLIA88,检验程序的质量保证,5.6.1 实验室应设计内部质量控制体系以验证检验结果达到预期的质量标准。 5.6.2 适用且可能时，实验室应确定检验结果的不确定度。 5.6.3 应设计并实施测量系统校准和真实度验证计划，以确保结果可溯源至SI单位（溯源性）。5.6.4 实验室应参加如外部质量评价计划组织的实验室间比对活动。,ISO15189,检验程序的质量保证,5.6.5 当确实无正式的实验室间比对计划可供利用时，实验室应建立机制，用于决定未经其他方式评估程序的可接受性。 5.6.6 当同样的检验应用不同程序或设备，或在不同地点进行，或以上各项均不同时，应有确切机制以验证在整个临床适用区间内检验结果的可比性。5.6.7 实验室应文件化并记录比对活动，只要适用，针对其结果迅速采取措施。对识别出的问题或不足应采取措施并保留记录。,ISO15189,实现可比性的大体步骤,设定分析质量指标核实检测系统的主要分析性能病人结果可报告范围检测系统的精密度检测系统的准确度方法学比较试验临床可接受性能评价自建检测系统的校准,分析质量指标,斯德哥尔摩协议（Scan J Clin Lab Invest 1999, 57: 475-585 ）IFCC/IUPAC/WHO三机构于1999年4月在瑞典斯德哥尔摩举办的“建立全球检验医学质量技术要求的策略会议”上提出了“一致性声明”，明确了设定分析质量指标的方法。分析质量指标包括允许不精密度、允许偏差和允许总误差。,根据管理法规设定分析质量指标,准确及时 优质服务 科学管理 持续改进确保参加卫生部临检中心组织的室间质评项目95%以上PT成绩在CLIA88允许误差范围（100分）和/或VIS成绩优秀，确保常规生化、血细胞分析、出凝血检验等项目在不同检测系统间的相对偏差1/2 CLIA88 ，批内不精密度1/4CLIA88，日间不精密度1/3CLIA88。追求批内不精密度、日间不精密度、不同检测系统间的系统误差 1/6 CLIA88。,根据生物学变异设定分析质量指标,生物学变异或称生理变异（CVB），包括个体内变异（CVI）及个体间变异（CVG），也就是通常所说的生理波动。人群的生物学变异 =（CVI2 + CVG2）1/2根据生物学变异可导出临床检验项目的允许不精密度、允许偏倚和允许总误差。,分析质量指标,分析变异的质量指标CVA0.25CV1, 理想CVA0.50CV1, 合适CVA0.75CV1, 低限分析偏差的质量指标BA 0.125 （CVG2+ CV12）1/2, 理想BA 0.250 （CVG2+ CV12）1/2, 合适BA 0.375 （CVG2+ CV12）1/2, 低限,分析质量指标,允许总误差：总误差（TE）是各种类型的随机误差（RE）和系统误差（SE）的总和。所选用的检测系统或方法的总误差必须在临床可接受的水平范围内，即允许总误差（TEa）。质量指标 TEa1.65（0.25CV1 ）+0.125(CV12+CVG2)1/2，理想 TEa1.65（0.50CV1 ）+0.250(CV12+CVG2)1/2，合适 TEa1.65（0.75CV1 ）+0.375(CV12+CVG2)1/2，低限,CAP认可要求,Has the laboratory verified or established and documented analytic accuracy and precision for each test?实验室必须验证或建立每个试验的准确度和精密度，并有记录。,准确度性能确认方法,对检测系统进行校准和校准验证能力验证结果，分析前次的PT标本，与回报结果比较由供应商或制造商提供关于试剂、程序或检验系统溯源性的声明文件。应用有证参考物质，如CRM470等。分析病人标本，将结果与参考方法的检测结果 比较。分析病人标本，将结果与实验室过去确认的方 法检测结果比较。,ISO15189,制定校准计划,启用新的检测系统，在分析病人标本前。在使用过程中，仪器进行较大的维修、维护与保养。在分析检测过程中，更换试剂批号或更换其他厂家的试剂。质控失控需要校准时。,校准验证,确保现在的校准状态是有效的 对于一点校准的分析，至少6个月校准验证一次,校准验证结果分析,验证1：校准直线的斜率与1无统计差异，截距与0无统计差异，校准验证在可接受范围内，方法和或仪器的校准有效。验证2：各点校准验正值在可接受的范围内，但校准直线的斜率与1有统计差异，截距与0有统计差异，校准验证在可接受范围内，方法和/或仪器的校准有效。,校准验证结果分析,差异1：校准直线的斜率与1无统计差异，截距与0无统计差异，有超过了可接受范围的校准验证测定值，方法和或仪器的校准无效。该现象通常由随机误差造成。差异2：校准直线的斜率与1有统计差异，截距与0有统计差异。有超过了可接受范围的校准验证测定值，方法和或仪器的校正无效。该现象由系统误差造成。,精密度试验基本要求,做重复性试验的样品一定要稳定；它的基质组成应尽可能相似于实际检测的病人标本；样品中的分析物含量应在该项目的医学决定水平处；尽可能地做2个以上水平的精密度实验。如果对公司的检测系统作实验证实或核实，则选取的样品分析物含量尽量与公司对检测系统性能评估时采用的含量一致，便于比较。,精密度试验基本要求,采用冰冻保存的样品一定要注意内含分析物的稳定，要严格控制冻融、混匀的操作。实验时按厂商操作规程要求做好校准，并且一定要和实验样品一起做质量控制。收集实验数据，计算均值、标准差和变异系数。千万不可用一个项目组成的检测系统被评价资料认可分析系统所有项目检测系统的性能。,常用的精密度实验方法,批内是将评价样品随机插入病人标本被检测，但一批内连做20次；天间是每天做一次评价样品，累积20次结果。常规有控制品进行日常的质量控制检测，绘制控制图，控制检测质量。天间精密度评价的20次结果，对应每天质量控制都在控。,NCCLS EP-5文件精密度实验方法,对稳定的实验样品每天做二批实验，批间相隔的时间不少于2小时，每批对样品做双份测定，共做20天实验。一共有80个结果，40对。每对结果间的差是每批的批内差。在20天共有40批，这些差值客观地反映了较长时间周期内的批内不精密度。,ALT测定日间不精密度评价,AST测定日间不精密度评价,TP测定日间不精密度评价,ALB测定日间不精密度评价,ALP测定日间不精密度评价,GGT测定日间不精密度评价,T-BIL测定日间不精密度评价,D-BIL测定日间不精密度评价,GLU测定日间不精密度评价,UA测定日间不精密度评价,Urea测定日间不精密度评价,Crea测定日间不精密度评价,CO2测定日间不精密度评价,TCH测定日间不精密度评价,TG测定日间不精密度评价,CK测定日间不精密度评价,LDH测定日间不精密度评价,HBDH测定日间不精密度评价,HDL-C、LDL-C测定日间不精密度评价,载脂蛋白测定日间不精密度评价,CK-MB测定日间不精密度评价,特殊蛋白测定日间不精密度评价,NA、K测定日间不精密度评价,Cl、Ca测定日间不精密度评价,Mg、P测定日间不精密度评价,可报告范围核实实验,The ANALYTICAL MEASUREMENT RANGE (AMR) is the range of analyte values that a method can directly measure on the specimen without any dilution, concentration, or other pretreatment not part of the usual assay process分析测量范围（AMR）分析方法能直接测定样本中的待测物质而不需稀释或浓缩或其它的预处理,可报告范围核实实验,The CLINICALLY REPORTABLE RANGE (CRR) is the range of analyte values that a method can measure, allowing for specimen dilution, concentration, or other pretreatment used to extend the direct analytical measurement range临床可报告范围（CRR）样本可通过稀释或浓缩或其它的预处理，以扩展其准确测定的范围，可结合临床要求。,病人标本可报告范围核实实验,病人结果可报告范围是检验方法的重要分析性能。病人标本未经任何处理,由检验方法得到可靠的结果范围为病人结果可报告范围。将样品作不同浓度稀释或配制后，将预期值与实测值作比较，绘制在座标纸上应呈一条通过原点、斜率为1的直线。直线所达到的限值即为该方法的病人结果可报告范围。,病人标本可报告范围核实实验,收集高值（H）病人血清标本（超过试剂说明书的线性范围上限）和低值（L）病人血清标本（超过试剂说明书的线性范围下限），适当比例混合（100L、80L+20H、60L+40H、40L+60H、20L+80H、10L+90H、100H），形成系列血清。在相应的检测系统上对系列血清进行检测，重复4次，记录结果。,病人标本可报告范围核实实验,以4次重复测定的均值表示H和L两个样品测定结果，依比例稀释关系计算出各个样品的预期值，每个样品重复测定4次，得4个实测值，与预期值形成4对预期值和实测值；在坐标纸上，以x表示预期值，y表示实测值，将所有实验结果点在图上；计算回归方程：Y=bX+a，若b在0.97-1.03之间，a接近于0，则直接判断可报告范围在实验已涉及浓度。,分析灵敏度（最低检测限）,方法一：分析生理盐水、蒸馏水或“0”浓度质控品至少10次；计算均值、标准差；2倍标准差即是分析灵敏度或最低检测限。方法二：分析至少4个浓度水平的校准品或能力验证标本或线性标准和空白，将结果作图，分析灵敏度是线性的最低点。如果该直线通过“0”，灵敏度即为“0”；如果灵敏度不是“0”，由最低临界值确定该灵敏度水平。,分析干扰（特异性）,以下一种或多种方案可确定方法特异性:参考试剂盒或文献报道给出的特异性指标。本实验室的PT结果与同行间的一致性以反映方法的特异性。可用常见的干扰物质（如血红蛋白、胆红素、脂肪等）进行干扰试验以确定方法的特异性。,携带污染,准备4个样本杯, 分别盛放3个相同低浓度的病人标本(分别标为L1, L2, L3)和1个高浓度病人标本标本(H)。按L1，L2，H，L3顺序在样本架上放置标本， 进行分析。携带污染率的计算如下： Percent Carryover = （ L3 L2）/H X 100%该方案研究的是样本针的携带污染情况,携带污染,准备8个样本杯, 分别盛放4个相同低浓度的病人标本标本(L1, L2, L3，L4)和4个高浓度病人标本标本(H)。按H1，H2，H3，H4，L1，L2，L3，L4顺序 在样本架上放置标本，进行分析。携带污染率： Percent Carryover = L1 （ L3+L4）/2 / （H3+H4）/ 2-（L3+L4）/2 X 100%,建立或验证参考范围,Has the laboratory established or verified its reference intervals (normal values)?建立参考范围：NCCLS C28-A “How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory”。参考范围验证 ：NCCLS C28-A validate the transference of established reference intervals to the individual laboratory,参考范围验证方法,分析至少20 例健康自愿者（无已知疾病、能够走动、无任何用药、重量在健康范围）的标本，统计分析结果的频数分布，选择合适的统计方法确定95%的参考范围，若在推荐的参考范围内，或仅有5%的数据超出推荐的参考范围，该参考范围可接受。,比对试验,If the laboratory uses more than one instrument to test for a given analyte, are the instruments checked against each other at least twice a year for correlation of patient/client results? 实验室使用一台以上的仪器进行同一试验，须每年至少进行两次病人结果的比对,比对试验设计方案要点,1. 各种仪器处于良好的工作状态，严格按SOP操作。2. 检验人员有足够的时间熟悉检测系统的各个环节，熟悉评价方案。3. 在整个实验中，保持实验方法和比较方法都处于完整的质量控制之下，始终对实验结果有校准措施。4. 实验时间至少做5天，时间长一些更好，可以客观反映实际情况。,比对试验设计方案要点,5. 至少做40份病人标本，多一点更好。6. 尽可能使50%的实验标本分析物的含量不在参考区间内，各个标本分析物含量越宽越好。7. 不要使用对任一方法有干扰的标本。8. 每份标本应有足够的量，以便使实验方法和比较方法都能做双份测定。,比对试验设计方案要点,9. 将标本按1、2、3、4、5、6、7、8顺序 排列先测一遍，然后将顺序倒过来做双份第二次测定。10. 应在2个小时内两种方法对同批标本分别开始实验，最好使用当天采集的标本。,实验数据的收集、处理和应用,1. 不采用已明确有人为误差的结果。2. 记录实验结果。若两方法结果的差值大于任一方法的批内不精密度时，应查对标本，并重新实验。若找不出原因，应保留数据备考。3. 整个实验必须有室内质量控制，失控时必须重做。,实验数据的收集、处理和应用,4.检查每一方法内双份测定值有无离群表现。以4倍的各方法差值的均值为判断限，各方法内的成对差值都应在限值内，说明双份测定结果符合要求。5.将实验结果点画于X、Y座标纸上，图中标出斜率为1通过零点的直线，看图了解有无线性关系，有无明显离群点。,实验数据的收集、处理和应用,6.检查X、Y关系实验点有无离群表现：先看图有无明显离群点。若有，应对X、Y配对值作离群值计算。以4倍的平均差值为判断限，所有差值都不应超出限值。7.检查标本内分析物含量分布是否适当：影响r的因素一是实验点和回归线的离散程度，一是分析物含量分布宽度。一般要求r0.975或r20.95，认为X范围是合适的 (图1)。,实验数据的收集、处理和应用,8.线性回归统计： =bX+a b和a分别表示两种方法间的比例误差和恒定误差。 根据临床使用要求，可在各个临床决定水平浓度Xc处，了解Y方法引入后相对于X方法的系统误差（SE）。 SE= Yc-Xc ,实验数据的收集、处理和应用,9.以方法学比较评估的系统误差（SE）1/2CLIA 88允许误差或根据生物学变异设定的分析质量指标，认为系统稳定状态的系统误差属临床可接受低水平。10.使用2个及以上的医学决定水平浓度。若项目只有一个医学决定水